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《ss-31對高糖誘導小鼠腎小球系膜細胞調(diào)亡的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內(nèi)容在學術論文-天天文庫。
1、河北醫(yī)科大學碩士學位論文SS--31對高糖誘導小鼠腎小球系膜細胞調(diào)亡的影響姓名：王月華申請學位級別：碩士專業(yè)：病理學與病理生理學指導教師：史永紅201203中文摘要SS-31對高糖誘導小鼠腎小球系膜細胞凋亡的影響摘要目的：糖尿病腎病(diabeticnephropathy，DN)是全球終末期腎臟疾病的首要原因。實驗性DN證實，腎小球固有細胞缺失和系膜細胞凋亡與蛋白尿惡化有關。先前的研究表明，高糖(highglucose，HG)誘導系膜細胞凋亡引起系膜細胞缺失是導致糖尿病腎損傷的主要機制。高糖通過
2、產(chǎn)生糖基化終末產(chǎn)物(advancedglycationendproducts，AGEs)、激活蛋白激酶C(proteinkinaseC，PKC)、增加轉(zhuǎn)化生長因子．p(transforminggrowthNcmr．D，TGF．D)、GTP結合蛋白和細胞內(nèi)活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)表達等途徑介導細胞凋亡。ROS是各種途徑的共同特征，也是高血糖損傷機制的核心。正常情況下，ROS受內(nèi)源性抗氧化劑系統(tǒng)控制，包括維生素C、谷胱甘肽、超氧化物歧化酶(SOD)和過氧化氫酶等。
3、當ROS與抗氧化劑之間的平衡被打破時即發(fā)生氧化應激。過多的ROS通過氧化膜磷脂、蛋白和核酸觸發(fā)凋亡通路并最終引起細胞死亡。我們最近的研究表明，抗氧化劑Tempol或敲低TXNIP能夠抑制HG誘導的小鼠腎小球系膜細胞凋亡、ROS產(chǎn)生和p38MAPK及ASKl活化。以上研究結果表明，高糖通過氧化劑依賴機制誘導腎小球系膜細胞凋亡。ROS產(chǎn)生的主要部位是線粒體，在糖尿病血管并發(fā)癥中起著重要作用。SS一31肽(D．Arg一2’，6'-dimethyltyrosine．Lys．Phe．NH2)屬于小分子可滲
4、透細胞的肽家族，靶向聚集在ROS產(chǎn)生的部位——線粒體內(nèi)膜。SS一3l能夠清除細胞內(nèi)ROS和減少線粒體ROS產(chǎn)生，從而防止線粒體通透性改變(mitochondrialpermeabilitytransition，MPT)和細胞色素C釋放。以往的研究表明，SS．3l能夠抑制單側(cè)輸尿管梗阻大鼠腎小管上皮細胞凋亡和腎小管損傷。高糖處理人視網(wǎng)膜上皮細胞的研究發(fā)現(xiàn)，SS．31能減少細胞凋亡和線粒體ROS產(chǎn)生、穩(wěn)定線粒體膜電位(△、壬，m)、減少細胞色素C由線粒體向胞漿釋放和caspase．3表達。然而，SS
5、．31在HG誘導的小鼠腎小球系膜細胞凋亡中的作用是未知的。我們推測，SS．31能夠通過減少線粒體ROS產(chǎn)生和防止線粒體氧化中文摘要損傷，從而抑制高糖誘導的細胞凋亡。在本研究中，我們應用體外培養(yǎng)的小鼠腎小球系膜細胞(mousemesangialcells．MMCs)觀察了SS．31對HG誘導的ROS產(chǎn)生、細胞凋亡、線粒體功能障礙和p38MAPK及ASKl活化的影響。方法：小鼠系膜細胞(MMCs，ATCCno．CRL．1927)來自美國菌種保藏中一I',,(Manassas，VA)。細胞培養(yǎng)于含有1
6、0％胎牛血清，2mML一谷氨酰胺，100IU／ml青霉素和100I-tg／ml鏈霉素的DMEM．F12培養(yǎng)基中，置于5％C02，37。C培養(yǎng)箱中常規(guī)培養(yǎng)。待MMCs達75％～85％融合后，用無血清培養(yǎng)基同步細胞24h。細胞分組如下：正常糖組NG(5．6mM)，NG+甘露醇組(24．4mM)作為滲透對照，高糖組HG(30mM)，HG+SS．31組(100nM)。于刺激48h后收集細胞及上清液，進行以下檢測：采用原位末端轉(zhuǎn)移酶標記技術(terminaldeoxynucleotidyltransfer
7、ase．mediateddUTP．biotinnickendlabelingassay，TUNEL)及流式細胞術檢測細胞凋亡率；流式細胞術檢測線粒體膜電位及線粒體ROS產(chǎn)生；Westemblot檢測caspase-3、Cleavedcaspase一3、Bax、Bcl一2、p38MAPK、p-p38MAPK、ASKl、P．ASKl、TXNIP、TRX．2及細胞色素C的表達；real．timePCR檢測TXNIP、TRX．2mRNA的表達。結果：1．SS．31對高糖誘導小鼠系膜細胞凋亡的影響TUNE
8、L和流式細胞術檢測結果表明，與正常糖對照組(NG)相比，高糖組凋亡細胞數(shù)顯著增加；與高糖組相比，SS．31干預能夠顯著減少高糖誘導的細胞凋亡。與NG組相比，高糖組Cleavedcaspase．3表達和Bax／Bcl．2比率顯著增加；SS．31干預能夠顯著抑制HG誘導的Cleavedcaspase．3表達和Bax／Bcl一2比率。甘露醇對細胞凋亡，Cleavedcaspase．3表達和Bax／Bcl．2比率無影響。2．SS一31對HG誘導的系膜細胞線粒體細胞色素C釋放的影響與NG組相比，高糖組胞漿
