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《bmscs移植促進脊髓損傷后神經(jīng)功能恢復作用的實驗研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學術(shù)論文-天天文庫。
1、河北醫(yī)科大學碩士學位論文BMSCs移植促進脊髓損傷后神經(jīng)功能恢復作用的實驗研究姓名：史然利申請學位級別：碩士專業(yè)：外科學指導教師：劉長安；張衛(wèi)平201203中文摘要BMSCs移植促進脊髓損傷后神經(jīng)功能恢復作用的實驗研究摘要目的：隨著社會發(fā)展及交通工具的進步，高處墜落傷或車禍傷所致的脊髓損傷(spinacordinjury,sct)已經(jīng)成為危害人類健康的常見病。其給人們帶來了沉重的經(jīng)濟負擔和精神壓力?，F(xiàn)在臨床上的治療手段所取得的效果有限，患者仍然不同程度出現(xiàn)了嚴重并發(fā)癥及后遺癥。近年來，干細胞的介入治療SC
2、I成為方興未艾的研究熱點。干細胞(stemcells，SCs)，是指既有保持多向分化為各種細胞的能力，又有自我更新能力的細胞，許多組織和胚胎等都有存在SCs。其多向分化能力可以“不對稱分裂產(chǎn)生除其自身以外的細胞”，可分為胚胎干細胞和成體干細胞，其中成體干細胞主要包括有間充質(zhì)干細胞(mesenchymalstemcells，MSCs)、神經(jīng)干細胞，脂肪干細胞，肌源性干細胞等。其中骨髓來源的MSCs(bonemarrowmesenchymalstemcells，BMSCs)，即骨髓間充質(zhì)干細胞，是最新研究的一
3、個熱點。其具有來源廣泛，培養(yǎng)分離簡單，經(jīng)濟實用性，低免疫原性，多向分化性及遺傳性狀穩(wěn)定等，成為干細胞研究的首選種子細胞之一，另外BMSCs可顯示神經(jīng)細胞的一些形態(tài)特征和表達一些標志性蛋白，這為多種神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療提供了新思路。不可否認的是BMSCs治療脊髓損傷的機制并沒有統(tǒng)一的結(jié)論。在動物實驗研究中一直存在不能活體動態(tài)檢測移植干細胞的困難，而隨著分子影像學(molecularimaging，Ⅶ)出現(xiàn)，特別是磁共振(magneticresonanceimaging，Mm)的出現(xiàn)，由于其理論上可以達到提供理
4、想的分辨率(單個細胞水平)，而這使得借助MRI對比劑使對干細胞的活體動態(tài)檢測成為現(xiàn)實。目前應用的MRI對比劑主要有兩種：①主要產(chǎn)生T1正性對比效應的釓(Gadolinium，Gd)類對比劑；②主要產(chǎn)生強T2負性對比效應的，以單晶體或多晶體氧化鐵為基礎的鐵類對比劑，目前多是以超順磁性氧化鐵(superparamagneticironoxide，SPIO)為代表。因為其具有對外加磁場高度敏感性，理論上實現(xiàn)了SPIO標記的單個干細胞就可以被檢測出來，故而被多數(shù)實驗研究所采用。SPIO標記的干細胞在外加磁場的作用
5、下呈現(xiàn)T2低信號影，故適合T2WI或T2*WI序列掃描的，而非T1序列。本實驗就中文摘要是為了進一步證實BMSCs的標記和活體示蹤，及BMSCs在治療SCI中所可能起到的作用等方面，并為以后進一步深入研究關(guān)于如何妥善解決BMSCs定向分化問題和可能隨時間延長而逐漸減弱的分化能力；如何進一步研究相關(guān)信號轉(zhuǎn)導通路在軸突再生中所形成功能性橋接的機制；如何明確分化的神經(jīng)樣細胞能起神經(jīng)元細胞作用等課題做好基礎性研究。方法：體外行BMSCs培養(yǎng)，聯(lián)合應用SPIO及多聚左旋賴氨酸(poly—L-lysinehydrob
6、romide，PLL)標記BMSCs(SPIO-BMSCs)。新西蘭大白兔40只是，隨機分為2組(A組：脊髓損傷組；B組：細胞移植組，即脊髓損傷后7天后行BMSCs移植)，A組行T9水平的椎管切開暴露硬脊膜后，打擊重量2009cf(gram*centimeter*force)，根據(jù)Alien重物打擊法行脊髓損傷模型的制作，留觀察對照用。B組脊髓模型制作完成后7天，于T9脊髓損傷節(jié)段上、下位0．5cm處用5ul微量注射器以與損傷脊髓水平面呈30度角刺入脊髓組織1．5Hun，停針約1min后，勻速緩慢注入2u
7、lBMSCs懸液，明膠海綿覆蓋硬脊膜并逐層縫合切口至皮膚。術(shù)后1W、2W、3W、5W、7W連續(xù)進行改良Tadov法和斜板試驗的行為學積分觀察，統(tǒng)計學積分分析采用SPSSll．0軟件，所有數(shù)據(jù)用均數(shù)±標準差(Mean+SD)表示。當P<0．05時，認為統(tǒng)計學上有意義。并于1W、3W、5W行3．0TMR檢查，術(shù)后7W時行脊髓石蠟包埋，病理組織切片及HE染色觀察組織形態(tài)學。結(jié)果：(1)3．0MRI顯示，干細胞移植組在移植干細胞當天的移植處，借助梯度回波序列(GRE)T*2WI序列呈低信號影，第14天時GRET*
8、2WI序列顯示低信號向損傷區(qū)遷移，5W后SPIO．BMSCs的T2信號影有所減弱。(2)移植后1W和2W行為學積分A組與B組無明顯差異；3W、4W、5W行為學積分顯示A組與B組運動功能均有不同恢復，但A組恢復慢，且有限，組間行為學積分有統(tǒng)計學意義(p
