脂肪干細(xì)胞向雪旺細(xì)胞誘導(dǎo)分化及組織工程化周圍神經(jīng)構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)研究

《脂肪干細(xì)胞向雪旺細(xì)胞誘導(dǎo)分化及組織工程化周圍神經(jīng)構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、萬方數(shù)據(jù)分類號(hào)：R318．08密級(jí)：學(xué)位類別：科學(xué)學(xué)位口專業(yè)學(xué)位團(tuán)學(xué)校代碼：1062學(xué)號(hào)：2011602291學(xué)科門類：醫(yī)學(xué)又坪鼉科鼻鼉制圳§麓黼躺l端滿k鼉?nèi)臁癜凄ㄥ鱏秘Y碩士學(xué)位論文MASTER’SDISSERTATIoN論文題目：脂肪干細(xì)胞向雪旺細(xì)胞誘導(dǎo)分化及組織工程化周圍神經(jīng)構(gòu)建的實(shí)驗(yàn)研究TITLEExperimentstudyonthecommitteddifferentiationofadipose-derivedstemcellsinvitroandusedintotissue-engineeredperipheralnerVeS一級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：外科學(xué)

2、骨外論文作者：趙斌指導(dǎo)教師：馬信龍教授導(dǎo)師組成員：李建江副主任醫(yī)師天津醫(yī)科大學(xué)研究生院二。一四年五月萬方數(shù)據(jù)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是我個(gè)人在導(dǎo)師指導(dǎo)下獨(dú)立進(jìn)行研究工作取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容和致謝的地方外，論文中-不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均己在論文中作了明確的說明并表示了謝意。學(xué)位論文作者簽名：建趔2日期：洌驢年婀形日學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解天津醫(yī)科大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)校有權(quán)將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，并采

3、用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編以供查閱和借閱。同意學(xué)校向國家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文，并編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫。保密口，在年解密后適用本授權(quán)書。本論文屬于不保密函。(請(qǐng)?jiān)谙鄬?duì)應(yīng)的方框內(nèi)打“√”)學(xué)位論文作者簽名：盎邀日期：砌晦廠月鈾學(xué)位論文作者簽名：鹺囟＆日期：砌怍歲月餾導(dǎo)師簽名：銣期：∥啊月詢?nèi)f方數(shù)據(jù)天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要目的：1．探討兔坐骨神經(jīng)損傷后內(nèi)源性堿性成纖維細(xì)胞生長因子(bFGF)、神經(jīng)生長因子(NGF)及腦源性神經(jīng)生長因子(brain-derivedneurotrophicfactor,BDNF)的變化規(guī)律：并研究兔坐骨神經(jīng)勻漿上清液對(duì)脂肪干細(xì)胞(adip

4、ose．derivedstemcells．ADSCs)的誘導(dǎo)分化作用。2．探討低滲聯(lián)合凍干技術(shù)改良制備脫細(xì)胞周圍神經(jīng)支架的可行性，檢測其理化性能。3．探討以改良脫細(xì)胞神經(jīng)支架復(fù)合ADSCs構(gòu)建組織工程化周圍神經(jīng)的可行性。方法：1．采用鉗夾法制作兔坐骨神經(jīng)損傷模型，分別于未損傷、損傷第3天、第7天及第14天取坐骨神經(jīng)制備組織勻漿，采用ELISA方法檢測坐骨神經(jīng)勻漿上清液中bFGF、NGF及BDNF的含量。分離、培養(yǎng)兔ADSCs，將第3代ADSCs分別采用各組坐骨神經(jīng)勻漿上清液培養(yǎng)，顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)變化，7天后通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測其向雪旺細(xì)胞定向分化的能力。2．采用低滲聯(lián)合

5、凍干技術(shù)對(duì)傳統(tǒng)脫細(xì)胞神經(jīng)支架材料進(jìn)行改良，脫細(xì)胞完成后采用病理HE染色、免疫熒光及掃描電鏡方法對(duì)其進(jìn)行組織學(xué)評(píng)估；利用Mimics軟件對(duì)其孔隙率及孔隙直徑進(jìn)行測量；采用EnduraTECELF3200力學(xué)儀器對(duì)其力學(xué)性能進(jìn)行測試；并采用MTT法檢測支架浸提液對(duì)ADSCs增殖的影響；Live／Dead染色觀察細(xì)胞在支架上的活性。3．在體式顯微鏡下，將第3代脂肪干細(xì)胞與改良脫細(xì)胞神經(jīng)支架采用顯微注射法進(jìn)行復(fù)合，構(gòu)建組織工程化周圍神經(jīng)，采用HE染色、掃描電鏡觀察細(xì)胞在支架上生長、存活情況。同時(shí)，將上述細(xì)胞進(jìn)行PKH26標(biāo)記，檢測PKH26標(biāo)記前后細(xì)胞生物學(xué)特性；將細(xì)胞以密度l×107

6、個(gè)／ml接種至支架上，細(xì)胞支架復(fù)合物體外培養(yǎng)1周后，將其植入裸鼠背部皮下：體內(nèi)培養(yǎng)4周后，采用小動(dòng)物活體熒光成像系統(tǒng)檢測體內(nèi)細(xì)胞支架復(fù)合物熒光分布情況；處死裸鼠，取出細(xì)胞支架復(fù)合體，將其冰凍切片后，熒光顯微鏡下觀察。結(jié)果：1．坐骨神經(jīng)損傷后bFGF、NGF及BDNF的分泌均隨損傷后時(shí)間的變化而波動(dòng)，均于第3．7天達(dá)到峰值，之后下降：ADSCs體外培養(yǎng)呈長梭形，增殖迅速，穩(wěn)萬方數(shù)據(jù)天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文定性好，經(jīng)損傷坐骨神經(jīng)勻漿上清液誘導(dǎo)后具有雪旺細(xì)胞樣形態(tài)；熒光定量PCR顯示：S．100蛋白基因表達(dá)量隨著損傷時(shí)間的延長呈上升趨勢，于損傷3天組及損傷7天組達(dá)到高峰(尸<0．05

7、)，之后緩慢下降。2．HE染色及掃描電鏡觀察顯示支架內(nèi)髓鞘、細(xì)胞及軸突等結(jié)構(gòu)均消失，可見平行排列的基底膜管；支架孔隙率為49．3％±9．8％，孔隙直徑為(17．6+3．7)lxrn；支架彈性模量為2．45±0．65MPa；經(jīng)MTT測定支架浸提液對(duì)細(xì)胞的增殖無影響；Live／Dead染色可見細(xì)胞在支架上生長良好。3．PKH26能有效標(biāo)記ADSCs，標(biāo)記率為95．12％，MTT檢測及成骨、成脂、成軟骨誘導(dǎo)結(jié)果顯示，PKH26標(biāo)記對(duì)細(xì)胞增殖及多向分化潛能沒有影響；細(xì)胞支架復(fù)合物裸鼠皮下培養(yǎng)4周后，