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《用于毛細(xì)管電泳分離dna及蛋白質(zhì)的準(zhǔn)互穿聚合物網(wǎng)絡(luò)的合成與表征》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要毛細(xì)管電泳和微芯片毛細(xì)管電泳取代傳統(tǒng)凝膠電泳，使用無(wú)交聯(lián)的高分子溶液作為無(wú)膠篩分介質(zhì)，成為一種高效、微量、高靈敏度及自動(dòng)化的分離分析方法，已在醫(yī)學(xué)、法醫(yī)鑒定、農(nóng)業(yè)等領(lǐng)域受到廣泛關(guān)注，是分離帶電生物大分子最有效、最廣泛的技術(shù)之一。目前，聚丙烯酰胺是無(wú)膠毛細(xì)管電泳分離DNA最好的篩分介質(zhì)，據(jù)報(bào)道在55分鐘內(nèi)可以對(duì)1000個(gè)堿基DNA進(jìn)行分離，讀寫準(zhǔn)確率高達(dá)98％。但是聚丙烯酰胺有兩個(gè)主要的缺點(diǎn)：①為了得到更高的DNA讀寫長(zhǎng)度，聚丙烯酰胺的分子量一般特別高，因而聚合物溶液的粘度也特別大；②聚丙烯酰胺對(duì)毛細(xì)管內(nèi)壁的涂敷能力非常弱，導(dǎo)致毛細(xì)管內(nèi)存在
2、很強(qiáng)的電滲流。在對(duì)牛物大分子分離時(shí)若單獨(dú)使用聚丙烯酰胺溶液必須事先對(duì)毛細(xì)管內(nèi)壁進(jìn)行涂敷。合成同時(shí)具有自涂敷能力，適宜的粘度，優(yōu)良篩分性能的聚合物是目前用于毛細(xì)管電泳分離生物大分子的介質(zhì)研究中的熱點(diǎn)。但目前合成的均聚物很少同時(shí)滿足上述條件，因此，由具有不同性質(zhì)的單體合成的無(wú)規(guī)共聚物、嵌段共聚物、接枝共聚物、共混聚合物、微交聯(lián)納米凝膠聚合物和準(zhǔn)互穿聚合物網(wǎng)絡(luò)被合成、設(shè)計(jì)用于分離牛物大分子。準(zhǔn)互穿網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)是由兩種或兩種以上聚合物相互貫穿而形成的聚合物網(wǎng)絡(luò)，制備過(guò)程一般是首先合成出一種聚合物A，再在聚合物溶液中引發(fā)聚合溶解在溶液中的另～單體B，就地聚合形成準(zhǔn)互穿網(wǎng)絡(luò)。聚合物形成
3、的網(wǎng)絡(luò)能夠減少宏觀相分離，形成的網(wǎng)絡(luò)結(jié)構(gòu)比聚合物共混方法形成的網(wǎng)絡(luò)更為穩(wěn)定，是目前由不同種類單體合成共聚物的較好的方法。在這篇論文中，我們合成了一種新的由聚丙烯酰胺與聚M羥甲基丙烯酰胺構(gòu)成的準(zhǔn)互穿聚合物網(wǎng)絡(luò)，這種聚合物網(wǎng)絡(luò)同時(shí)具有線形聚丙烯酰胺對(duì)DNA優(yōu)良的篩分性能和聚Ⅳ．羥甲基丙烯酰胺對(duì)毛細(xì)管內(nèi)壁動(dòng)態(tài)涂敷的能力。并討論了DNA測(cè)序溫度、毛細(xì)管內(nèi)測(cè)序電壓和準(zhǔn)互穿網(wǎng)絡(luò)中聚Ⅳ-羥甲基丙烯酰胺的含量對(duì)DNA測(cè)序的影響。用2．5％(w／v)的這種介質(zhì)在沒(méi)有對(duì)軟件系統(tǒng)優(yōu)化的情況下75分鐘內(nèi)對(duì)標(biāo)準(zhǔn)DNA的讀寫長(zhǎng)度高達(dá)1012個(gè)堿基對(duì)。另外我們還嘗試?yán)糜删€性聚丙烯酰胺與聚MⅣ’一二
4、甲基丙烯酰胺構(gòu)成的準(zhǔn)互穿網(wǎng)絡(luò)對(duì)毛細(xì)管進(jìn)行修飾，希望能在同一毛細(xì)管內(nèi)對(duì)酸性和堿性蛋白同時(shí)分離，因?yàn)檫@種互穿網(wǎng)絡(luò)中的線性聚丙烯酰胺具有很強(qiáng)的Ill親水性，能夠有效減少毛細(xì)管內(nèi)壁與蛋白間的疏水相互作用，而聚ⅣⅣ’一二甲基丙烯酰胺具有很強(qiáng)的動(dòng)態(tài)涂敷能力，能夠減少電滲流。但通過(guò)對(duì)空的毛細(xì)管涂敷前后電滲流和蛋白質(zhì)分離的電泳譜圖比較發(fā)現(xiàn)并沒(méi)有達(dá)到預(yù)期目的。關(guān)鍵詞：毛細(xì)管電泳，準(zhǔn)互穿網(wǎng)絡(luò)，線性聚丙烯酰胺，DNA測(cè)序，蛋白質(zhì)分離。中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)碩士學(xué)位論文ABSTRACTCapillaryelectrophoresis(CE)andmicrochipcapillaryelectroph
5、oresis(chip—CE)usingreplaceablepolymersolutionsasanalternativetoslab—gelelectrophoresishavebeendevelopedintopowerfultechnologiesfortheseparationofbiologicalmacromolecules．Thismethodologyoffershighsensitivity,fastseparation，highersamplethroughput，andfullyautomation，andwillfindwideapplicat
6、ionsinmedical，forensicsandagriculture．Todate，linearpolyacrylamide(LPA)showsthebestperformanceinDNAsequencing．ItwasabletOachieve1000basesin55minwith98％base-callingaccuracy．However，ithasbeenrecognizedthatLPAhastwomajordrawbacks，i．e．(i)high—molecularweightLPA，thatisusedtoincreasethereadleng
7、th，hasaveryhighviscosity,and(ii)itscoatingabilityispoor,leadingtoahighelectroosmoticflow(EOF)．Therefore．a(chǎn)coatedcapillarymustberequiredifonlyLPAhomopolymersareused．FurtherdevelopmentsonDNAseparationmedia，possessinghighsievingability，lowviscosityanddynamiccoatingability,wil
