tgf―α、mmp―9和p16在膽脂瘤型中耳炎中表達(dá)和意義

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1、TGF—a、MMP-9和P16在膽脂瘤型中耳炎中表達(dá)和意義【摘要】目的通過觀察轉(zhuǎn)化生長因子-a(transforminggrowthfactoralpha,TGF-a)、基質(zhì)金屬蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase~9,MMP-9)＞細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子16(P16)在中耳膽脂瘤上皮中的表達(dá)情況，分析TGF-a、MMP-9及P16之間的相關(guān)性，探討TGF-a、MMP-9、P16對(duì)中耳膽脂瘤侵襲能力的影響。方法收集膽脂瘤型中耳炎病人手術(shù)新鮮標(biāo)本60例，并以20例外耳道皮膚(externalearcanalskin,EACS)作為對(duì)

2、照，迅速固定，制成石蠟切片，同時(shí)觀察病人的骨質(zhì)破壞程度。采用免疫組化技術(shù)，檢測(cè)探討轉(zhuǎn)化生長因子(transforminggrowthfactoralpha,TGF-a)、基質(zhì)金屬蛋白酶一9(Matrixmetalloproteinases-9,MMP-9)與P16在60例膽脂瘤中的表達(dá)，同時(shí)觀察三者的表達(dá)與骨質(zhì)破壞程度的相互關(guān)系，探討膽脂瘤骨質(zhì)破壞的可能發(fā)生機(jī)制。結(jié)果膽脂瘤中耳炎患者較對(duì)照組皮膚中TGF-a.MMP-9及P16的表達(dá)有顯著性差異。結(jié)論TGF-a與MMP-9兩者存在正相關(guān)，在膽脂瘤上皮中高表達(dá)，與膽脂瘤的侵襲能力及骨質(zhì)破壞程度密切相關(guān)，P16在膽

3、脂瘤上皮的高度表達(dá)與侵襲能力無相關(guān)性，可能是抑制上皮高度增殖的原因之一。【關(guān)鍵詞】膽脂瘤，中耳；轉(zhuǎn)化生長因子-a；基質(zhì)金屬蛋白酶-9;細(xì)胞周期蛋白依賴性激酶抑制因子16【中圖分類號(hào)】R764【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1004-4949(2013)07-01-02膽脂瘤中耳炎以中耳腔內(nèi)存在大量高度增殖的角化鱗狀上皮為主要的病理特征，對(duì)鄰近骨質(zhì)的侵襲及破壞是其嚴(yán)重的臨床特征［1］,可引起聽力下降，造成嚴(yán)重的顱內(nèi)外并發(fā)癥［2］,手術(shù)［3］切除是目前為止唯一有效的治療方法。但手術(shù)存在一定的復(fù)發(fā)率及并發(fā)癥，且部分患者術(shù)后聽力無法恢復(fù)甚至進(jìn)一步下降，TGF-a、MMP-

4、9及P16在膽脂瘤中耳炎患者中高表達(dá)，因此本研究采用免疫組化技術(shù)和計(jì)算機(jī)圖像定量分析系統(tǒng)法檢測(cè)TGF-a、MMP-9及P16在中耳膽脂瘤上皮細(xì)胞中的表達(dá)，并與正常外耳道皮膚作比較，從細(xì)胞因子及細(xì)胞周期調(diào)控的角度探索膽脂瘤型中耳炎發(fā)病機(jī)制，為臨床治療提供提供一個(gè)新思路。1材料與方法1.1對(duì)象：60例中耳膽脂瘤標(biāo)本均來源于2009年10月-2011年10月新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院耳鼻喉科住院手術(shù)的膽脂瘤型中耳炎患者，并均被該院病理科病檢所證實(shí)。60例膽脂瘤患者中，男34例，女26例，年齡15?60歲，平均年齡40.70±1.18歲。其中20例膽脂瘤患者術(shù)中同時(shí)取外耳

5、道骨段皮膚，作為正常對(duì)照。標(biāo)本于術(shù)中取出后立即用10%福爾馬林固定，常規(guī)石蠟包埋，作3?4um厚的連續(xù)切片。1.2試劑：兔抗人TGF-a多克隆抗體：武漢博士德生物工程有限公司；兔抗人MMP-9多克隆抗體：北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司；兔抗人P16多克隆抗體：武漢博士德生物工程有限公司；PV6000試劑盒；抗體稀釋液；DAB顯色試劑盒。1.3實(shí)驗(yàn)方法：標(biāo)本采集后進(jìn)行HE常規(guī)染色及免疫組化染色前制備，制備好的每例標(biāo)本隨機(jī)抽取相鄰連續(xù)切片分別作HE常規(guī)染色及TGF-a、MMP-9及P16免疫組化染色，觀察這三種基因在實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組中的表達(dá)情況，整個(gè)染色步驟嚴(yán)格按照試

6、劑盒產(chǎn)品說明書進(jìn)行。1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：中耳膽脂瘤上皮與正常人外耳道皮膚之間TGF-a、MMP-9及P16表達(dá)陽性率的比較用四格表x2檢驗(yàn)。兩兩指標(biāo)間相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn)，TGF-a.MMP-9.P16與中耳膽脂瘤侵襲能力的關(guān)系用Spearman等級(jí)相關(guān)分析。檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05,以P0.05）。3討論3.1TGF-a在有絲分裂原表皮生長因子（EGF）家族中是一種重要的生長因子，能誘導(dǎo)人類角質(zhì)細(xì)胞的增生、分化[4],在許多鱗狀細(xì)胞癌及上皮增生性疾病中都發(fā)現(xiàn)有TGF-a,在60例膽脂瘤上皮組織中呈中等陽性或強(qiáng)陽性反應(yīng)，在20例外耳道皮膚組織呈弱

7、陽性表達(dá)，兩組間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P3.4pl6基因又叫MTS(multipletumorsuppressor1)基因，是美國Kamb等于1994年發(fā)現(xiàn)的新抗癌基因，直接參與細(xì)胞周期中的一種基本基因，參與調(diào)控細(xì)胞周期，可以阻止細(xì)胞進(jìn)入S期，負(fù)調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖及細(xì)胞分裂，本實(shí)驗(yàn)?zāi)懼錾掀づc外耳道正常上皮中P16的陽性表達(dá)分別為65%及10%,二者之間表達(dá)差異[11]有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。說明膽脂瘤細(xì)胞具有高凋亡特性，P16在膽脂瘤上皮的高度表達(dá)可能是抑制上皮高度增殖的原因之一?？傊?，在膽脂瘤形成過程中高增殖與高凋亡同時(shí)存在，兩者達(dá)到新的平衡，死亡細(xì)胞增多從而產(chǎn)生更多的角化物

8、碎屑，排出受阻最終堆積形成膽脂瘤。膽脂