柞蠶蠶蟲草人工培養(yǎng)研究1

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1、柞蠶蟲草人工培育研究孟楠，李亞潔，李學軍，溫志新，石理鑫，米銳，孫永欣（遼宇省農(nóng)科院大連生物技術(shù)研究所，大連116024）摘要：選用感染力強、生產(chǎn)性能優(yōu)良的蛹蟲草菌種對柞蠶五齡幼蟲接種試驗，同時對培養(yǎng)基配方進行了篩選，通過采用不同接種方法，進行柞蠶蠶蟲草的人工培育研究，并培育出了優(yōu)良的蠶蟲草。關(guān)鍵詞：柞蠶蟲草培養(yǎng)寄主冬蟲夏草（Cordycessinensco）是最著名的蟲生真菌，但因其生活環(huán)境特殊，目前不能人工培育。人工培育的蛹蟲草,在營養(yǎng)價值、活性成分和醫(yī)療保健功效等方面，都和冬蟲夏草相似，但不像冬蟲夏草那樣需要特殊生存環(huán)境和專一寄主⑴。作為冬蟲夏草的代用品，目前

2、蛹蟲草的研究開發(fā)主要有發(fā)酵菌絲體、米飯子實體和蠶蛹蟲草三個方而[2]o我們在成功進行發(fā)酵培養(yǎng)、米飯培養(yǎng)和蠶蛹培養(yǎng)的基礎上，進行了以5齡柞蠶為寄主培育蠶蟲草的研究，以期找到新的寄主和最佳接種方式。而蠶幼蟲較蛹所需時間短,節(jié)省勞動力，成本低，可取得更可觀的經(jīng)濟效益，從而為蠶業(yè)發(fā)展開拓一個新的領域。1材料與方法1■1材料1.1.1五齡柞蠶購自遼寧莊河山區(qū)。1.1.2菌種蠶的生命力旺盛，對蟲草菌的抵抗力很強。培養(yǎng)蠶蟲草的第一個關(guān)鍵，是獲得對蠶感染力強且生產(chǎn)性能優(yōu)良的蟲草菌株（L1）。我所多年來致力于對北蟲草菌的研究，在反復篩選的基礎上進行馴化，獲得對蠶有良好感染力的菌株。該

3、菌株菌絲生長吒盛，見光轉(zhuǎn)色較快，栽培周期較短，子座較粗長，產(chǎn)量較高。以下各項試驗研究所用菌種，皆為該菌株。1.2方法1.2.1菌種研究1.2.1.1培養(yǎng)基篩選本試驗設4種母種培養(yǎng)基配方：①馬鈴薯200g,葡萄糖20g,MgSO.O.5g,KHP041.5g,VB^Omg,瓊脂20g;②馬鈴薯200g,葡萄糖20g,作者簡介：孟楠（1980-），女，遼寧沈陽人，研究實習員，聯(lián)系方式：0411-88225669Email:mona0408@163.com發(fā)表刊物：遼寧農(nóng)業(yè)科學2009年2期第63頁MgSO.O.5g,KI1PO41.5g,蛋白腺20g,VB^Omg,瓊脂

4、20g③馬鈴薯200g,葡萄糖20g,MgSO40.5g,KHP041.5g,牛肉膏20g,VB^Omg,瓊脂20g④馬鈴薯200g,葡萄糖20g,MgSO40.5g,KHPO41?5g,酵母粉20g,VB^Omg,瓊脂20g以上均為1000ml的用量，制作方法和接種操作均同普通培養(yǎng)基1.2.1.1菌種篩選菌種是蠶蟲草生長好壞的重要因素，我所除了精心篩選的菌種L1以外，還獲得從冰峪溝野生出土的菌種Ml,在對柞蠶蛹蟲草的培養(yǎng)試驗屮效果不錯，為獲得更優(yōu)秀的柞蠶蟲草，我們對L1與Ml菌種進行比較①L1菌種接種50頭，②Ml菌種接種50頭。穿刺蠶體接種，在同種培養(yǎng)條件下培養(yǎng)

5、，出草后觀察。1.2.1接種研究1.2.2.1接種方法我們選擇5齡桑蠶作寄主，一方面柞蠶在5齡時體大肥碩，所得蠶蟲草也大;另一方面此時的蠶還未吐絲，占體重40%左右的絲腺蛋白成為蟲草菌的營養(yǎng)，所得蠶蟲草的營養(yǎng)和活性成分最高。但5齡大蠶抗病力很強，很難接種感染蟲草菌。我們試驗了多種方法，以解決這一難題。①液體菌種噴灑蠶體；②液體菌種噴灑柞樹葉喂蠶；③液體菌種噴灑蠶體加柞樹葉；④固體菌種接觸蠶體；⑤液體菌種注射蠶體（2007/頭，針頭平行體表）；⑥液體菌種穿刺蠶體；1.2.2.2蠶體消毒處理接種方法采用菌液注射于穿刺，蠶體消毒采用75%灑精，工具注射針頭消毒釆用酒精燈灼

6、燒。1結(jié)果與討論2.1適宜培養(yǎng)基從表1可以看出，以配方②為最好，蟲草菌萌發(fā)最早，菌絲最旺盛，轉(zhuǎn)色最快，顏色最深，其次為配方③和配方④。配方①最差，說明配方①中營養(yǎng)成分不如其他配方適合蟲草菌，而該配方是最普通的蟲草菌配方。配方②中有高含量的蛋白腺，它正好滿足蟲草菌的營養(yǎng)需要。配方③中動物蛋白較配方③太過多，故而造成徒長;配方④雖無動物蛋口，但效果也較好，說明蟲草菌并非一定要動物源營養(yǎng)成分，酵母中也存在有于蟲草菌生長的因子。表1母種培養(yǎng)基接種蟲草菌后的表現(xiàn)光照轉(zhuǎn)色顏色培養(yǎng)基接種后菌絲生長情況編號2d7d15d①②③未萌發(fā)全部萌發(fā)萌發(fā)萌發(fā)旺盛較旺盛不旺盛很旺盛滿管旺盛未滿

7、色色齟轉(zhuǎn)d8d色6第轉(zhuǎn)第色色色黃紅黃④萌發(fā)較旺盛旺盛未滿第4d轉(zhuǎn)色橙黃色注:光照從第10d開始,采用日光燈人壬光照，每天12ho2.2適宜菌種篩選從表2可以看出馴化菌種L1菌絲生長旺盛，見光轉(zhuǎn)色較快，栽培周期較短；野生菌種Ml見光轉(zhuǎn)色較慢，栽培周期較長，但經(jīng)7d后子座較L1粗長，產(chǎn)量也較高，生長較旺盛說明野生菌株還有待馴化后可以變成生長力較強，適應栽培環(huán)境的好菌株。表2蠶接種兩種菌種后的各H表現(xiàn)菌種接種后菌絲生長情況光照轉(zhuǎn)色成草后蟲草狀態(tài)7d15d30d40dL1萌發(fā)全部萌發(fā)很吒盛停止生長15d轉(zhuǎn)色菌絲長2.5cm一3.5cm直徑2mm左右橙黃Ml未萌發(fā)萌發(fā)全部