骨髓間充質干細胞移植促進大鼠損傷脊髓的功能恢復

《骨髓間充質干細胞移植促進大鼠損傷脊髓的功能恢復》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。

1、中國醫(yī)科大學碩士學位論文骨髓間充質干細胞移植促進大鼠損傷脊髓的功能恢復姓名：刁延娜申請學位級別：碩士專業(yè)：發(fā)育生物學指導教師：龐希寧20050501中國醫(yī)科大學研究生學位論文獨創(chuàng)性聲明本人申明所呈交的學位論文是我本人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得我?；蚱渌逃龣C構的學位或證書而使用過的材料，與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。申請學位論文與資料若有不實之處，本人承擔一切相關責任。論文作者簽名：韭}日期：—窒壁址中國醫(yī)科

2、大學研究生學位論文版權使用授權書本人完全了解中國醫(yī)科大學有關保護知識產(chǎn)權的規(guī)定，即：研究生在攻讀學位期間論文工作的知識產(chǎn)權單位屬中國醫(yī)科大學。本人保證畢業(yè)離校后，發(fā)表論文或使用論文工作成果時：署名單位為中國醫(yī)科大學，且導師為通訊作者，通訊作者單位亦署名為中國醫(yī)科大學。學校有權保留并向國家有關部門或機構送交論文的復印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。學校可以公布學位論文的全部或部分內(nèi)容(保密內(nèi)容除外)，以采用影印、縮印或其他手段保存論文。論文作者簽名：指導教師簽名：中文論著摘要骨髓間充質干細胞移植促進大鼠損傷脊髓的功能恢復目的既往認為中樞神經(jīng)系統(tǒng)神經(jīng)元一旦損傷不能再生，尤其是哺乳類

3、動物脊髓內(nèi)的神經(jīng)元缺乏再生能力。然而，上世紀80年代始，有研究表明移植外周神經(jīng)和胎髓能促進脊髓損傷軸突的再生。以后，諸多實驗顯示了脊髓損傷后可能會再生。而骨髓間充質干細胞(mesenchymalstemceHs，MSCs)因具有多向分化的潛能、在一定條件下可分化為神經(jīng)元樣細胞，且易于提取、分離等特點，已成為細胞替代治療的新來源。有報道，將大鼠MSCs移植到脊髓挫裂傷的大鼠體內(nèi)，顯示了明顯的功能恢復。研究者直接地或將大鼠MSCs與神經(jīng)球細胞共培養(yǎng)后，通過局部點注射的方式移植進大鼠損傷的脊髓內(nèi)，發(fā)現(xiàn)實驗組大鼠的后肢運動功能比對照組恢復明顯，形態(tài)學檢測顯示移植的MSCs位于損傷區(qū)中心

4、，且朝向損傷中心牽拉宿主組織，阻止脊髓空洞的形成。雖然諸多研究表明MSCs可部分修復損傷脊髓的解剖連接，但目前仍無充分結果說明MSCs能夠恢復損傷脊髓的傳導功能。為此，我們首先建立了大鼠脊髓半橫斷損傷模型，通過將MSCs移植到受損區(qū)，探討MSCs在脊髓傳導功能損傷修復中的作用，進一步探索MSCs替代治療的可行性，為治療中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷提供理論依據(jù)。方法1、大鼠MSCs的分離培養(yǎng)和鑒定1．1在無菌條件下取Wistar大鼠股骨和脛骨骨髓細胞做原代培養(yǎng)。1．2根據(jù)細胞貼壁性能不同，篩選易貼壁但貼壁不牢的細胞進行傳代培養(yǎng)?！·1．3免疫細胞化學染色法鑒定MSCsCIM5和CD90的表

5、達情況。2、BraU(5’一溴脫氧尿苷)體外標記MSCs3、MSCs移植3．I制備大鼠脊髓左側半橫斷損傷模型。3．2實驗組12只：術后立即向損傷區(qū)遠端注射MSCs，對照組12只：注射等量磷酸緩沖鹽溶液。4、移植后鑒定4．1采用BBB評分系統(tǒng)評估大鼠行為學改變。4．2心臟灌流固定大鼠脊髓組織。4．3免疫組織化學染色法觀察BrdU標記的MSCs在脊髓損傷處存活情況。4．4取材前48小時行辣根過氧化物酶(HRP)逆行示蹤。4．5HRP示蹤結果觀察脊髓損傷處神經(jīng)通路的重構建。4．6皮層體感誘發(fā)電位(CSEP)測定脊髓損傷處神經(jīng)通路傳導功能的恢復。4．7統(tǒng)計學分析。結果1、免疫細胞化學染

6、色檢測傳代培養(yǎng)的MSCs標志物表達：CD45(一)，CD90(+)。2、術后實驗組大鼠后肢運動功能比對照組恢復明顯，l周、2周、3周、4周，8周BBB評分均高于對照組。3、術后1周行石蠟切片，免疫組織化學染色結果顯示在實驗組大鼠脊髓損傷區(qū)遠端檢測到BrdU陽性細胞。4、術后2個月行冰凍切片，在實驗組大鼠的損傷脊髓近端的腹側角檢測到HRP陽性細胞，而于對照組大鼠未檢測到HRP陽性細胞。5、術后2個月行CSEP測定，實驗組大鼠的CSEP波形恢復但波幅減低，潛時期延長，對照組大鼠未見CSEP產(chǎn)生?！?·結論l、通過損傷后立即局部注射的方式將MSCs移植進脊髓損傷區(qū)，MSCs可在損傷區(qū)

7、存活。2、存活的MSCs可分化為神經(jīng)元，在損傷局部形成神經(jīng)元通路，使損傷脊髓的遠端和近端建立聯(lián)系，從而促進：脊髓神經(jīng)纖維傳導功能恢復。也可能促進了損傷的神經(jīng)細胞軸突的再生。關鍵詞骨髓間充質干細胞；脊髓損傷；移植·3”r甄謠磊i?)Transplantationofbonemarrowmesench，‘malstemcellspromotefimctionalrecoveryoftheinjuredratsspinalcordPurposeItwaspreviouslyknownthatthe