柱式腐殖酸清除劑

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1、CAT#:60801-30天CAT#:60801-100凈常溫運(yùn)輸及保存沙系列柱式腐殖酸清除劑ColumnHumicAcidErasol使用手冊(cè)V1.2北京天恩澤基因科技有限公司北京市海淀區(qū)上地信息路26號(hào)北京市留學(xué)人員海淀創(chuàng)業(yè)園中關(guān)村創(chuàng)業(yè)大廈506網(wǎng)址：www.tiandz.com；電話：400-6765278；電郵：order@tiandz.com產(chǎn)品及特點(diǎn)用絕大多數(shù)文獻(xiàn)報(bào)道的方法從土壤或湖海沉積物中提取的DNA都含有棕黑色或黑色的腐殖酸的污染，用天澤基因的土壤DNAOUT從泥碳（腐殖酸含量超過(guò)50%）等腐殖酸豐富的土壤樣品中提取的DNA也有腐殖酸污染，它們往往

2、對(duì)PCR等后續(xù)反應(yīng)有極大的抑制作用。本產(chǎn)品從天澤基因柱式DNABACK改進(jìn)而得，專門(mén)用于從土壤DNA樣品中清除腐殖酸污染。1.去污染效果好，能使腐殖酸的濃度降低10倍以上。2.DNA回收率高，一般都在80%以上。3.操作過(guò)程簡(jiǎn)單快速，只需要10分鐘。4.擴(kuò)容性好，可小規(guī)模操作，也可以大規(guī)模操作。5.處理后的樣品原液或稍微稀釋后即可用于PCR。規(guī)格及成分成份編號(hào)30次包裝100次包裝專用上柱液9mL30mL離心吸附柱6091130套100套通用洗柱液6040830mL100mLDNA洗脫液7070510mL5mL使用手冊(cè)60801sc1份1份運(yùn)輸及保存常溫運(yùn)輸及保存，

3、有效期一年。自備試劑無(wú)使用方法1.將0.3mL專用上柱液與50uL或50uL以下的含腐殖酸的DNA溶液輕柔混勻。如果DNA溶液體積超過(guò)50uL,專用上柱液的體積需按1:6(DNA溶液:專用上柱液)的比例相應(yīng)增加。不要?jiǎng)×艺鹗?，否則DNA容易斷裂。2.將離心管中的溶液轉(zhuǎn)移到離心吸附柱中，套上收集管，放于離心管架上，靜置3-5分鐘，12000-15000g離心1分鐘并倒掉收集管中的液體。若一次加不完，可分兩次加入并離心。3.加入0.5mL通用洗柱液于離心柱中，12000-15000g離心1分鐘，倒棄收集管中的廢液。4.重復(fù)第3步操作1次。5.12000-15000g離心

4、1分鐘以去除離心柱中的殘留液體。6.將離心柱置于一新的干凈的離心管（自備）中，加入50uL通用洗脫液，靜置3-5分鐘，12000-15000g離心1分鐘。7.離心管底部所得溶液即為純化的DNA溶液，可立即用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)或者放冰箱長(zhǎng)期保存。使用效果圖注：從泥碳(腐殖酸含量大于60%)中提取的DNA用本產(chǎn)品處理前(B)和處理后(A)的顏色對(duì)比。處理前OD340為4.0（4為所用分光光度計(jì)的上限，實(shí)際讀數(shù)可能遠(yuǎn)高于4），處理后降低到0.3。處理前的原液、10倍和100倍稀釋液均無(wú)PCR擴(kuò)增，而處理后均可以擴(kuò)增。疑難解答Q:如何判斷提取的ＤＮＡ沒(méi)有腐植酸污染？A：方法一是目測(cè)

5、法，即看得到的溶液是否無(wú)色。如果呈淡棕黑色或淡黃色，說(shuō)明可能是少量殘留的未除盡的腐植酸。方法二是檢測(cè)最大光吸收。注意：有腐植酸污染并不表示DNA不能使用，有的腐殖酸并不抑制PCR擴(kuò)增。Q:腐殖酸的最大吸收波長(zhǎng)是多少？A：腐植酸（humicacid）是一大類呈棕黑色或黑色的物質(zhì),其結(jié)構(gòu)千差萬(wàn)別，土壤中腐殖酸的組成和特點(diǎn)隨土壤不同而不同，所以其最大吸收波長(zhǎng)也各不相同。有的土壤的腐殖酸的最大吸收波長(zhǎng)在260nm（見(jiàn)Appl.Environ.Microbiol.,63：4993,1997），有的則在340nm，所以用特定的波長(zhǎng)測(cè)定OD值時(shí)波長(zhǎng)的選定要根據(jù)土壤而決定。Sigm

6、a,Fluka等公司出售的腐植酸產(chǎn)品成分一般比較簡(jiǎn)單，其最大吸收波長(zhǎng)不能推廣到成分更為復(fù)雜的土壤腐殖酸樣品。Q:是否腐植酸都會(huì)抑制后續(xù)的DNA反應(yīng)？A：否，因?yàn)楦菜崾且淮箢愇镔|(zhì)的統(tǒng)稱，他們的結(jié)構(gòu)和特性各不相同，所以是否對(duì)后續(xù)反應(yīng)有影響最好通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)驗(yàn)證。如果用提取的DNA溶液原液進(jìn)行反應(yīng)而反應(yīng)沒(méi)發(fā)生，而對(duì)照樣品（已知的不含污染的DNA）能夠發(fā)生，說(shuō)明可能有抑制作用。Q：除本方法外，還有什么有效方法去除DNA樣品中的腐植酸？A：可以先電泳，然后用超大片段膠回收試劑MagicGelDNABACK（CAT#：60706）純化DNA，如此得到的DNA原液一般可以直接擴(kuò)增。

7、Q：本產(chǎn)品與柱式DNABACK有何區(qū)別？A：本產(chǎn)品由柱式DNABACK改進(jìn)而來(lái)，主要區(qū)別一是使用了不同的上柱液，減少了硅膠膜對(duì)DNA的非特異吸附，更適用于微量DNA樣品；二是上柱液中含有腐殖酸去除試劑，適合于土壤DNA樣品。Q：在用土壤DNA進(jìn)行細(xì)菌專一性PCR時(shí)，為何沒(méi)加DNA模版的陰性對(duì)照有擴(kuò)增產(chǎn)物出現(xiàn)？A：這是由于使用的TaqDNA聚合酶一般從E.coli表達(dá)菌株中提取，提取過(guò)程中污染了E.coli的基因組DNA，而使用的廣譜細(xì)菌專一性引物可以識(shí)別所有細(xì)菌DNA基因組DNA模版，所以會(huì)產(chǎn)生擴(kuò)增。建議使用高質(zhì)量的TaqDNA聚合酶。技術(shù)資料腐殖酸及其特點(diǎn)腐植