egf與bfgf在人牙髓干細胞增殖分化中的作用

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1、瀘州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文EGF與bFGF在人牙髓干細胞增殖分化中的作用姓名：吳桂堂申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：劉興容201204。EGF與bFGF在人牙髓干細胞增殖分化中的作用摘要、目的：人牙髓干細胞(humanDentalpulpStemCells，hDPSCs)和大多數(shù)干細胞一樣，具有多向分化潛能，形成新的功能細胞，從而保持牙齒組織生長和衰退的動態(tài)平衡，研究發(fā)現(xiàn)在牙本質(zhì)的發(fā)生、牙齒的發(fā)育及牙髓損傷修復(fù)過程中均存在牙髓細胞的增殖、分化及多種生長因子的表達上調(diào)。表皮生長因子(epidermalgrowthfactor,EGF)、堿性成纖維生長N子(basic

2、fibroblastgrowthfactor,bFGF)在hDPSCs增殖分化中的作用在國內(nèi)外報道較少，本實驗在體外分別觀察EGF、bFGF以及二者共同作用對hDPSCs的增殖和分化的影響，進一步探討EGF、bFGF促進hDPSCs增殖與分化的可能機制，從而為hDPSCs移植促進牙齒的再生提供一定的實驗基礎(chǔ)與理論依據(jù)。方法：1對凍存的hDPSCs常規(guī)細胞復(fù)蘇、培養(yǎng)24小時，分為實驗組和對照組，在實驗組中將生長因子EGF、bFGF按不同濃度(5、10、20、50、100ng／m1)分別加入hDPSCs培養(yǎng)板孔中，對照組不加任何生長因子，每組設(shè)5個復(fù)孔，4天后采用四甲基偶氮唑鹽

3、(MTT)法于波長490nm測光密度(OD)值，比較不同濃度EGF、bFGF的對hDPSCs增殖的影響，確定刺激hDPSCs增殖的最大效應(yīng)濃度；2取傳代培養(yǎng)的hDPSCs，按1x104／ml濃度接種培養(yǎng)，24小時后換液，將最大效應(yīng)濃度的生長因子加入實驗組(EGF組、bFGF組、EGF+bFGF組)中，對照組(不加任何因子)，每組設(shè)5個復(fù)孔，分別在加入生長因子后的第0、1、3、5、7d，測其OD值，分析各組hDPSCs增殖的情況；3常規(guī)復(fù)蘇培養(yǎng)凍存的hDPSCs，實驗分組同上，分別將最大效應(yīng)濃度的EGF、bFGF、EGF+bFGF加入各組hDPSCs培養(yǎng)基中并分別于I、3、5

4、、7、14天，測定hDPSCs的堿性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)活性，進一步分析EGF、bFGF、EGF+bFGF在hDPscs分化中的作用。4．統(tǒng)計分析實驗結(jié)果采用SPSSl7．0統(tǒng)計軟件進行處理，實驗數(shù)據(jù)均以均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差(i±s)表示，P<0．05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果：1．EGF、bFGF最大有效濃度分別為：50ng／ml、20ng／ml；2．(1)在o～7天內(nèi)實驗組和對照組的OD值隨時間延長而增大；(2)EGF組、bFGF組在加入生長因子后OD測定值在的第0、1天與對照組相比變化不明顯，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0．05)，第3、5、7天OD

5、值顯著增加，高于對照組，有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0．05)；(3)EGF+bFGF組在加入生長因子后的第0、1天OD值與EGF、bFGF組及對照組相比變化不明顯，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0．05)，加入生長因子后的第3、5、7天OD值均高于EGF、bFGF組和對照組，有統(tǒng)計學(xué)意義(尸O．05)，在第5、7、14天ALP活性高于對照組，有統(tǒng)計學(xué)差異(尸

6、尸>O．05)；(4)EGF+bFGF組在加入生長因子后的第1、3天ALP活性與EGF、bFGF組相比無明顯差異(尸>0．05)，加入生長因子后的第5、7、14天ALP活性均高于EGF、bFGF組，但與EGF組無統(tǒng)計學(xué)意義(尸>0。05)。結(jié)論：1生長因子EGF和bFGF最大效應(yīng)濃度分別為：50ng／ml、20ng／ml；2生長因子EGF能有效促進hDPSCs增殖與分化，生長因子bFGF能促進hDPSCs增殖，對hDPSCs分化作用不明顯；3EGF、bFGF在促hDPSCs的增殖可能具有相互協(xié)同或疊加的作用，而在分化方面無協(xié)同作用。關(guān)鍵詞：牙髓干細胞；表皮生長因子；堿性成纖

7、維生長因子；增殖；分化；堿性磷酸酶TheEfiectofEGFandbFGFontheProliferationandDifferentiationofHumanDentalpulpStemCellsAbstractObjective：Justlikemostofthestemcells，humandentalpulpstemcells(hDPSCs)havecapacityofmulti—potentialdifferentiation．Theycanformnewfunctionalcellstokeepthe