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《真鯛虹彩病毒lamp檢測(cè)方法的建立》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在工程資料-天天文庫(kù)。
1、2018年第35卷第1期真鯛虹彩病毒LAMP檢測(cè)方法的建立袁向芬，石素婷，呂繼洲，吳紹強(qiáng)（中國(guó)檢驗(yàn)檢疫科學(xué)研究院動(dòng)物檢疫研究所，北京 100176）摘 要：為建立一種檢測(cè)真鯛虹彩病毒的環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增（LAMP）方法，滿足口岸、養(yǎng)殖場(chǎng)對(duì)該病的快速監(jiān)測(cè)的需求，本研究比對(duì)分析了GenBank中公布的真鯛虹彩病毒基因組序列，篩選其主要衣殼蛋白MCP基因保守區(qū)序列，進(jìn)行LAMP引物設(shè)計(jì)，建立了真鯛虹彩病毒LAMP檢測(cè)方法。對(duì)擴(kuò)增條件進(jìn)行優(yōu)化，確定最佳反應(yīng)條件為62℃，45min。靈敏度試驗(yàn)結(jié)果顯示，該方法最低檢測(cè)限為1
2、00拷貝/μL目的基因。特異性試驗(yàn)結(jié)果顯示，該方法不與流行性造血器官壞死病毒（EHNV）、蛙病毒3型（FV3）、甲魚(yú)虹彩病毒（STIV）發(fā)生交叉反應(yīng)。結(jié)果表明，本研究建立的LAMP方法具有良好的敏感性和特異性。對(duì)5份疑似真鯛虹彩病毒感染的臨床樣品進(jìn)行檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)檢測(cè)結(jié)果與世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）推薦的PCR方法檢測(cè)結(jié)果符合率為100%。研究表明，本方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)，以及儀器設(shè)備簡(jiǎn)單、操作便捷、結(jié)果直觀等優(yōu)點(diǎn)，非常適合作為初篩手段，應(yīng)用于養(yǎng)殖場(chǎng)、口岸等一線的疫病監(jiān)測(cè)。關(guān)鍵詞：水生動(dòng)物疫??；真鯛虹彩病毒
3、；環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增；快速檢測(cè)中圖分類(lèi)號(hào)：S852.65 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1005-944X（2018）01-0095-05DOI：10.3969/j.issn.1005-944X.2018.01.026EstablishmentofLAMPforDetectionofRedSeaBreamIridovirusYuanXiangfen，ShiSuting，LüJizhou，WuShaoqiang（InstituteofAnimalQuarantine，ChineseAcademyofInspecti
4、onandQuarantine，Beijing100176，China）Abstract：TodevelopaLoop-mediatedisothermalampli?cation（LAMP）methodofRedseabreamiridovirus（RSIV）forrapidmonitoringofthediseaseatportofentryand?shery，theRSIVgenomesequencepublishedinGenBankwascomparedandanalyzed.Theconserva
5、tiveregionsequenceofthemaincapsidproteinMCPgenewasscreenedout，theLAMPprimersweredesigned，andLAMPfordetectionofRSIVwasestablished.Theconditionsofampli?cationwereoptimized，andthebestreactionconditionwas62℃，45min.Sensitivitytestresultsshowedthattheminimumdetec
6、tionlimitforthismethodwas100copies/μL.Speci?ctestresultsshowedthatthismethoddidnotcrossreactionwithEHNV，F(xiàn)V3andSTIV，withgoodsensitivityandspeci?city.Bydetectionof5clinicalsamples，resultsshowedthatthecoincidencerateofthetestresultswiththatofthePCRmethodrecomm
7、endedbyOIEwas100%.Thismethodwasarapid，simple，speci?candsensitiveassaywithsimpleinstrumentsandvisualizationresults，whichwassuitableforbeingusedasascreeningmethodformonitoringdiseasesatportsand?shfarms.Keywords：aquaticanimaldiseases；Redseabreamiridovirus；Loop
8、-mediatedisothermalampli?cation（LAMP）；rapiddetection真鯛虹彩病毒（Redseabreamiridovirus，年首次在日本四國(guó)島的人工養(yǎng)殖患病真鯛中被發(fā)RSIV）屬于虹彩病毒科（Iridoviridae）、細(xì)胞腫現(xiàn)[3]，主要感染真鯛、花鱸、條石鯛等30余種海[1-2]大病毒屬（Megalocytivirus）。該病毒于1990[4-5]水魚(yú)類(lèi)?；?/p>
