hccr在肝細胞癌變過程中的作用及其分子機制研究

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1、AthesissubmittedtoZhenforthedegreeofTheroleandMechanismofHCCRintheprogressionofLiverCellcancerationByHongfeiZhangSupervisor：Prof．KaijuanWangDepartmentofEpidemiologyandBiostatisticsCollegeofPublicHealthJun20l2ZUl：z原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的學位論文，是本人在導師的指導下，獨立進行研究所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不包含任

2、何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究作出重要貢獻的個人和集體，均已在文中以明確方式標明。本聲明的法律責任由本人承擔。學位論文作者：日期：年月日學位論文使用授權(quán)聲明本人在導師指導下完成的論文及相關(guān)的職務(wù)作品，知識產(chǎn)權(quán)歸屬鄭州大學。根據(jù)鄭州大學有關(guān)保留、使用學位論文的規(guī)定，同意學校保留或向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復印件和電子版，允許論文被查閱和借閱；本人授權(quán)鄭州大學可以將本學位論文的全部或部分編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或者其他復制手段保存論文和匯編本學位論文。本人離校后發(fā)表、使用學位論文或與該學位論文直接相關(guān)的學術(shù)論

3、文或成果時，第一署名單位仍然為鄭州大學。保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定。學位論文作者：日期：年月日摘要原發(fā)性肝細胞癌(hepatoceilularcarcinoma，HCC)是中國最常見的惡性腫瘤之一，其預后極差，發(fā)病機制尚不明確，對肝癌發(fā)生的分子機制研究一直為學者們探索的熱點問題。人宮頸癌基因(Humancervicalcanceroncogene，HCCR)在正常人血清中不能被檢測，在肝細胞癌和肝硬化患者血清中可以被檢測，而且其對肝癌尤其是早期肝癌診斷的特異性和敏感性均高于AFP。這提示HCCR癌基因可能在肝細胞癌的病變早期就開始起作用，促進肝細胞癌

4、的發(fā)生和發(fā)展。本研究的主要內(nèi)容為HCCR分子在肝細胞癌發(fā)生中的作用及其機制研究。目的研究HCCR分子表達在肝細胞癌變中的作用，并研究其發(fā)揮作用的分子機制?！椒?．HCCR與肝細胞癌發(fā)生相關(guān)性的研究：構(gòu)建HCCR啟動子區(qū)報告基因表達載體，應(yīng)用雙熒光素酶報告基因檢測的方法比較不同惡性程度的肝‘癌)細胞系QSG7701細胞、Huh7細胞和HepG2細胞中HCCR啟動子的相對活性：應(yīng)用Westemblot方法分別檢測人和小鼠從正常到肝癌發(fā)展不同階段肝組織，中的HCCR蛋白的表達水平差異：2．HCCR在肝細胞癌發(fā)生中的作用研究：構(gòu)建穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HCCR的H卻G2細

5、胞系和QSG7701細胞系，顯微鏡下觀察穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HCCR后HepG2細胞的形態(tài)學改變：MTT方法檢測穩(wěn)定轉(zhuǎn)染HCCR的HepG2細胞系和QSG7701細胞系的細胞增殖能力的改變。3．HCCR表達對肝癌影響的分子機制研究：分析HCCR對E．鈣粘素(CDHl：E．Cadherin)的影響和分子機制。構(gòu)建CDHI啟動子的報告基因載體，并通過分別在人胚腎細胞293A和肝細胞QSG7701中過表達HCCR檢測其啟動子活性的改變，以確定HCCR是否影響CDH!分子的啟動子活性．通過構(gòu)建重組表達HCCR的腺病毒載體來過表達HCCR，并用重組腺病毒感染293A細胞和Q

6、SG7701細胞，通過實時定量PCR方法研究HCCR對CDHlmRNA的影響。3．HCCR可以在293A細胞和QSG7701細胞中抑制CDHl分子的啟動子活性。4．成功構(gòu)建了重組表達HCCR的腺病毒載體，并通過其感染293A細胞和QSG7701細胞驗證了HCCR可以在mRNA水平上負調(diào)控CDHl分子的表達。關(guān)鍵詞人宮頸癌基因肝細胞癌細胞增殖E．鈣粘素腺病毒HAbstractAbstractPrimaryhepatocellularcarcinomaisoneofthemostcommonmalignanttumorsinChina．Itsprognos

7、isisverypoorandpathogenesisisnotclear．Therefore，theresearchonthemolecularmechanisminvolvedintheoccuranceofhepatocellularcarcinomaiSthehotissueforscholarstoexplore．Thehumancervicalcanceroncogene(HCCR)isnotexpressedinnormalhumanserum，contrarily,highlyexpressedintheseraofcirrhosisa

8、ndhepatoceilularcarcinomapatients．Moreoveritssp