臺(tái)灣蟲(chóng)草子實(shí)體的人工誘導(dǎo)培養(yǎng)-研究

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1、1文獻(xiàn)綜述蟲(chóng)草類真菌是一類多寄生于昆蟲(chóng)體上的真菌與其寄主昆蟲(chóng)形成的蟲(chóng)菌復(fù)合體，是一類具有復(fù)型生活史的真菌，在它們的生活史中有以分生孢子形成為基本特征的無(wú)性[1-3]生長(zhǎng)繁殖階段和以子座形成并產(chǎn)生子囊孢子為特征的有性繁殖階段。鑒于新的蟲(chóng)草分類系統(tǒng)尚不完善，本文仍采用舊的分類系統(tǒng)，蟲(chóng)草隸屬于真菌界Fungi、雙核亞界Dikarya、子囊菌門Ascomycota、盤(pán)菌亞門Pezizomycotina、糞殼菌綱Sordariomycetes、肉座菌亞綱Hypocreomycetidae、肉座菌目Hypocreales、蟲(chóng)草菌科Cordycipit

2、aceae、蟲(chóng)[4]草菌屬Cordyceps。據(jù)小林義雄和清水大典的統(tǒng)計(jì)，全球已報(bào)道的蟲(chóng)草種類約400多[5]種，而國(guó)際真菌名錄數(shù)據(jù)庫(kù)2011年列出的種名已達(dá)到534種，目前在中國(guó)報(bào)道的已[6-18]知蟲(chóng)草有139種，分布于29個(gè)省區(qū)，加上近幾年來(lái)發(fā)表的新種，約有150多種。1.1蟲(chóng)草屬真菌開(kāi)發(fā)應(yīng)用概況蟲(chóng)草屬真菌是一類重要的自然資源，它們?cè)卺t(yī)藥、保健品開(kāi)發(fā)、食品和飼料添加劑、調(diào)節(jié)生態(tài)系統(tǒng)平衡和生物防治等方面扮演著重要角色?，F(xiàn)代藥理研究表明，蟲(chóng)草含有蟲(chóng)草酸、蟲(chóng)草素、多糖及水溶性核苷類成分，主要集中在子座部分，具有擴(kuò)張氣管、鎮(zhèn)靜、降血壓、抗缺

3、氧、抗腫瘤等功能，其代謝產(chǎn)物中可產(chǎn)生許多重要的活性成[19-24]分，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。1.1.1蟲(chóng)草在醫(yī)藥、食品、保健品方面的應(yīng)用蟲(chóng)草屬的種類多為重要的食用、藥用真菌。在我國(guó)，蟲(chóng)草最早基本都是直接作為藥用，最著名的為冬蟲(chóng)夏草，此外還有蟬花、蛹蟲(chóng)草、大團(tuán)囊蟲(chóng)草、高雄山蟲(chóng)草等。冬蟲(chóng)夏草[Cordycepssinensis(Berk.)Sacc.]是世界上眾多蟲(chóng)草中最著名的一種，主要分布在我國(guó)青藏高原海拔500~5000m的高山灌叢草甸和高寒草甸帶地區(qū)，生長(zhǎng)極其緩慢，與鹿茸、人參齊名，作為一種傳統(tǒng)名貴中藥在我國(guó)由來(lái)已久。研究表明，冬蟲(chóng)夏草生

4、藥、液體發(fā)酵液和菌絲體中都含有豐富的活性物質(zhì)，包括蟲(chóng)草多糖、麥角醇、核苷酸、[25-32]氨基酸、維生素等，具有廣泛的藥理和免疫活性，因此冬蟲(chóng)夏草在國(guó)內(nèi)外廣受人們歡迎。由于蟲(chóng)草在代謝過(guò)程中產(chǎn)生許多生物活性物質(zhì)，可用于藥物和食品的研發(fā)利用，[33]是一個(gè)巨大的藥源寶庫(kù)，更引起人們較大的興趣。目前，國(guó)內(nèi)許多企業(yè)和科研機(jī)構(gòu)已開(kāi)發(fā)出多種藥品和膠囊，如心肝寶膠囊、百令膠囊、思?jí)严x(chóng)草膠囊等。韓國(guó)將高雄山蟲(chóng)草的無(wú)性型—細(xì)腳擬青霉作為功能食品開(kāi)發(fā)，大量投放市場(chǎng)。日本推出用日本蟻草培養(yǎng)生產(chǎn)的提高免疫力的功能食品。1.1.2蟲(chóng)草在調(diào)節(jié)生態(tài)平衡和生物防治方面的

5、應(yīng)用蟲(chóng)草是森林生態(tài)系統(tǒng)中一些有機(jī)物的分解者，在物質(zhì)循環(huán)中起著重要的作用，它們對(duì)生態(tài)系統(tǒng)和人類生產(chǎn)生活具有重要的意義。蟲(chóng)草可以調(diào)節(jié)森林中的節(jié)肢動(dòng)物的數(shù)1[34-36]量，對(duì)維持森林生態(tài)平衡起著明顯的作用。此外，蟲(chóng)草可為微生物殺蟲(chóng)劑廣泛用于生物防治。在上世紀(jì)50年代，科學(xué)家就用棒形蟲(chóng)草Cordycepsclavulata的無(wú)性型蠟蚧被毛孢Hirsutellalecaniicola人工培養(yǎng)防治核桃介殼蟲(chóng)獲得成功?，F(xiàn)在處于應(yīng)用階段的主要有白僵菌用于防治玉米螟、馬鈴薯象甲和松毛蟲(chóng)等；綠僵菌屬中的金龜子綠僵菌和黃綠綠僵菌分別用于防治白蟻和蝗蟲(chóng)等[37

6、,38]害蟲(chóng)；擬青霉屬中的玫煙色擬青霉防治粉虱、蚜蟲(chóng)、葉螨等。1.2蟲(chóng)草屬真菌無(wú)性型的研究概況蟲(chóng)草是一類重要的藥用真菌，它們能以兩種完全獨(dú)立的的生活方式存在，在其生活史中有以無(wú)性孢子（分生孢子）形成為基本特征的無(wú)性生長(zhǎng)繁殖階段和以子座形成并產(chǎn)生有性孢子（子囊孢子）為特征的有性繁殖階段。前者稱為無(wú)性型（anamorph），[39,40]后者則稱為有性型（teleomorph），它們可各自獨(dú)立循環(huán)生長(zhǎng)和產(chǎn)孢。但無(wú)論是在科學(xué)研究還是培養(yǎng)、生產(chǎn)蟲(chóng)草用于醫(yī)藥、食品、保健品、真菌殺蟲(chóng)劑及其它生產(chǎn)實(shí)踐應(yīng)用領(lǐng)域，都主要依賴于蟲(chóng)草的無(wú)性型做菌種。因此獲得純

7、培養(yǎng)的無(wú)性型菌種以及揭示與蟲(chóng)草有性型之間的相互對(duì)應(yīng)關(guān)系，不僅可以豐富、完善或修正蟲(chóng)草研究的內(nèi)容，[41,42]同時(shí)也為物種資源的有效保護(hù)和合理利用開(kāi)發(fā)奠定基礎(chǔ)。因此，加強(qiáng)無(wú)性型的學(xué)術(shù)研究，不僅有利于保護(hù)野生資源，而且更適合于工業(yè)化生產(chǎn)，具有十分重要的學(xué)術(shù)研究意義和實(shí)際應(yīng)用價(jià)值。1.2.1蟲(chóng)草采集和無(wú)性型分離在野外采集的蟲(chóng)草標(biāo)本要盡量新鮮，無(wú)雜菌生長(zhǎng)，它對(duì)于分離獲得確切無(wú)性型至關(guān)重要，在低溫下保濕迅速運(yùn)至實(shí)驗(yàn)室。對(duì)于沒(méi)有完全成熟的標(biāo)本可在實(shí)驗(yàn)室內(nèi)模擬原始生境進(jìn)一步培養(yǎng)至成熟，再行分離。一般來(lái)說(shuō)，蟲(chóng)草無(wú)性型的分離常采用以下兩種方法：[43]（

8、1）子囊孢子分離法：幾乎所有的蟲(chóng)草都能采用這種方法分離獲得其無(wú)性型，梁宗琦在分離古尼蟲(chóng)草時(shí)用到該方法，將采得新鮮完好的蟲(chóng)草先用自來(lái)水仔細(xì)洗去表面的土粒，勿使蟲(chóng)草破損,再用蒸餾水沖洗幾次，最后用