低聚木糖對(duì)奧尼羅非魚生長、免疫功能和腸道菌群的影響

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1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文低聚木糖對(duì)奧尼羅非魚生長、免疫功能和腸道菌群的影響姓名：張榮斌申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖指導(dǎo)教師：曹俊明201206低聚木糖對(duì)奧尼羅非魚生長、免疫功能和腸道菌群的影響摘要本論文研究了在奧尼羅非魚(OreochromisniloticusXO．a(chǎn)ureus)日糧中中添加低聚木糖(xylooligosaecharides，XOS)對(duì)其生長性能、體成分、血液生化指標(biāo)和抗嗜水氣單胞菌感染能力以及對(duì)腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)、主要微生物數(shù)量的影響。同時(shí)采用變性梯度凝膠電泳技術(shù)(DGGE)，進(jìn)一步研究了低聚木糖對(duì)奧

2、尼羅非魚腸道菌群種類組成的影響。1．低聚木糖對(duì)奧尼羅非魚生長性能、體成分和血液生化指標(biāo)及抗嗜水氣單胞菌感染能力的影響。以基礎(chǔ)飼料作為對(duì)照，按200、400、600、800和1000mg／kg分別添加低聚木糖配制試驗(yàn)飼料，對(duì)平均體重(5．09_+0．12)g的奧尼羅非魚進(jìn)行為期8周的飼養(yǎng)試驗(yàn)。每2周取樣測定血清總蛋白(TP)含量和堿性磷酸酶(AKP)、超氧化物歧化酶(SOD)、過氧化氫酶(CAT)活力，養(yǎng)殖結(jié)束時(shí)注射嗜水氣單胞菌(Aeromonashydrophila)進(jìn)行感染試驗(yàn)，計(jì)算96h內(nèi)的存活率。結(jié)果顯示，第8周

3、時(shí)，各低聚木糖添加組(除200mg／kg組外)奧尼羅非魚的增重率(WGR)均高于對(duì)照組，但差異不顯著(P>0．05)；800mg&g組蛋白質(zhì)效率顯著高于200mg／kg組(PO．05)。第4周時(shí)，添加組的血清TP含量和AKP、CAT活力均高于對(duì)照組，其中400mg／kg組與對(duì)照組相比顯著升高(P<0．05)：第6周時(shí)，400meCkg組的血清TP含量和SOD、AKP、CAT活力均顯著高于對(duì)照組(P

4、；第8周時(shí)，各添加組的血清SOD活力均顯著高于對(duì)照組(P<0．05)。注射嗜水氣單胞菌96h后，添加組的存活率比對(duì)照組提高193．3％'---'255．8％。結(jié)果表明，在飼料中添加一定量的低聚木糖對(duì)奧尼羅非魚生長性能和體成分無顯著影響，但顯著升高血清TP含量和SOD、AKP、CAT活力，明顯提高羅非魚抗嗜水氣單胞菌感染的能力。2．低聚木糖對(duì)奧尼羅非魚腸道形態(tài)和菌群結(jié)構(gòu)的影響。在上述的養(yǎng)殖試驗(yàn)中，每2周取腸道進(jìn)行雙歧桿菌(Bifidobacterium)、乳酸桿菌(Lactobacillus)和大腸桿菌(Ecoli)選擇

5、性培養(yǎng)，測定其數(shù)量，第4周和8周時(shí)取腸道做組織切片，測定腸華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2012屆碩士研究生學(xué)位論文道肌層厚度和皺襞面積。結(jié)果顯示，第4周和8周時(shí)，各添加組羅非魚中腸肌層厚度和皺襞面積均顯著高于對(duì)照組(P<0．05)。與對(duì)照組相比，雙歧桿菌數(shù)量在第4周時(shí)600mg／kg和800mg／堍組顯著增加(P<0．05)，在第6周時(shí)400mg／kg組和600mg／l(g組顯著增加(P

6、有達(dá)到顯著水平(P>0．05)。結(jié)果表明，飼料中添加低聚木糖能顯著改善腸道形態(tài)，增加肌層厚度和皺襞面積，顯著提高奧尼羅非魚腸道雙歧桿菌和乳酸桿菌數(shù)量。3．應(yīng)用PCR結(jié)合變性梯度凝膠電泳(PCR-DGGE)技術(shù)研究低聚木糖對(duì)奧尼羅非魚腸道菌群種類組成的影響。在基礎(chǔ)飼料中分別添加0、400、600和800mg／kg低聚木糖配制4種飼料，對(duì)平均體重(2．41±0．06)g的奧尼羅非魚進(jìn)行為期6周的飼養(yǎng)試驗(yàn)。分別在O周、第3周和第6周取樣進(jìn)行分析。試驗(yàn)確立了腸道細(xì)菌DNA提取方法，建立了分析羅非魚腸道菌群變化的PCR．DGGE

7、方法，并運(yùn)用PCR-DGGE技術(shù)分析了飼料中添加低聚木糖在不同時(shí)段對(duì)奧尼羅非魚腸道微生物區(qū)系多樣性的影響，結(jié)果表明，從奧尼羅非魚腸道細(xì)菌中提取的DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增后的16SrDNA序列片段的V3區(qū)序列，通過DGGE方法電泳后，其腸道中細(xì)菌種類較多。第3周時(shí)各試驗(yàn)組均保持假單胞菌(Pseudomonas)在腸道中定植，到第6周時(shí)，假單胞菌從低聚木糖添加組腸道中消失；除了第3周600megkg組和第6周400mg依g組外，其余各組中均發(fā)現(xiàn)腸桿菌；第3周時(shí)400mg／kg組中發(fā)現(xiàn)硫代硫酸鹽氧化細(xì)菌(Limnobacte)和克

8、雷伯氏菌(Klebsiella)；第3周600meeXg組發(fā)現(xiàn)果膠桿菌(Pectobacterium)；除第6周對(duì)照組外，其余各組均有假交替單胞菌(Pseudoalteromonas)。結(jié)果表明，假交替單胞菌能夠在腸道中定植，腸道中菌群種類受到低聚木糖添加量的影響。關(guān)鍵詞：奧尼羅非魚，低聚木糖，生長一蚪1_12厶匕Iae,，免疫功