nf-κb及其調(diào)控mirna在宮頸癌移植瘤及癌旁組織中活化和表達(dá)

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1、摘要目的：研究宮頸癌移植瘤小鼠的癌與癌旁組織中miR一15b，miR．16的表達(dá)狀況以及NF．v．B信號(hào)通路在宮頸癌癌旁組織活化情況，為宮頸癌的早期診斷和治療提供新思路。方法：采用小鼠宮頸癌U14細(xì)胞懸液建立小鼠腹水瘤模型，傳3代后將腹水瘤細(xì)胞接種于30只昆明小鼠右側(cè)腋窩皮下建立皮下移植瘤模型。待瘤塊直徑大小為1．5cm×1．5cm時(shí)(約15日后)，將其頸椎脫臼處死，取癌組織與距離癌組織2cm以上的癌旁組織，以及正常的脂肪組織，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測(cè)各標(biāo)本中miR．15b，miR．16的表達(dá)狀況，利用免疫組化檢NNF．v．B(p65)蛋白在各組織中細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核的表

2、達(dá)及定位情況。結(jié)果：1．U14細(xì)胞懸液接種于雌性昆明小鼠腹腔，2周后腹水瘤模型成功建立，取其腹水瘤細(xì)胞建立皮下移植瘤模型，2周后成瘤率100％，移植瘤切片行HE染色，可見(jiàn)宮頸癌細(xì)胞浸潤(rùn)皮下脂肪生長(zhǎng)，造模成功。2．實(shí)時(shí)定量檢測(cè)miR．15b和miR．16在宮頸癌組織及癌旁組織的表達(dá)情況，miR．15b在宮頸癌組織中表達(dá)為32．21+3．67，明顯高于癌旁組織的25．16+1．86和正常組織的1．00(尸<0．05)，癌旁組織也顯著高于正常組織(尸

3、0．05)，癌旁組織也顯著高于正常組織(尸<0．05)。3．免疫組織化學(xué)顯示在正常脂肪組織中，NF．rd3(p65)蛋白主要定位于胞漿，而在癌組織與癌旁組織中，NF．v．B(p65)蛋白主要位于胞核。宮頸癌組織中NF．v．B(p65)蛋白的表達(dá)顯著高于癌旁組織和正常組織(P

4、：宮頸癌；NF．KB；miRNA．15b；miRNA．16AbstractABSTRACTObjective：ToinvestigatetheexpressionofmiR·-15bandmiR·-16aswellasthestatusofNF-心signalinginxenograftedcervicalcanceranditsadjacenttissues，whichwillprovidenewinsightfortheearlydiagnosisandtreatmentofcervicalcancer．Methods：MicecervicalcancerU14cell

5、ssuspensioninjectedinKunmingmiceabdomentoestablishascitestumormodel．Afterthreegeneration，usingascitescellstoestablishtumor-bearingmousemodelinfightarmpitofthirtyKunmingmice．Whenthexenograftsgrownto1．5cmx1．5cm(aboutl5days)．xenograftedcanceranditsadjacenttissues．normalfattissueswerecollected

6、respectively．TheexpressionofmiR一15bandmiR一16weredetectedbyreal—timePCR．TheexpressionandsublocationofNF-KB(p65)Wasanalyzedbyimmunohistochemistrytechnology．Results：1．MicecervicalcancerU14cellssuspensioninjectedinKunmingmiceabdomen，aftertwoweeks，themodleofascitestumoraresuccessful．Thenusingas

7、citescellstoestablishsubcutaneouslytumor-beatingmousemodel．Aftertwoweeks，therateoftumorare100％．HEstainingofthexenograftindicatedthatthemodelissuccessful．2．Real-timePCRanalysisshowedthatthemiR-15blevelsinthecancerare32．21+3．67，whichsignificanthigherthanitsadjac