scriptaid和咖啡因?qū)d羊體細胞核移植效果的影響研究

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1、河北農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文Scriptaid和咖啡因?qū)d羊體細胞核移植效果的影響研究姓名：溫兵強申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：李俊杰20120527摘要體細胞核移植技術(shù)對于動物育種、地方優(yōu)良資源保存、瀕危動物保護以及發(fā)育生物學(xué)基礎(chǔ)理論研究等均具有重要意義，但目前體細胞核移植成功率較低，已成為制約這一技術(shù)應(yīng)用的主要障礙，因此完善體細胞核移植技術(shù)體系，探明核移植技術(shù)機理乃是當(dāng)前急需解決的難題。本研究采用組蛋白去乙酰化酶抑制劑——S面ptaid處理綿羊核移植供體細胞以及核移植胚胎以提高其組蛋白乙?；?/p>

2、水平，探討了組蛋白乙?；降奶岣邔d羊體細胞核移植胚胎體外發(fā)育的影響。另外，對咖啡因在核移植胚胎體外發(fā)育過程中的作用也進行了研究。為了提高綿羊體細胞核移植效率，以綿羊卵丘細胞為核供體，在融合后的核質(zhì)互作期間加入咖啡因，結(jié)果表明，咖啡因濃度以2．5mmol／L或5mmol／L為宜。雖然卵裂率、桑椹胚率以及囊胚發(fā)育率與對照組差異不顯著(P>0．05)，但囊胚細胞數(shù)顯著高于對照組(P<0．05)。采用不同濃度Scriptaid處理綿羊卵丘細胞，結(jié)果表明，以0．21．tmol／LScriptaid處理組核移植胚胎囊胚發(fā)

3、育率最高，達24．39％，顯著高于對照組和O．8VxnoFL處理組(P<0．05)。在對胚胎體外培養(yǎng)的過程中加入Scriptaid，結(jié)果顯示仍以0．21xmoFL處理組囊胚發(fā)育率最高，達24．31％，顯著高于對照組和O．81maol／L處理組(P0．05)

4、，這很可能與Scriptaid對細胞有一定的毒性。在激活后對胚胎進行培養(yǎng)的過程中，用0．21unol／LScriptaid對核移植胚胎進行不同時間的處理后發(fā)現(xiàn)，處理24h和48h對核移植胚胎的囊胚率分別為24．94％和24．27％，顯著高于對照組和96h處理組(PO．05)。在綿羊核移植胚胎體外培養(yǎng)時加入0．21xmol／LScriptaid，35天妊娠率顯著高于對照組(P

5、時期核移植胚胎進行免疫熒光染色，結(jié)果表明，1．細胞至8．細胞期的胚胎中H4K12乙?；斤@著高于對照組，但囊胚中H4K12乙?；讲町惒伙@著；并且試驗組和對照組囊胚內(nèi)細胞團和滋養(yǎng)層細胞間H4K12乙?；讲町惥伙@著(P>0．05)。綜上所述，2．5mmol／L或5mmoFL咖啡因處理綿羊核移植胚胎可顯著提高囊胚細胞數(shù)。采用0．21xmol／LScriptaid分別處理綿羊供體細胞或胚胎時，均可顯著提高核移植胚胎囊胚發(fā)育率；并且試驗組1一細胞、2．細胞、4．細胞和8．細胞核移植胚胎H4K12乙?；斤@著高

6、于對照組?？梢姡艘浦才咛ソM蛋白乙?；降奶岣哂欣谔岣咂潴w外發(fā)育效率。關(guān)鍵詞：Scdptaid：咖啡因；綿羊；體細胞核移植；H4K12acStudiesontheeffectofscriptaidandcaffineonsheepsomaticcellNucleartransplantationAuthor：WenBingqiangMajor：AnimalGenetics，BreedingandReproductionSupervisor：ProfessorLiJun-jieAbstractSomaticce

7、llnucleartransplantationfSCNT)iSapowerfultechniquewhichisbenefitforanimalbreeding,extinctedanimalpreservationanditalsoplaysanimportantroleforthesolutionofmanybasicbiologicalproblems．However,theoverallefficiencyofSCNTiSverylOWanditslOWsuccessfulratehasbecometh

8、emainhurdlethatrestrictedtheapplicationofthetechnique．Therefore,itisnecessaryforUStooptimizetheprotocalofSNTtechniqueandinvestigateitsmechanismsfullyandcompletely．Inthisstudy,wewanttoimpr