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《敲低txnip對高糖誘導(dǎo)小鼠系膜細胞凋亡的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、河北醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文敲低TXNIP對高糖誘導(dǎo)小鼠系膜細胞凋亡的影響姓名：趙坡申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：史永紅201203中文摘要敲低TXNIP對高糖誘導(dǎo)小鼠系膜細胞凋亡的影響摘要目的：糖尿病腎病(ON)是最常見的糖尿病微血管并發(fā)癥，一旦腎臟發(fā)生損害往往造成不可逆進展。在需要透析的臨床病人中，DN患者大約占20％'-'40％。所以如果能夠?qū)崿F(xiàn)DN的早期診斷與治療，對于提高患者的生活質(zhì)量及改善預(yù)后有著重要的臨床意義。目前對于DN的發(fā)病機制尚不清楚，通過大量的研究證實氧化應(yīng)激在DN的發(fā)病機制中發(fā)揮了非常重要的作用。硫氧還蛋白(thioredox
2、in，ⅡⅨ)是一種具有氧化還原活性的小分子蛋白，TRX與TRX還原酶及還原型煙酰腺嘌呤二核苷磷酸(NADPH)一起組成一個分布廣泛的NADPH依賴性二硫化物還原酶．TRX系統(tǒng)。具有調(diào)節(jié)細胞氧化還原狀態(tài)、對抗氧化應(yīng)激、激活轉(zhuǎn)錄因子、促進細胞生長以及抑制細胞凋亡等作用。硫氧還蛋白相互作用蛋白(thioredoxininteractingprotein，TXNIP)又稱維生素D3上調(diào)蛋白1(VDUP．1)或TRX結(jié)合蛋白2(TBP．2)，屬于硫氧還蛋白結(jié)合蛋白的家族成員，通過抑制硫氧還蛋白系統(tǒng)的功能而發(fā)揮介導(dǎo)氧化應(yīng)激、抑制細胞增殖及誘導(dǎo)細胞凋亡等作用，是TRX的負性調(diào)節(jié)因子
3、。以往的研究證明TXNIP參與高糖誘導(dǎo)的胰島p細胞凋亡及糖尿病相關(guān)性心肌細胞凋亡。然而，TXNIP在高糖誘導(dǎo)下小鼠系膜細胞凋亡中的作用還未見報道。在本實驗中，我們應(yīng)用體外培養(yǎng)的小鼠系膜細胞，采用TXNIP小干擾RNA敲低TXNIP表達，觀察其對高糖誘導(dǎo)的系膜細胞凋亡、cleavedcaspase．3表達以及Bax／Bcl一2比率的影響。方法：構(gòu)建針對TXNIP的siRNA干擾質(zhì)粒pBAsim—U6．Neo．TXNIPsiRNA，使用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染試劑將TXNIPsiRNA質(zhì)粒和對照質(zhì)粒分別轉(zhuǎn)染MMCs，經(jīng)G418篩選穩(wěn)定的MMCs細胞系。以正常
4、糖濃度(NG)和NG加甘露醇培養(yǎng)的MMCs為對照，以HG刺激MMCs，采用抗氧化劑(Temp01)處理MMCs。流式細胞儀檢測細胞內(nèi)的ROS水平，TUNEL法檢測凋亡細胞數(shù)目，RT-PCR檢測細胞Bax和Bcl．2的mRNA的表達。蛋白印跡法檢測細胞內(nèi)cleavedcaspase．3、caspase．3、Bax、Bcl．2、13-actin和TXNIP的表達。中文摘要結(jié)果：l高糖對MMC的凋亡的影響。與正常糖濃度及對照組相比，高糖能夠明顯誘導(dǎo)系膜細胞凋亡。與正常糖濃度及對照組相比，高糖組Bax／Bcl．2mRNA和蛋白比率明顯升高。另外，甘露醇對細胞凋亡、Bax／Bc
5、l．2mRNA和蛋白比率無明顯影響。2高糖對系膜細胞cleavedcaspase．3表達的影響。Cleavedcaspase．3在高糖條件下培養(yǎng)的小鼠系膜細胞表達呈時間依賴性。在高糖作用12小時cleavedcaspase．3表達開始升高，48小時維持高水平。3敲低TXNIP表達對高糖誘導(dǎo)的MMC凋亡的影響。與高糖組和載體對照組相比，TXNIPsiRNA轉(zhuǎn)染組TXNIP蛋白水平明顯降低，證實TXNIPsiRNA對系膜細胞TXNIP抑制效果明顯。與高糖組和載體對照組相比，TXNIPsiRNA轉(zhuǎn)染組細胞凋亡數(shù)顯著減少?？寡趸瘎﹖empol也能夠抑制高糖誘導(dǎo)的系膜細胞凋亡。
6、同樣，轉(zhuǎn)染TXNIPsiRNA質(zhì)?；騮empol均能夠下調(diào)高糖條件下Bax／Bcl．2mRNA和蛋白的比率。4敲低TXNIP表達對高糖誘導(dǎo)cleavedcaspase．3表達的影響。與NG組相比，HG組cleavedcaspase．3的表達明顯升高。轉(zhuǎn)染TXNIPsiRNA質(zhì)?；騮empol處理后，高糖誘導(dǎo)的cleavedcaspase．3高表達明顯被抑制。5敲低TXNIP表達對高糖誘導(dǎo)ROS產(chǎn)生的影響。與NG組相比，HG組ROS水平明顯提高。甘露醇對照組與NG組相比ROS表達無明顯變化。轉(zhuǎn)染TXNIPsiRNA質(zhì)?；騮empol處理能夠明顯下調(diào)高糖誘導(dǎo)的ROS產(chǎn)生。
7、結(jié)論：1TXNIP參與了HG誘導(dǎo)的MMC細胞凋亡。2敲低TXNIP表達能夠減少HG誘導(dǎo)的細胞凋亡及cleavedcaspase．3、Bax／Bcl．2的表達。3敲低TXNIP抑制HG誘導(dǎo)的MMC細胞凋亡可能是通過減少氧化應(yīng)激反應(yīng)實現(xiàn)的。胞關(guān)鍵詞：高糖；硫氧還蛋白相互作用蛋白；細胞凋亡；腎小球系膜細英文摘要TheeffectsofTXNIPknockdownonhighglucose—inducedaDODt0SlSlnm0USemeSanRlalcells●_-_ABSTRACTObjectives：Diabeticnephropathy(DN)is
