《安胃湯對慢性萎縮性胃炎大鼠細胞凋亡的影響》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
學(xué)校代碼：10600學(xué)號：092029學(xué)位類型：科學(xué)學(xué)位廣西中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文安胃湯對慢性萎縮性胃炎大鼠細胞凋亡的影響研究生：余翥導(dǎo)師：林壽寧教授院系（部所）：瑞康臨床醫(yī)學(xué)院專業(yè)：中醫(yī)內(nèi)科學(xué)研究方向：脾胃病治療研究完成日期：2012年5月27日 目錄中英文縮略詞匯表…………………….…………………………………1中文摘要……………………………………………………………………2英文摘要……………………………………………………………………5引言……………………………………………………………………10正文…………………………………………………………………121實驗材料和方法……………………………………………………………121.1實驗材料…………………………………………………………………121.1.1實驗條件…………………………………………………………………121.1.2實驗動物…………………………………………………………………121.1.3藥物與試劑…….…………………………………………………………121.1.4主要儀器設(shè)備…………………………………………………………141.1.4.1一般實驗器材…………………………………………………………141.1.4.2主要儀器………………………………..………………………………141.2實驗方法…………..……………………………..…………………………151.2.1實驗動物分組………………………………………………………..…151.2.2實驗性大鼠慢性萎縮性胃炎模型的制備…………………………..…151.2.3造模成功標準….……………………..……………………………..…151.2.4給藥方法……….………………………..……………………………..…151.2.5標本采集及處理…………………………………………………..……...161.3觀察指標及方法...…………………………………………………..……...171.3.1大鼠一般狀態(tài)…....………………………………………………..……...171.3.2胃粘膜大體形態(tài)觀察……………………………………………..……...171.3.3胃黏膜光學(xué)顯微鏡觀察…………………………………………..……...171.3.4胃黏膜與血液Bcl-2及NF-κB含量的測定……………………..……...181.3.4.1血細胞分離…....………………………………………………..……....18I 1.3.4.2胃粘膜組織…....………………………………………………..……....181.3.4.3RNA提取…....………………………………………………..….........181.3.4.4引物設(shè)計…....………………………………….…………..…..….........181.3.4.5RT-PCR.……....………………………………….…………..…..….......191.3.4.6結(jié)果分析..……………………………………………..…..…................201.3.5TUNEL法檢測測定各組大鼠胃粘膜細胞凋亡的改變…..….......201.3.6統(tǒng)計學(xué)處理………………………………………………………………212技術(shù)路線圖…....…………...………………………………..…..…..............223實驗結(jié)果……………………………………………………………………233.1動物外觀觀察………………………………………………………………233.2胃黏膜大體形態(tài)觀察………………………………………………………233.3胃黏膜光學(xué)顯微鏡觀察……………………………………………………233.4胃黏膜和血液中Bcl-2及NF-κB含量的測定結(jié)果………………………253.4.1胃黏膜和血液中Bcl-2表達的影響………………………………….…253.4.2胃黏膜和血液中NF-kB表達的影響………………...………………….273.5細胞凋亡檢測（TUNEL法）………………………….................………294討論………………………………………………………………………….304.1現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對慢性萎縮性胃炎的認識…………………………………….304.2中醫(yī)對慢性萎縮性胃炎的認識……...…………………………………….324.2.1標本論……………….……………………………………………………324.2.2脾虛論……………….……………………………………………………334.2.3瘀毒論……………….……………………………………………………334.2.4血瘀論……………….……………………………………………………344.2.5正虛邪實…….………………………………………………………..…344.3中醫(yī)藥治療現(xiàn)狀……….…………………………………………………354.3.1治療原則…………….……………………………………………………354.3.2辨證施治…………….……………………………………………………36II 4.3.2.1中藥治療………….……………………………………………………364.3.2.2針灸或針灸配合中藥內(nèi)服療法………………………………………394.4物實驗?zāi)Ｐ脱芯俊?……………………………………………………394.4.1運用各種理化因素反復(fù)刺激胃黏膜形成慢性胃炎……………………394.4.2免疫因素制模法…….……………………………………………………404.4.3有中醫(yī)特色的病癥結(jié)合模型……………………………………………414.4.4生物制模法…….…………………………………………………………414.5關(guān)于細胞凋亡的討論………………………………………………………424.6安胃湯理法方藥的研究……………………………………………………444.7安胃湯促進胃黏膜逆轉(zhuǎn)機制的探討………………………………………505存在的問題和展望….………………………………………………………50結(jié)論…………………………………………………………………………52參考文獻……………………………………………………………………53附錄…….……………………………………………………………………59綜述……………………………………………………………………65致謝……………………………………………………………………73攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄…………………………………74作者聲明…………………………………………………………………75個人簡介…………………………………………………………………76III 主要縮略詞英文縮寫英文全稱中文全稱CAGchronicatrophicgastritis慢性萎縮性胃炎Bcl-2Bcelllymphoma/lewkmia-2B細胞淋巴瘤/白血病-2NF-κBnucleartranscriptionfactorkappaBk基因結(jié)合核因子MNNGN-methyl-N'-nitro-N-nitrosoguanidineN-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍ReversetranscriptionPolymerase反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應(yīng)和實RT-PCRChainReaction/RealtimePolymerase時聚合酶鏈式反應(yīng)共同的縮ChainReaction寫terminal-deoxynucleotidyltransferase脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶TUNELmediatednickendlabeling介導(dǎo)的缺口末端標記法HE染色法hematoxylin-eosinstaining蘇木精—伊紅染色法ACDacidcitratedextrose酸性枸櫞酸葡萄糖PBSPhosphateBufferedSaline磷酸鹽緩沖液DEPCdiethypyrocarbonate焦碳酸二乙酯glyceraldehyde-3-phosphateGAPDH甘油醛-3-磷酸脫氫酶dehydrogenaseMMLVMoloneyMurineLeukemiaVirus莫洛尼氏鼠白血病病毒dNTPdeoxy-ribonucleosidetriphosphate脫氧核糖核苷三磷酸PODperoxidase過氧化物酶AIApoptoticindex凋亡指數(shù)HPHelicobacterPylori幽門螺旋桿菌IMintestinalmetaplasia腸上皮化生ATPatypicalhyperplasia不典型增生1 中文摘要目的：觀察安胃湯對慢性萎縮性胃炎大鼠胃黏膜組織凋亡細胞、胃黏膜組織及血液中Bcl-2及NF-κB含量的影響，從而探討安胃湯治療慢性萎縮性胃炎療效的分子機制，從基因水平上闡釋名老中醫(yī)治療慢性胃炎學(xué)術(shù)理論。方法：健康清潔級wistar大鼠84只，雄性，體重140－170克，完全隨機分為空白對照組、病理模型組、安胃湯大劑量組、安胃湯中劑量組、安胃湯小劑量組、維酶素對照組、胃復(fù)春對照組，每組12只。除正常對照組外，其它各組均采用MNNG制作慢性萎縮性胃炎大鼠模型，造模成功后，從第9周開始，除正常組與模型組外，其他各組分別每天每只取安胃湯大、中、小劑量、維酶素混懸液、胃復(fù)春懸濁液灌胃治療4周。各組大鼠禁食12ｈ，股動脈取血后，立即剖腹取胃，臵于10%甲醛固定，作常規(guī)石臘包埋切片，采用TUNEL法檢測測定各組治療后CAG大鼠胃粘膜細胞凋亡的改變，PCR測定各組治療前后CAG大鼠胃粘膜及血液中Bcl-2、NF-κB基因含量表達的改變，并做胃黏膜大體觀察、胃黏膜組織病理觀察。結(jié)果：1.胃黏膜大體形態(tài)觀察：通過觀察皺襞多少、走向，黏膜色澤，是否有出血等情況，發(fā)現(xiàn)模型組皺襞減少或消失，走向紊亂，表面黏液少，黏膜色澤淡白或灰白，且部分伴有散在出血點。經(jīng)維酶素、胃復(fù)春，低劑量、中劑量、高劑量安胃湯治療后，胃黏膜損害均有不同程度的改善，以高劑量組效果最為明顯；2.胃黏膜光學(xué)顯微鏡觀察：通過觀察胃黏膜上皮細胞排列狀況、固有腺體數(shù)量，有無炎性細胞浸潤等情況，發(fā)現(xiàn)模型組固有腺體數(shù)量明顯減少，排列紊亂，有炎性細胞浸潤。經(jīng)維酶素，胃復(fù)春，低劑量、中劑量、高劑量安胃湯治療后，胃黏膜萎縮有不同程度的逆轉(zhuǎn)，以高劑量組效果最為明顯；3.①安胃湯大、中、小劑量組及維酶素、胃復(fù)春對照組與病理模型組比2 較有顯著差異（P<0.01），說明安胃湯、維酶素、胃復(fù)春均能有效調(diào)控Bcl-2含量。安胃湯大劑量組與維酶素組、胃復(fù)春組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯中劑量組與維酶素組比較有顯著差異（P<0.01），與胃復(fù)春對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；安胃湯小劑量組與胃復(fù)春對照組比較無顯著差異（P>0.05），與維酶素對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；說明安胃湯大、中劑量組調(diào)控Bcl-2含量的效果較維霉素與胃復(fù)春對照組效優(yōu)。安胃湯大、小劑量組與中劑量組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；安胃湯大劑量組與小劑量組比較有顯著差異（P<0.01）；說明安胃湯不同濃度組對Bcl-2含量的調(diào)控呈量效關(guān)系。②安胃湯大、中、小劑量組及維酶素、胃復(fù)春對照組與病理模型組比較有顯著差異（P<0.01），說明安胃湯、維酶素、胃復(fù)春均能有效調(diào)控NF-κB含量。安胃湯大劑量組與維酶素組、胃復(fù)春組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯中劑量組與維酶素組比較有顯著差異（P<0.01），與胃復(fù)春對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；安胃湯小劑量組與胃復(fù)春對照組比較無顯著差異（P>0.05），與維酶素對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；說明安胃湯大、中劑量組調(diào)控NF-κB含量的效果較維霉素與胃復(fù)春對照組效優(yōu)。安胃湯大、小劑量組與中劑量組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；安胃湯大劑量組與小劑量組比較有顯著差異（P<0.01）；說明安胃湯不同濃度組對NF-κB含量的調(diào)控呈量效關(guān)系。③與空白組相比，病理模型組大鼠TUNEL陽性細胞數(shù)目較少且散在分布，AI明顯降低（P<0.01）；安胃湯大劑量組和安胃湯中劑量組見較多的TUNEL陽性細胞，AI明顯上升，兩者之間比較，有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），與模型組比較有極顯著性差異（P<0.01），與維霉素組比較有極顯著性差異（P<0.01）；安胃湯大劑量組與胃復(fù)春組比較有極顯著性差異（P<0.01）；安胃湯小劑量組、胃復(fù)春對照組TUNEL陽性細胞也有一定增多，AI有一定的上升，兩者之間比較無顯著性差異（P>0.05）；安胃湯小劑量組、胃復(fù)春對照組與中劑量3 組間比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；安胃湯小劑量組與模型組比較，有極顯著性差異（P<0.01），與維霉素組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論：1.安胃湯改善了實驗性慢性萎縮性胃炎大鼠組織病理學(xué)形態(tài)。具有保護胃黏膜、修復(fù)胃黏膜的作用。2.安胃湯在降低降低Bcl-2及NF-kB基因含量表達水平方面，安胃湯大劑量組作用明顯強于中、小劑量組，中劑量組作用強于小劑量組，體現(xiàn)出一定的量效關(guān)系。3.安胃湯在降低Bcl-2及NF-kB基因含量表達水平方面，安胃湯大、中劑量組作用明顯強于維霉素對照組及胃復(fù)春對照組。4.安胃湯降低慢性萎縮性胃炎大鼠Bcl-2及NF-kB基因含量表達水平，促進細胞凋亡，這可能是安胃湯減緩胃黏膜細胞向異型增生和胃癌方向轉(zhuǎn)變進程的重要機制。關(guān)鍵詞：安胃湯；慢性萎縮性胃炎；Bcl-2；NF-kB；細胞凋亡4 Areal-timefluorescencequantitativePCRStudyofAnweitangonExpressionofBcl-2andNF-κBofGastricMucosaandbloodinRatswithChronicAtrophicgastritisandstudyofTUNELtestonGastricMucosaCellApoptosisinratsAbstractObjective:ToobservetheeffectofAnWeiTangonchronicatrophicgastritisandgastricmucosaapoptoticcells,gastricmucosatissueandBcl-2andNF-κBofbloodofratsmodelofChronicAtrophicGastritis.ExplorethemolecularmechanismofAnWeiTangtreatmentofchronicatrophicgastritis.FromthegenelevelacademictoexplaintheoldChinesemedicinetreatmentofchronicgastritis.Methods:84malecleanWistarrats，rangefrom140to170gramme,weredividedinto7groupsatcompletelyrandom:blankcontrolgroup(n=12),modelgroup(n=12),high-doseAnWeiTangtreatmentgroup(n=12),middle-doseAnWeiTangtreatmentgroup(n=12),low-doseAnWeiTangtreatmentgroup(n=12),Vitacoenzymecontrolgroup(n=12)andWeiFuChuncontrolgroup(n=12).Excepttheblankcontrolgroup,ratmodelsofCAGwereinducedbyMNNGinother6groups.Aftersuccessfullymakingtheratmodels,Excepttheblankcontrolgroupandthemodelgrouprats,respectively,eachratinothersratswereadministeredintragastricallywithhigh-doseAnWeiTang,middle-doseAnWeiTang,low-doseAnWeiTang,VitacoenzymesuspensionandWeifuChunsuspensionfor4weeks.Theneachgroupwasfasting12hours.Caesareansectiontakegastrictissueimmediatelyafterfemoralartery5 bloodwascollected.Thegastrictissuewasplacedin10%formaldehydeforroutineparaffin-embeddedsections.ChangesinCAGratgastricmucosalcellapoptosisbyTUNELmethodforthedeterminationoftreatmentineachgroup.AlteredexpressioningenecontentofCAGratgastricmucosaandbloodofBcl-2,NF-κBinthePCRbeforeandaftertreatmentineachgroup,andperformthegeneralobservationofgastricmucosa,andthegastricmucosalhistopathologicexamination.Results:⑴Gastricgeneralobservation:byobservingfolds,mucousmembranecolor,andbleeding,wefoundthatthemodelgroupplicareducedordisappeared,lessmucus,mucousmembranecolorwhitishorgray,andsomeareaccompaniedbyscatteredbleedingpoints.AfterVictoriaSu-enzyme，WeiFuChun，low-dose,middle-doseandhigh-doseofAnWeiTangtherapy,gastricmucosaldamageareinvaryingdegreesofimprovementtothemostobvioushigh-dosegroup.⑵Gastricmucosaopticalmicroscopeobservation:byobservingstatusofgastricepithelialcellarrangement、thequantityofgastricmucosaIntrinsicglands,exitinflammatorycellinfiltrationornotetc.,inthemodelgroupsignificantlyreducedthenumberofinherentglands,withdisorder,andinflammatorycellinfiltration.AfterVitacoenzymeGroup，WeiFuChun,low-doseherb、middle-doseandhigh-doseherbtherapyofAnWeiTanggroups,gastricatrophyarevaryingdegreesofreversaltothemostobvioushigh-dosegroup.⑶①DosegroupinAnWeiTanghigh-dosegroup,AnWeiTangmid-dosegroup,AnWeiTanglow-dosegroup,Vitacoenzymegroup,WeifuchungroupandmodelgroupcansignificantlyreducetheexpressionofBcl-2contentinthegastricmucosaandblood,andmodelgroupweresignifycantlydifference(P<0.01).ShowthatAnWeiTang,Vitacoenzyme,WeifuchuncaneffectivelyregulateBcl-2content.AnWei6 TanghighdosegroupandVitacoenzymegroupandWeifuchungroupdifferencesweresignificantdifferences(P<0.01).AnWeiTangmiddledosegroupandVitacoenzymegroupweresignifycantlydifferent(P<0.01).AnWeiTangmiddledosegroupandWeifuchungroupweresignifycant(P<0.05).AnWeiTanglow-dosegroupcomparetotheWeifuchuncontrolgroupwasnosignificantdifference(P>0.05).AnWeiTanglow-dosegroupandtheVitacoenzymegroupcomparecontrolgrouphavethedifferencewassignificant(P<0.05).TheeffectoftheAnWeiTanghighdosegroupandtheAnWeiTangmiddledosegroupregulationofBcl-2contentefficiencybetterthanthegroupsofWeifuchunandVitacoenzyme.AnWeiTanghighdosegroupandtheAnWeiTanglow-dosegroupcomparetotheAnWeiTangmiddle-dosegrouphavethesignificantdifference(P<0.05).AnWeiTanghigh-dosegroupandAnWeiTanglow-dosegroupweresignifycantlydifferent(P<0.01).Differe-ntconcentrationsoftheAnWeiTangcontentregulationofBcl-2showedadose-effectrelationship.②DosegroupinAnWeiTanghigh-dosegroup,AnWeiTangmid-dosegroup,AnWeiTanglow-dosegroup,Vitacoenzymegroup,WeifuchungroupandmodelgroupcansignificantlyreducetheexpressionofNF-kBcontentinthegastricmucosaandblood,andmodelgroupweresignifycantlydifference(P<0.01).ShowthatAnWeiTang,Vitacoenzyme,WeifuchuncaneffectivelyregulateNF-kBcontent.AnWeiTanghigh-dosegroupandVitacoenzymegroupandWeifuchungroupdifferencesweresignificantdifferences(P<0.01).AnWeiTangmiddledosegroupandVitacoenzymegroupweresignifycantlydifferent(P<0.01).AnWeiTangmiddledosegroupandWeifuchungroupweresignifycant7 (P<0.05).AnWeiTanglow-dosegroupcomparetotheWeifuchuncontrolgroupwasnosignificantdifference(P>0.05).AnWeiTanglow-dosegroupandtheVitacoenzymegroupcomparecontrolgrouphavethedifferencewassignificant(P<0.05).TheeffectoftheAnWeiTanghighdosegroupandtheAnWeiTangmiddledosegroupregulationofNF-kBcontentefficiencybetterthanthegroupsofWeifuchunandVitacoenzyme.AnWeiTanghighdosegroupandtheAnWeiTanglow-dosegroupcomparetotheAnWeiTangmiddle-dosegrouphavethesignificantdifference(P<0.05).AnWeiTanghigh-dosegroupandAnWeiTanglow-dosegroupweresignifycantlydifferent(P<0.01).DifferentconcentrationsoftheAnWeiTangcontentregulationofNF-kBshowedadose-effectrelationship.③ThenumberofTUNEL-positivecellsofpathologicalmodelratscomparetotheblankgroup,theresultissmallnumberandscatteredandthenumberofapoptosisissignificantlyreduce(P<0.01).TherearemoreTUNEL-positivecellsinTheAnWeiTanghighdosegroupandTheAnWeiTangdosegroup,thenumberofapoptosisincreasedsignificantlybetweenthetwoaredifferences(P<0.05).AnWeiTanghigh-dosegroupandAnWeiTangmiddledosegroupcompareedwithmodelgroupandVitacoenzymegroupseparately,therearesignificantdifference(P<0.01).AnWeiTanghigh-dosegroupcompareedwithWeifuchungrouparesignificantdifference(P<0.01).TUNELpositivecellsoftheAnWeiTanglow-dosegroupandWeifuchungroupalsoincreasedandthenumberofapoptoticrise.ThecomparebetweenAnWeiTanglowdosegroupandWeifuchungroupwasnosignificantdifference(P>0.05).TheAnWeiTanglowdosegroupandWeifuchungroupcomparewithAnWeiTangmiddledosegroupwassignificantdifference(P<0.05).8 Conclusions:⑴AnWeiTangimprovethepathologicalformofexperimentalchronicatrophicgastritisrattissues,withtheroleoftheprotectionofgastricmucosa,repairofgastricmucosa.⑵InlowertoreducetheexpressionlevelofBcl-2andNF-kBgenecontent，AnWeiTanghigh-dosegroupwerestrongerthanthemediumandsmalldosegroup,andthemediumwerestrongerthanthesmalldosegroupshowingsomedoseeffectrelationship.⑶TheAnWeiTanginreducingthecontentofBcl-2andNF-kBgeneexpressionlevelsAnWeiTanghigh-dosegroupwerestrongerthanVitacoenzymegroup,andWeifuchungroup.⑷AnWeiTangreducethecontentofBcl-2andNF-kBgeneexpressionlevelsofratswithchronicatrophicgastritis,andpromoteapoptosisitcouldbeasignificantmechanismofgastricmucosalcellstodysplasiaandgastriccancerthedirectionofthechangeprocessbyreductionofAnWeiTang.Keywords:Anweitang；chronicatrophicgastritis；Bcl-2；NF-kB；CellApoptosis9 引言慢性萎縮性胃炎（CAG）是臨床上常見的胃部疾患，是以胃黏膜萎縮變薄、腺體減少或消失為特征的疾病，常伴有腸上皮化生（IM）和不典型增生（ATP），由于其與胃癌尤其是腸型胃癌的發(fā)生密切相[1]關(guān)，WHO已將CAG定為胃癌前期狀態(tài)。如何阻斷和逆轉(zhuǎn)CAG的發(fā)生、發(fā)展及其向胃癌演變，已成為目前國內(nèi)外胃癌研究領(lǐng)域的焦點。慢性萎縮性胃炎（CAG）其癌變率為21.55%～71.46%。萎縮性胃炎伴腸化被認為是胃癌的一種癌前病變，經(jīng)過一個漫長的,多階段、多[2]基因的變異積累過程可發(fā)展成胃癌。慢性萎縮性胃炎可進一步發(fā)生腸上皮化生、不典型增生而癌變。細胞凋亡（Apoptosis）是由自穩(wěn)機制促發(fā)的細胞程序化死亡,受基因調(diào)控。細胞凋亡與增殖失衡是腫瘤發(fā)生的生物學(xué)基礎(chǔ)。近年來研究發(fā)現(xiàn),胃粘膜病變和細胞增殖及凋亡關(guān)系密切,胃癌病人細胞凋亡受抑已是共識,而慢性萎縮性胃炎為胃癌前變化的最初階段,國內(nèi)臨床報道中[3]藥可以阻斷或逆轉(zhuǎn)胃癌的癌前病變,但其分子機制尚待闡明。因此,從細胞凋亡的角度闡明中藥治療CAG,干預(yù)胃癌的發(fā)生是我們研究的內(nèi)容之一。Bcl-2是從B淋巴細胞瘤中分離出來的原癌基因,是至今為止研究得最多的抑凋亡基因。Bcl-2可以抑制多種因素誘導(dǎo)的細胞凋亡。研[4]究表明，Bcl-2抑制細胞凋亡可能與細胞催抗氧化作用、抑制鈣離子[5][6]跨膜流動、離子通道蛋白和吸附/錨定蛋白有關(guān)，目前Bcl-2是凋亡分子機制研究的主要靶分子。NF-κB屬于真核轉(zhuǎn)錄因子家族,共有5個成員。研究表明,胃粘膜上皮細胞的凋亡調(diào)節(jié)與NF-κB有關(guān)。一方面,NF-κB可促進細胞凋亡,如引起促凋亡蛋白p53、Bcl家族中部分成員（Bax、Bad、Bcl-Xs）表達增[7][8]加。另一方面,NF-κB還可抑制細胞凋亡,如引起腫瘤壞死因子受10 體相關(guān)因子如TRAF1和TRAF2、凋亡抑制蛋白如c-IAP1和c-IAP2等表[8]達增加,從而延長細胞生存期。NF-κB是促進細胞凋亡還是抑制凋亡目前尚不清楚,可能與微環(huán)境狀況、不同細胞因子相互作用、刺激物的毒性及宿主的免疫功能有關(guān)。中醫(yī)藥在治療本病時，具有辨證論治、靈活加減、毒副作用小等特點，而顯示出獨特優(yōu)勢，與單純西藥相比更體現(xiàn)了它的優(yōu)越性及組方的合理性。安胃湯是根據(jù)已故全國名老中醫(yī)林沛湘教授治療慢性胃病經(jīng)驗方基礎(chǔ)上組方而成，在臨床應(yīng)用多年，療效顯著。由半夏瀉心湯、芍藥甘草湯、丹參飲及百合湯等方化裁組合而成。項目組的前期實驗研究表明，安胃湯對大鼠慢性萎縮性胃炎血清胃泌素、胃動素及胃粘膜生長抑素的調(diào)節(jié)，達到改善胃粘膜的炎癥反應(yīng)，促進腺體的再生，增[9]加微循環(huán)血流，促進局部胃粘膜的修復(fù)。臨床研究也證實了安胃湯對慢性萎縮性胃炎患者的血清胃泌素、胃動素及胃粘膜生長抑素的調(diào)節(jié)作用，并在胃鏡及病理組織學(xué)上證實了安胃湯對胃粘膜的修復(fù)作用[10]。為了進一步研究安胃湯治療慢性萎縮性胃炎的作用機制，本研究從動物實驗方面，探討安胃湯對慢性萎縮性胃炎大鼠細胞凋亡的影響，探討細胞凋亡與慢性萎縮性胃炎發(fā)病及發(fā)展以及療效的相關(guān)性，為安胃湯在臨床上進一步應(yīng)用提供可靠的實驗研究的依據(jù)。11 正文1實驗材料和方法1.1實驗材料1.1.1實驗條件本實驗在廣西中醫(yī)藥大學(xué)實驗室進行。整個實驗過程中，動物自由攝食和飲水。室溫控制在18℃—22℃，日照充足，相對濕度維持在60%—70%。飼鼠所用顆粒飼料和墊料均由廣西中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心提供。1.1.2實驗動物健康清潔級wistar大鼠84只，雄性，體重140－170克。由長沙市開福區(qū)東創(chuàng)實驗動物科技服務(wù)部提供（動物合格證號HNACSDC20100554）。適應(yīng)性飼養(yǎng)3天，示正常生長后用于實驗。1.1.3藥物與試劑安胃湯藥物組成：黃連5g、干姜5g、制半夏10g、百合15g、白芍15g、烏藥5g、丹參15g、薏苡仁15g、木香7g、甘草3g等。采用免煎中藥顆粒劑配方，由廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院提供。安胃湯按[11]標準動物的等效劑量折算系數(shù)法計算，大鼠的等效劑量為等效劑量人日用量95gx0.018x5=8.55g，大鼠灌喂安胃湯大、中、小劑量為8.55g的4:2:1倍，即34.2g、17.1g、8.55g安胃湯分別溶于2mL蒸餾水為大、中、小劑量大鼠每天的用量。胃復(fù)春片（杭州胡慶余堂藥業(yè)有限公司產(chǎn)品，生產(chǎn)批號：國藥準字Z20040003，廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院藥劑科提供）。按人等效劑量的2倍量，即0.359gx12x0.018x5溶解于2m1，19.38g胃復(fù)春片溶于100m1蒸餾水，冰箱4℃保存。維酶素片（北京海淀區(qū)興事堂藥店，生產(chǎn)批號國藥準字H13023904，廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院藥劑科提供）。按人等效12 劑量的2倍量，即0.2gx12x0.018x5溶解于2m1，10.8g維酶素片溶于100m1蒸餾水，冰箱4℃保存。N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍，簡稱MNNG(日本東京化學(xué)工業(yè)株式會社)。產(chǎn)品批號：M0527。購自上海國藥化學(xué)試劑有限公司。實驗時用水稀釋為所需濃度，錫紙包裹容器避光冷藏保存?zhèn)溆?。總RNA提取試劑盒（離心柱型）（目錄號：DP419）（北京天根）購自南寧天地揚生物試劑公司；逆轉(zhuǎn)錄試劑盒（RevertAidFirstStrandcDNASynthesisKit）(Ferments)（#K1621#K1622）及引物均由上海生工生物工程有限公司提供；FSUniversalSYBRGrennMas（4913914001-1）由廣州聚研生物公司提供；DNAMTarkerB馬克、5xTBEbuffer緩沖液、GoldViewI型核酸染色劑、axygen0.2ml薄壁管、SanPrep柱式PCR產(chǎn)物純化試劑盒（SK8141-N）由上海生工生物工程有限公司提供；鼠淋巴細胞分離液（產(chǎn)品編號P8620）：北京索萊寶科技有限公司產(chǎn)品；Trizol（產(chǎn)品編號15596-026，貨物批號24401）:美國invitrogen生命技術(shù)公司產(chǎn)品；dNTP（目錄號PC2403）：北京艾德萊生物科技有限公司產(chǎn)品；0.01MPBS(PH7.2)（粉劑）：福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司產(chǎn)品；DNase/RNase-FreeddH2o去離子水（DEPC水）（批號211648AX）：北京艾德萊生物科技有限公司產(chǎn)品。氯仿、瓊脂糖購自南寧天地揚生物試劑公司。原位細胞凋亡檢測試劑盒（型號ZK-8005），購自北京中山生物技術(shù)公司，組成：酶濃縮溶液（EnzymeSolution）、標記溶液（LableSolution）和轉(zhuǎn)化劑-POD（Converter-POD），按照試劑盒說明書制備和使用；液體DAB酶底物顯色試劑盒（20t.No.90708031c）：美國MatimBiotech.Inc公司產(chǎn)品，組成：DAB-SolutionA(20x)和DAB-SolutionB(20x)，按照試劑盒說明書制備和使用。枸櫞酸緩沖液、蛋白酶K、異丙醇、ACD抗凝劑、1％烏拉坦液，10%甲醛溶液，冰生理鹽水，醫(yī)用無水乙醇，蘇木素，伊紅，二甲苯，13 濃鹽酸，氨水，石蠟，蒸餾水等常規(guī)試劑由廣西中醫(yī)藥大學(xué)實驗室提供。1.1.4主要儀器設(shè)備1.1.4.1一般實驗器材電子天平、大鼠臺架、厚棉手套、量筒、燒杯、濾紙、電磁爐、玻璃棒、剪毛彎剪、消毒棉簽、一次性1ml及5ml注射器、臺燈、手術(shù)器械(無菌洞巾、止血鉗、無菌手套、組織剪、有齒及無齒鑷、持針鉗、縫合針、無菌棉球、０號縫合絲線、手術(shù)刀等)、大鼠灌胃器等若干。1.1.4.2主要儀器7500熒光PCR儀；多通道PCR擴增儀(PTC-220美國MJ公司)SZ-93自動雙重純水蒸餾器（上海亞榮生化儀器廠）BIO-RAD電泳儀(Power/Pac300美國BIO-RAD公司)美國Bio-RadGeldoc2000凝膠成像分析系統(tǒng)低速大容量離心機（LXJ-IIB上海安亭儀器廠）德國EppendorfCentrifuge高速低溫離心機（5810R）Eppendorf移液器（南寧市博仁生物科技有限公司）熒光定量八聯(lián)管(PCR-0208-C南寧天地揚生物試劑公司)AAE140(AR2140)電子分析天平，上海奧豪斯公司HH-S-Ni-1-4型電熱恒溫水浴鍋:北京華恒萬儀儀器廠ZMN-9802全電腦組織自動脫水機:常州華利電子公司ZMN-7803全自動組織包埋機:常州華利電子公司RM2135旋轉(zhuǎn)式顯微鏡用薄片切片機:德國美康公司TEC2500型恒溫攤片烤片機:常州赫思琳醫(yī)用儀器有限公司GZX-9246MBE電熱鼓風(fēng)恒溫干燥箱:上海博迅實業(yè)有限公司SW-CJ-1F凈化工作臺:蘇州安泰空氣技術(shù)有限公司14 Thermo-80℃冰箱:美國Thermo公司(廣州三元科技有限公司)LDZX-50KA立式壓力蒸汽滅菌器:上海申安醫(yī)療器械廠CH30RF200奧林巴斯光學(xué)顯微鏡，OLYMPUS公司BX60數(shù)碼攝影顯微高清晰度彩色病理圖文分析系統(tǒng)，OLYMPUS公司。1.2實驗方法1.2.1實驗動物分組健康清潔級wistar大鼠84只，雄性，體重140－170克，稱量，標記，完全隨機分為空白對照組（A組）、病理模型組（B組）、安胃湯大劑量組（C組）、安胃湯中劑量組（D組）、安胃湯小劑量組（E組）、維酶素對照組（F組）、胃復(fù)春對照組（G組）共七組，每組12只。1.2.2實驗性大鼠慢性萎縮性胃炎模型的制備[12]造模方法依據(jù)張秋霞等方法進行，大鼠飲食不限，適應(yīng)性飼養(yǎng)3天后，除空白組自由飲用自來水外，其它六組將配好的造模試劑MNNG儲備液裝入避光飲水瓶內(nèi)給大鼠自由飲用，每24h更換1次藥液，造模期間不再給予其它飲水，七組均普通塊料飼養(yǎng)。8周后各組隨機抽取模型組動物2只處死、開腹、取胃，在胃竇和胃體部各取一塊組織，用10%甲醛溶液固定做光鏡觀察。1.2.3造模成功標準經(jīng)病理確診，慢性萎縮性胃炎的病理診斷標準參見《中藥新藥臨［13］床研究指導(dǎo)原則》(2002年版)。⑴固有腺體萎縮；⑵黏膜肌層增厚；⑶可有腸上皮化生或假幽門腺上化生；⑷固有膜炎癥；⑸可有淋巴濾泡形成。1.2.4給藥方法A組：空白對照組：10只，正常喂飼料，4ml純凈水灌胃，1次/日。與其余各組同時至第12周結(jié)束。15 B組：病理模型組：10只，正常喂飼料，4ml純凈水灌胃，1次/日。與其余各組同時至第12周結(jié)束。C組：安胃湯大劑量組：10只，從第9周開始灌喂安胃湯混懸液，用安胃湯免煎劑配成濃度為17.1g/ml的藥液，按1ml/100g灌胃，1次/日，連續(xù)灌胃給藥至第12周結(jié)束。D組：安胃湯中劑量組：10只，從第9周開始灌喂安胃湯混懸液，用安胃湯免煎劑配成濃度為8.55g/ml的藥液，按1ml/100g灌胃，1次/日，連續(xù)灌胃給藥至第12周結(jié)束。E組：安胃湯大劑量組：10只，從第9周開始灌喂安胃湯混懸液，用安胃湯免煎劑配成濃度為4.26g/ml的藥液，按1ml/100g灌胃，1次/日，連續(xù)灌胃給藥至第12周結(jié)束。F組：維酶素對照組：10只，從第9周開始灌喂維酶素混懸液，濃度為0.1g/ml，按1ml/100g灌胃，1次/日，連續(xù)灌胃給藥至第12周結(jié)束。G組：胃復(fù)春對照組：10只，從第9周開始灌喂胃復(fù)春懸濁液，5/6片配成液4ml，連續(xù)灌胃給藥至第12周結(jié)束。各給藥組以臨床常用量按體表面積換算，安胃湯大劑量組實驗灌胃劑量約相當于60千克成人臨床日用量的4倍（每千克體重）；中劑量組實驗灌胃劑量約相當于60千克成人臨床日用量的2倍（每千克體重）；小劑量組實驗灌胃劑量約相當于60千克成人臨床日用量的1倍（每千克體重）。1.2.5標本采集及處理各組用藥治療4W后禁食24ｈ，股動脈取血后，立即剖腹取胃，距賁門和幽門1.5cm離斷取出全胃，沿胃大彎側(cè)剖開，冰生理鹽水沖洗后，濾紙吸干鋪開，并向胃竇近幽門口至胃大彎方向取0.5㎝×0.5㎝胃黏膜組織4塊，除一塊新鮮組織留作PCR外，其余組織迅速臵于10%中性甲醛中固定，按照常規(guī)脫水，石蠟包埋，5um厚度。16 行HE染色觀察胃黏膜組織病理學(xué)改變，RT-PCR測定各組治療前后CAG大鼠胃粘膜及血液中Bcl-2、NF-κB基因表達的改變，采用TUNEL法檢測測定各組治療后CAG大鼠胃粘膜細胞凋亡的改變。1.3觀察指標及方法1.3.1大鼠一般狀態(tài)觀察各組實驗性大鼠的體重、食欲、精神狀態(tài)、活動情況、毛發(fā)光澤度及大、小便情況。一周測一次體重。1.3.2胃黏膜大體形態(tài)觀察用藥治療4W后，禁食24小時，股動脈取血后，立即剖腹取胃，距賁門和幽門1.5cm離斷取出全胃。沿胃大彎側(cè)剖開，冰生理鹽水沖洗后，濾紙吸干鋪開后觀察。1.3.3胃黏膜光學(xué)顯微鏡觀察大鼠取血結(jié)束后，用75%乙醇消毒大鼠皮膚，開腹迅速切除胃，沿胃大彎側(cè)剖開，取病變組織粘膜100mg左右，臵10%中性甲醛固定120min，后經(jīng)梯度酒精（A）脫水，即(80%A～95%A×2～100%A×2)45min/次，二甲苯透明lh/次，浸泡石蠟3次，每次45min，常規(guī)石蠟包埋，連續(xù)切片，切片厚度5um，裱于干凈載玻片上臵60℃度恒溫箱中烤片6小時后，常規(guī)HE染色，臵光鏡下觀察，并進行顯微攝影。HE染色程序⑴脫蠟至水:二甲苯10minx2→梯度酒精(100%→100%→95%→95%→90%→80%→70%)2min/次。⑵流動的自來水沖洗數(shù)min。⑶浸入蘇木素染液浸染5min。⑷鹽酸酒精分化5s→流水沖洗切片5min。⑸伊紅染液染3min→自來水洗3min。⑹脫水:梯度酒精(95%→95%→100%→100%)2min/次→二甲苯30s。⑺晾干，中性樹膠封片，結(jié)果觀察。HE染色結(jié)果判定：細胞核呈藍黑色，胞漿呈淡紅色。17 1.3.4胃黏膜與血液Bcl-2及NF-κB含量的測定1.3.4.1血細胞分離⑴大鼠股動脈取血，每只大鼠可取血10ml左右，將血放入預(yù)臵1mlACD抗凝劑的50ml塑料離心管中，將血液與抗凝劑充分混勻；⑵15ml玻璃離心管中加入3-5ml鼠淋巴細胞分離液，用玻璃滴管緩慢將約5ml抗凝血加在淋巴細胞分離液上，2500rpm離心15分鐘；⑶用玻璃滴管吸取中間淋巴細胞層至另一15ml玻璃離心管中,0.01M的PBS洗細胞3次，1500rpm離心5分鐘，將細胞轉(zhuǎn)移至1.5mlep管中，離心去上清，加入500ulTrizol中，裂解備用。1.3.4.2胃粘膜組織大鼠取血結(jié)束后，用75%乙醇消毒大鼠皮膚，開腹迅速切除胃，沿胃大彎側(cè)剖開，取病變組織粘膜100mg左右，直接放入1mlTrizol中，剪刀剪碎，研磨棒研磨后，放臵備用。1.3.4.3RNA提?、沤M織提取RNA樣品，10000rpm離心5分鐘，取上清液至于新的1.5mlEP管，加入200ul氯仿，顛倒混勻，室溫放臵10分鐘，10000rpm4℃離心10分鐘，取上層水相至一新的1.5mlEP管中，加入等體積異丙醇，顛倒混勻，室溫放臵5分鐘，12000rpm4℃離心10分鐘，棄上清液，加入500ul70%乙醇，旋起沉淀，10000rpm4℃離心5分鐘，棄上清液，倒臵離心管，室溫晾干后，加入100ulDEPC處理過的無菌水；⑵血液細胞提取RNA樣品（過程同⑴）；⑶紫外分光光度計測A260、A280的OD值，計算RNA含量。1.3.4.4引物設(shè)計RatGAPDHFCCATGGAGAAGGCTGGGRatGAPDHRCAAAGTTGTCATGGATGACC擴增長度：195bpRatBcl-2FCGACTTTGCAGAGATGTCCARatBcl-2RCATGCTGGGGCCATATAGTT擴增長度：289bp18 RatNF-kBFAGCAACCGAAACAGAGAGGARatNF-kBRTGACCTGCGGGTAAGATTTC擴增長度：111bp注：F代表上游引物，R代表下游引物，每個因子有2條引物。1.3.4.5RT-PCRRNA1-3ug5*MMLVbuffer6ulOligo-dT1uldNTP2ulRnaseinhibeter1ul加DEPC水至30ul60℃反應(yīng)，1小時95℃滅活5分鐘Real-timePCR體系：SYBRgreenmix10ul上游引物1ul下游引物1ulcDNA2ul加滅菌水至20ulReal-timePCR反應(yīng)過程：（40個循環(huán)）95℃預(yù)變性5分鐘95℃變性30秒55℃退火30秒72℃延伸30秒最后溶解曲線30分鐘19 1.3.4.6結(jié)果分析反應(yīng)結(jié)束后保存檢測數(shù)據(jù)文件，調(diào)節(jié)baseline的start值，stop值以及Threshold值，使Stdcurve窗口下的標準曲線圖達到最佳（|r|介于0.97—1），在Reporter窗口下記錄儀器自動分析計算出的未知標本數(shù)值B(Qty)。（圖片見附錄四）考慮到各個樣本總RNA濃度的差異，最終計算結(jié)果按下列公式換算:目的基因蛋白相對含量=目的基因蛋白含量÷內(nèi)參基因（GAPDH）蛋白含量×5/6。1.3.5TUNEL法檢測測定各組大鼠胃粘膜細胞凋亡的改變⑴原理細胞發(fā)生凋亡的過程中，內(nèi)源性的核酸內(nèi)切酶會被激活使DNA發(fā)生裂解產(chǎn)生雙鏈、低分子量DNA片段和高分子量單鏈DNA缺口端，這些鏈的缺口可以用酶標記核昔酸3’—H0末端做上標記。而本次檢測的原理就是在非模板依賴的方式下使末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶催化3’—H0末端核昔酸聚合反應(yīng)，從而達到標記DNA裂解鏈斷端缺口的目的。標記的熒光素由羊的結(jié)合辣根過氧化物酶(POD)的Fab段抗體識別。酶底物顯色反應(yīng)后，用光鏡檢查已染色的細胞。⑵方法①石蠟切片：常規(guī)脫蠟入水，石蠟務(wù)必脫蠟干凈；②蛋白酶K：(20ug/m1溶于Tris/HCL中，Ph7.4—8.0)室溫孵育15—30分鐘。PBS洗2次。③標記:PBS洗2次，擦干樣品周圍的水，滴加50ul的TUNEL反應(yīng)混合溶液，加蓋蓋玻片，在濕盒中37℃孵育60分鐘。PBS洗3次。在熒光鏡下分析樣品結(jié)果。④信號轉(zhuǎn)化和分析:擦干樣品周圍的水，加人50ulPOD轉(zhuǎn)化劑，加蓋蓋玻片在濕盒中37℃孵育30分鐘，PBS洗3次；加人50~100u1DAB底物溶液在室溫下孵育10分鐘，PBS洗3次；封片后熒光鏡下20 分析樣品結(jié)果。⑤陰性對照：經(jīng)過固定通透后的細胞樣品，加入含有核普酸混合液的反應(yīng)液50ul代替TUNEL反應(yīng)混合溶液，余下相同。⑥陽性對照：經(jīng)過固定通透后的細胞樣品，加入細球菌的核酸酶使之產(chǎn)生DNA鏈缺口，余下相同。⑶結(jié)果判斷TUNEL陽性細胞（即凋亡細胞）在光鏡下的特征是:細胞收縮變小，呈圓形，與周圍細胞分離，凋亡細胞胞核被染成藍黑色。凋亡指數(shù)(AI)計算方法:數(shù)5個高倍鏡>1000個細胞，分開計凋亡細胞數(shù)目和總的細胞數(shù)。Al=凋亡細胞數(shù)/總細胞數(shù)×100%。1.3.6統(tǒng)計學(xué)方法所有數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標準差(x±S)表示。用SPSS統(tǒng)計軟件(Spss17.0forwindows統(tǒng)計學(xué)軟件包)進行組間方差分析，多組均數(shù)比較采用ANOVA檢驗，以P<0.05為差異有顯著性。21 2技術(shù)路線圖Wistar大鼠隨機分組造模觀察造模成功與否藥物干預(yù)處死動物PCR檢測Bcl-2和1取血液樣本觀察胃粘膜NF-κB基因表達的2剖腹取胃粘組織形態(tài)改變膜組織組織石蠟包埋切片1行HE染色觀察胃黏膜組織病理改變2TUNEL法檢測檢測胃粘膜細胞凋亡探討安胃湯治療CAG療效及作用機制22 3實驗結(jié)果3.1動物外觀觀察空白組大鼠：精神狀態(tài)較好，食物攝取量穩(wěn)定，體重增加，動作敏捷，毛色光澤，尾色淡紅，大、小便正常；病理模型組大鼠：神態(tài)萎靡，食物攝取量漸減，形體偏小，反應(yīng)遲鈍，眼睛無神，毛發(fā)雜亂無光澤，喜換抱堆取暖，尾巴顏色淡白，大便時干濕稀。大鼠經(jīng)過治療后：上述癥狀和體征逐漸改善，治療期間體重增長。安胃湯大劑量的改善情況比較明顯；維酶素對照組、胃復(fù)春對照組、安胃湯低劑量組大鼠也有所恢復(fù)，但不及安胃湯大、中劑量組明顯；低劑量組、胃復(fù)春對照組大鼠的一般表現(xiàn)略優(yōu)于維酶素對照組。3.2胃黏膜大體形態(tài)觀察正常組的胃黏膜粉紅色，表面較多粘液，光滑有光澤，皺襞表面光滑、規(guī)則，胃壁的彈性較好；模型組胃黏膜厚度變薄，表面粘液少，色灰或偏白，皺襞稀少、較低甚至消失，排列紊亂，胃壁的彈力低；安胃湯大、中、小劑量組、維酶素對照組及胃復(fù)春對照組部分胃黏膜恢復(fù)情況良好，以高、中劑量組為明顯。（見附錄一）3.3胃黏膜光學(xué)顯微鏡觀察空白組：胃黏膜厚，各層結(jié)構(gòu)正常，胃黏膜上皮細胞排列整齊，固有腺體形狀規(guī)則，細胞呈單層柱狀，胞漿透明或呈小空泡狀，腺上皮和腺管分界清楚。未見萎縮、脫落或缺損，可見少許嗜酸性粒細胞。（見附錄二，圖8）模型組：胃黏膜全層明顯變薄，黏膜表面充血、黏膜下層充血，局灶上皮細胞脫落、糜爛，黏膜固有層淋巴細胞浸潤、部分有淋巴濾泡形成、淋巴管擴張，胃黏膜固有腺體破壞，數(shù)量明顯減少，排列稀疏紊亂，體積縮小，個別呈囊狀擴張。（見附錄二，圖9）大劑量組：胃黏膜結(jié)構(gòu)較清晰，各層結(jié)構(gòu)基本正常，小灶性出血，23 未見炎癥壞死，胃黏膜固有腺體豐富排列較規(guī)則，無明顯數(shù)量減少，固有層見少許炎細胞浸潤。（見附錄二，圖10）中劑量組：黏膜上皮變薄，可見黏膜表層有變性壞死(缺損)，小條狀淋巴細胞浸潤，腺體形狀規(guī)則，未見萎縮脫落。（見附錄二，圖11）小劑量組：胃黏膜各層結(jié)構(gòu)基本正常，黏膜表層多見小血管充血，黏液多，有變性，多灶性中性粒細胞浸潤。（見附錄二，圖12）維霉素組：胃黏膜各層結(jié)構(gòu)基本正常，黏膜可見灶性炎癥壞死，腺體排列稍有紊亂，體積縮小，黏膜底層有小灶性中性粒細胞浸潤。（見附錄二，圖13）胃復(fù)春組：胃黏膜上皮稍變薄，黏膜上皮排列整齊，黏膜灶性出血，未見明顯萎縮、脫落或缺損，黏膜固有腺體排列稍有紊亂，多灶性中性粒細胞浸潤。（見附錄二，圖14）說明胃復(fù)春、維霉素與安胃湯各組均能改善胃黏膜的病理形態(tài)，但以安胃湯高、中劑量組效果為佳。24 3.4胃黏膜和血液中Bcl-2及NF-κB含量的測定結(jié)果2曲線方程：△Ct=－263022Qty＋21.168900，R=0.971028（圖片見附錄四）3.4.1胃黏膜和血液中Bcl-2表達的影響⑴RT-PCR檢測各組大鼠胃粘膜Bcl-2相對含量各組分別與空白對照組相比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯大、中、小劑量組及維酶素、胃復(fù)春對照組與病理模型組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯小劑量組及維酶素、胃復(fù)春對照組與安胃湯大劑量組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯大、小劑量組及胃復(fù)春對照組與安胃湯中劑量組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,維霉素對照組與安胃湯中劑量組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯小劑量組與胃復(fù)春對照組比較無顯著差異（P>0.05），與維酶素對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。詳見表1。表1各組大鼠胃粘膜Bcl-2相對含量的分析結(jié)果比較（x±s，n=10）組別nBcl-21）空白對照組(A)1073.8140±4.31142病理模型組(B)10201.0890±23.713611）2）4）安胃湯大劑量組(C)10123.1090±23.261811）2）5）安胃湯中劑量組(D)10138.1750±11.156701）3）6）安胃湯小劑量組(E)10152.2630±5.233251)維酶素對照組(F)10165.4540±5.649541)胃復(fù)春對照組(G)10151.7410±8.77014注：原始數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)性檢驗，屬于正態(tài)資料，方差齊。與病理模型組比較1）P<0.01；與維霉素對照組比較2）P<0.01或3）P<0.05；與胃復(fù)春組比較4）P<0.01或5）P<0.05或6）P>0.05⑵RT-PCR檢測各組大鼠血液Bcl-2相對含量各組分別與空白對照組相比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯大、25 中、小劑量組及維酶素、胃復(fù)春對照組與病理模型組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯小劑量組及維酶素、胃復(fù)春對照組與安胃湯大劑量組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯大、小劑量組及胃復(fù)春對照組與安胃湯中劑量組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,維霉素對照組與安胃湯中劑量組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯小劑量組與胃復(fù)春對照組比較無顯著差異（P>0.05），與維酶素對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。詳見表2。表2各組大鼠血液Bcl-2相對含量的分析結(jié)果比較（x±s，n=10）組別nBcl-21）空白對照組(A)1071.9300±11.77925病理模型組(B)10180.7940±10.051361）2）4）安胃湯大劑量組(C)10104.4590±28.823641）2）5）安胃湯中劑量組(D)10123.3820±22.381401）3）6）安胃湯小劑量組(E)10142.5990±8.710211）維酶素對照組(F)10157.9330±10.814291）胃復(fù)春對照組(G)10140.0390±11.83980注：原始數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)性檢驗，屬于正態(tài)資料，方差齊。與病理模型組比較1）P<0.01；與維霉素對照組比較2）P<0.01或3）P<0.05；與胃復(fù)春組比較4）P<0.01或5）P<0.05或6）P>0.05。表1及表2結(jié)果說明：⑴安胃湯大、中、小劑量組及維酶素、胃復(fù)春對照組與病理模型組比較有顯著差異（P<0.01），說明安胃湯、維酶素、胃復(fù)春均能有效調(diào)控Bcl-2含量。⑵安胃湯大劑量組與維酶素組、胃復(fù)春組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯中劑量組與維酶素組比較有顯著差異（P<0.01），與胃復(fù)春對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；安胃湯小劑量組與胃復(fù)春對照組比較無顯著差異（P>0.05），與維酶素對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；說明安胃湯大、中劑量組調(diào)控Bcl-2含量的效果較維霉素與胃復(fù)春對照組效優(yōu)。26 ⑶安胃湯大、小劑量組與中劑量組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；安胃湯大劑量組與小劑量組比較有顯著差異（P<0.01）；說明安胃湯不同濃度組對Bcl-2含量的調(diào)控呈量效關(guān)系。3.4.2胃黏膜和血液中NF-kB表達的影響⑴RT-PCR檢測各組大鼠胃粘膜NF-kB相對含量各組分別與空白對照組相比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯大、中、小劑量組及維酶素、胃復(fù)春對照組與病理模型組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯小劑量組及維酶素、胃復(fù)春對照組與安胃湯大劑量組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯大、小劑量組及胃復(fù)春對照組與安胃湯中劑量組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,維霉素對照組與安胃湯中劑量組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯小劑量組與胃復(fù)春對照組比較無顯著差異（P>0.05），與維酶素對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。詳見表3。表3各組大鼠胃粘膜NF-kB相對含量的分析結(jié)果比較（x±s，n=10）組別nNF-kB1）空白對照組(A)10122.1460±7.32868病理模型組(B)10330.4660±15.860871）2）4）安胃湯大劑量組(C)10166.8490±7.466381）2）5）安胃湯中劑量組(D)10180.1700±12.605791）3）6）安胃湯小劑量組(E)10193.2670±13.804751）維酶素對照組(F)10205.6170±15.042951）胃復(fù)春對照組(G)10192.5920±6.89466注：原始數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)性檢驗，屬于正態(tài)資料，方差齊。與病理模型組比較1）P<0.01；與維霉素對照組比較2）P<0.01或3）P<0.05；與胃復(fù)春組比較4）P<0.01或5）P<0.05或6）P>0.05。⑵RT-PCR檢測各組大鼠血液NF-kB相對含量各組分別與空白對照組相比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯大、27 中、小劑量組及維酶素、胃復(fù)春對照組與病理模型組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯小劑量組及維酶素、胃復(fù)春對照組與安胃湯大劑量組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯大、小劑量組及胃復(fù)春對照組與安胃湯中劑量組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）,維霉素對照組與安胃湯中劑量組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯小劑量組與胃復(fù)春對照組比較無顯著差異（P>0.05），與維酶素對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）。詳見表4。表4各組大鼠血液NF-kB相對含量的分析結(jié)果比較（x±s，n=10）組別nNF-kB1）空白對照組(A)10121.7180±12.50532病理模型組(B)10311.4400±14.295231）2）4）安胃湯大劑量組(C)10154.9240±7.681851）2）5）安胃湯中劑量組(D)10167.1640±8.757131）3）6）安胃湯小劑量組(E)10179.7460±13.159101）維酶素對照組(F)10192.0120±13.794211）胃復(fù)春對照組(G)10179.5370±12.22419注：原始數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)性檢驗，屬于正態(tài)資料，方差齊。與病理模型組比較1）P<0.01；與維霉素對照組比較2）P<0.01或3）P<0.05；與胃復(fù)春組比較4）P<0.01或5）P<0.05或6）P>0.05。表3及表4結(jié)果說明：⑴安胃湯大、中、小劑量組及維酶素、胃復(fù)春對照組與病理模型組比較有顯著差異（P<0.01），說明安胃湯、維酶素、胃復(fù)春均能有效調(diào)控NF-kB含量。⑵安胃湯大劑量組與維酶素組、胃復(fù)春組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯中劑量組與維酶素組比較有顯著差異（P<0.01），與胃復(fù)春對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；安胃湯小劑量組與胃復(fù)春對照組比較無顯著差異（P>0.05），與維酶素對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；說明安胃湯大、中劑量組調(diào)控NF-kB含量的效果較維霉素、胃復(fù)春對照組效28 優(yōu)。⑶安胃湯大、小劑量組與中劑量組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；安胃湯大劑量組與小劑量組比較有顯著差異（P<0.01）；說明安胃湯不同劑量組對NF-kB含量的調(diào)控呈量效關(guān)系。3.5細胞凋亡檢測（TUNEL法）測定治療后各組CAG大鼠胃粘膜細胞凋亡的改變情況。安胃湯大劑量組與空白對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），其余各組分別與空白對照組相比較有顯著差異（P<0.01）。安胃湯大、中、小劑量組及維酶素、胃復(fù)春對照組與病理模型組比較有顯著差異（P<0.01），說明安胃湯、維酶素、胃復(fù)春均能促進細胞凋亡。安胃湯小劑量組及維酶素、胃復(fù)春對照組與安胃湯大劑量組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯大、小劑量組及胃復(fù)春對照組與安胃湯中劑量組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05），維霉素對照組與安胃湯中劑量組比較有顯著差異（P<0.01）；安胃湯小劑量組與胃復(fù)春對照組比較無顯著差異（P>0.05），安胃湯小劑量組與維酶素對照組比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P<0.05）；說明安胃湯大、中劑量組促進細胞凋亡的效果較維霉素、胃復(fù)春對照組效優(yōu)，安胃湯不同劑量組對細胞凋亡的調(diào)控呈量效關(guān)系。詳見表5。表5各組大鼠胃粘膜細胞凋亡的改變情況分析結(jié)果比較（x±s，n=10）組別n細胞凋亡指數(shù)AI1）空白對照組(A)1020.8010±1.23695病理模型組(B)104.3740±0.804161）2）4）安胃湯大劑量組(C)1018.2240±1.250001）2）5）安胃湯中劑量組(D)1015.7250±1.741491）3）6）安胃湯小劑量組(E)1013.2530±2.223011）維酶素對照組(F)1010.8300±5.189111）胃復(fù)春對照組(G)1013.1050±2.42455注：原始數(shù)據(jù)經(jīng)正態(tài)性檢驗，屬于正態(tài)資料，方差齊。與病理模型組比較1）P<0.01；29 維霉素對照組比較2）P<0.01或3）P<0.05;與胃復(fù)春組比較4）P<0.01或5）P<0.05或6）P>0.05圖片說明（圖片見附錄三）：與空白組相比，病理模型組大鼠TUNEL陽性細胞數(shù)目較少且散在分布，AI明顯降低；安胃湯大劑量組和安胃湯中劑量組見較多的TUNEL陽性細胞，AI明顯上升；安胃湯小劑量組、胃復(fù)春、維霉素對照組TUNEL陽性細胞也有一定增多。4討論4.1現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對慢性萎縮性胃炎的認識[14-15]CAG和胃癌密切相關(guān)，已被WHO定為癌前疾病范圍，腸上皮化生和胃粘膜異型增生都是胃癌前病變范圍，經(jīng)過比較長時間的[16]積累和變異過程后CAG有可能發(fā)展為胃癌。胃粘膜的異型與增生是指沒分化成熟的細胞在胃內(nèi)分化、增殖時偏出正常的生長，大多發(fā)生在胃上皮和腸化生上皮，當發(fā)生胃癌相關(guān)疾病時往往都會經(jīng)過這樣一個增生的階段。該階段在深層中原有的腺管會囊狀擴張，從而導(dǎo)致異型增生出現(xiàn)局灶狀，表面隆起，胞核發(fā)生增大和畸形，胞體形狀變柱狀，腺管排布密集。內(nèi)鏡下觀察到的病灶大多在2cm以下，類似于表淺的隆起型的早期胃癌，有的有小息肉狀、結(jié)節(jié)狀或扁平花壇狀（Ⅱa）；少數(shù)增生隆起的中央會有糜爛（Ⅱa+Ⅱc），或灶處平坦僅剩下粘膜粗糙、蒼白等改變（Ⅱb）。跟據(jù)細胞的異形程度的不同，增生可分為輕、中和重度。輕、中度大部分為良性再生，臨床可以多見輕度的、可逆轉(zhuǎn)的炎癥病變；中度會變?yōu)殚L時期的穩(wěn)定階段；約10%的患者可能由于時間的變化而發(fā)生進展，5到15年有可能變?yōu)橹囟鹊漠愋驮錾．斶M入重度階段則病變發(fā)展會變得加速，是癌前相對比較短的一階段，可能在被確診為重度異型增生同時或在此之后的幾個月內(nèi)會有一半以上的概率發(fā)現(xiàn)胃癌存在?？梢哉J為CAG發(fā)生在先，胃癌在后，是胃癌發(fā)生的先決條件。CAG主要的發(fā)生部位在胃竇與胃體部，可以分為胃體胃炎（A型）與胃竇胃炎（B型），兩者都有30 可能惡化成為胃癌。A型因為有內(nèi)因子等分泌的參與可能會發(fā)生惡性貧血，所以WHO把惡性貧血也當作胃癌前的疾病。我國比較常見有B型。CAG的病變特點是以腺體發(fā)生萎縮（低酸和無酸）、粘膜的慢性炎癥以及胃粘膜發(fā)生化生（主要是腸上皮化生）為主。病變較重者其胃粘膜的腸化生程度也會較廣泛，且常見異型增生，還可能甚至癌變。CAG的病因?qū)W因為有待完善，一般認為與環(huán)境因素和自身的體質(zhì)相關(guān)聯(lián)。凡是有可能導(dǎo)致胃黏膜損傷的，如咖啡、酒、茶、過冷、粗糙、過熱的食物刺激；各種導(dǎo)致反流的原因都可以破壞黏膜屏障，比如尼古丁，會影響胃黏膜血液循環(huán)從而導(dǎo)致幽門括約肌的功能紊亂造成膽汁返流；還有長期服用非皮質(zhì)激素類消炎藥等據(jù)有抑制胃黏膜前列腺素的合成作用藥物，破壞黏膜屏障等的都可以視為損傷因素；HP的感染和CAG的發(fā)生也密切相關(guān)，臨床統(tǒng)計有90%以上的CAG患者伴有HP感染。隨體制下降、年齡增加，表皮生長因子和胃泌素等的缺少，或胃黏膜的神經(jīng)終器對這些因子刺激不敏感，都可能會引發(fā)黏膜萎縮，從而累積為CAG的發(fā)病，概率增高。除此之外，營養(yǎng)不良、肝硬化合并門脈高壓、心衰等都可能會引起CAG的發(fā)生。臨床上的慢性腎上腺皮質(zhì)功能減退、糖尿病、干燥綜合征和甲狀腺病患者也都多伴有CAG。胃部其他疾?。ㄈ缥敢哼^多、胃潰瘍、胃息肉等）也常合并發(fā)生在CAG中。此外還有遺傳因素等等。目前現(xiàn)代醫(yī)學(xué)關(guān)于慢性萎縮性胃炎尚無特效療法，能找到病因者應(yīng)進行病因治療。①飲食少食用過甜過酸的飲料或食物，宜無刺激性的容易消化的食物，忌咖啡、煙酒和濃茶，進食的時候要細嚼慢咽等。②對癥治療以對癥治療為主，惡心、腹脹、嘔吐可口服胃腸動力藥，如多潘立酮、甲氧氯普胺或西沙必利；消化不良者予胃黏膜保護劑如硫糖鋁；有膽汁返流的可以予硫糖鋁配合胃腸動力藥，中和膽鹽防止返流癥；有腸腺化生者可給予胃復(fù)春，猴菇菌片及維生素等；31 伴惡性貧血者可給予維生素B12和葉酸。對有不典型增生和腸腺化生者應(yīng)該密切隨訪，最好6到12個月復(fù)查胃鏡。③抗菌HP感受陽性者可給予H2受體拮抗劑或質(zhì)子泵抑制劑加兩種抗菌藥為主的三聯(lián)療法，也可給予以鉍劑為主的三聯(lián)療法，如甲硝唑、阿莫西林、枸櫞酸鉍鉀。青霉素過敏者可用四環(huán)素、呋喃唑酮、慶大霉素、克拉霉素[17]等，甲硝唑胃腸反應(yīng)不能耐受者，可改用替硝唑。李兆申強調(diào)根除HP的重要性，根除HP有可能提高逆轉(zhuǎn)機率，調(diào)整動力同時要注意抑酸、抗酸，加強與改善胃黏膜保護機制等措施。④外科手術(shù)適用于同時伴有重度腸腺化生或重度不典型增生，尤其是不完全性的大腸腺化生。4.2中醫(yī)對慢性萎縮性胃炎的認識傳統(tǒng)中醫(yī)學(xué)里面沒有慢性萎縮性胃炎這一病名。根據(jù)文獻對“胃痞”、“胃脘痛”等的記載，從臨床表現(xiàn)上判斷可納入這些范圍?！吨T病源候論?卷二十二》中對脾胃病的病因何病機論有以下論述觀點：“脾者，臟也。胃者，腑也，脾胃二氣，相為表里。胃受谷而脾磨之，二氣平調(diào)，則谷化而能食。若虛實不等，水谷不消，故令腹內(nèi)虛脹，或泄，不能飲食，所以謂之脾胃氣不和不能飲食也?！?.2.1標本論在中醫(yī)觀點里認為本病的基本病機應(yīng)該是本虛標實：脾胃虛弱、[18]氣血陰陽虧損等為病本，寒熱錯雜、氣滯血瘀是病標。周信有教授認為病因病機有虛實兩個方面：虛者表現(xiàn)為久病不愈、素體不足，脾陽不足，脾胃虛弱，寒從中生，或胃絡(luò)失養(yǎng)，胃陰不足而痛；實者表現(xiàn)為情志失調(diào)、飲食不節(jié)、寒邪客胃而導(dǎo)致胃氣阻滯，痞滿疼痛，食滯不化，和降失司，這些多在脾胃氣虛的基礎(chǔ)上形成血瘀、寒凝、氣[19]滯，因而形成了本病本虛標實、虛實夾雜的病理特點。鄧鐵濤教授認為CAG為本虛標實的虛損病：發(fā)病的前提和本質(zhì)為本病之虛，主要為脾胃虧虛，胃虧虛于陰液，脾虧虛于陽氣；本病之實，多為虛損32 之后所繼發(fā)，脾氣虧虛血失鼓動，血滯成瘀因而阻絡(luò)，或者脾失健運，濕濁不化痰濕停聚，陰液虧損加之痰阻濕郁，引起虛火妄動。4.2.2脾虛論[20]黃明河教授認為，本病的基本病機是脾胃氣虛，氣滯血瘀，往往兼有肝胃不和、濕熱中阻或陰虛，總屬虛實夾雜，本虛標實，以活[21]血化瘀、益氣健脾為治療大法。陳福如認為勞倦所傷、七情所傷、飲食不節(jié)、絡(luò)脈瘀阻、氣血不和是導(dǎo)致該病發(fā)生的最常見病因，運化無權(quán)、脾胃虛弱是決定性因素，此外慢性淺表性胃炎失治也可演變成該病，藥物因素也可導(dǎo)致誘發(fā)CAG的復(fù)發(fā)或發(fā)生，因此，應(yīng)從CAG的轉(zhuǎn)歸、臟腑功能相關(guān)論、脾胃的生理功能及病程來認識本病的病機。[22]單兆偉教授認為“久病多虛”，本病病程較長，是一種慢性疾病，乃本虛標實之證，治療應(yīng)標本兼顧才能夠取得較好療效，健脾益氣是基本的治療方法，脾胃虛弱為本病的基本病機。4.2.3瘀毒論[23]田德祿教授認為本病病機特點是虛實夾雜，實，主要是濕阻、氣滯、血瘀等；虛，重在脾胃陰虛、氣（陽）虛；病變以脾胃為中心，可影響到肝腎，纏綿難愈與邪毒未盡有關(guān)：一方面，胃為陽土，易從陽化火，熱盛火盛成毒；另一方面病程遷延正虛邪戀，濕性穢濁久蘊成毒；結(jié)合西醫(yī)學(xué)認為本病與HP感染有關(guān)，提出本病發(fā)病與蟲毒密切相關(guān)，毒可致瘀生熱，若毒痰瘀三者互結(jié)往往可導(dǎo)致變癥發(fā)生。蔡[24]春江等認為CAG發(fā)展形成過程中“毒”和“濁”既是病理產(chǎn)物，也是一種致病因素，CAG患者氣機壅滯，胃腑損傷，日久則濁聚、氣滯、食積、血瘀、痰結(jié)、郁火、濕阻諸癥蜂起，而最重要的莫過于濁、毒之邪，濁毒相干難解難分，如油入面終使胃熱陰傷，胃絡(luò)瘀滯，氣滯絡(luò)阻，胃液減少，胃失滋潤榮養(yǎng)，黏膜變薄，腺體萎縮，日久成萎。33 4.2.4血瘀論[25]侯冬梅等通過研究發(fā)現(xiàn)除肝胃不和型外，CAG患者均有顯著的全血黏度異常，呈明顯高黏狀態(tài)，有微循環(huán)障礙，胃黏膜存在瘀血的病理改變，指出其與熱邪、陰虛、氣虛、瘀阻所致血瘀證有內(nèi)在聯(lián)[26]系。李秀仙認為，瘀血與CAG有密切關(guān)系，氣滯則血行不暢，陰虛胃熱則液枯津虧，氣虛則血運無力血脈不充、血行不暢均可致瘀。結(jié)合胃鏡下觀察見黏膜下血管透見、胃黏膜萎縮變薄，認為血管壁增厚、管腔狹窄、黏膜血管的扭曲等一系列病理改變亦屬血瘀的范疇；并提出適當合理選用活血化瘀之品，具有抑制組織異常增生、消除炎癥、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)免疫、改善胃黏膜血液循環(huán)等作用，從而可以達到改善臨床癥狀，逆轉(zhuǎn)不典型增生（ATP）、胃黏膜萎縮及腸上皮化生（IM）的目的。4.2.5正虛邪實[27]楊容青認為CAG致病機理與氣血營運密切相關(guān)，發(fā)病往往由于飲食、勞倦、情志諸因傷胃，胃氣不降的同時又影響并阻礙了脾土的運化，日久產(chǎn)生濕阻、氣滯、血瘀、熱蘊等邪，且耗傷陰津，損傷中氣，脾胃虛弱，人體臟腑的升降出入運動維持臟腑間及外界環(huán)境間的陰陽平衡，而中焦脾胃是血液的生化之源，氣血營運賴其所主，其升降又是全身氣機之樞紐，同時胃乃多氣多血之腑，胃內(nèi)氣血狀況直接影響著胃的強盛衰落；血運如何每因胃的通降功能障礙程度而改變，而氣血營運失常又每多先傷胃氣。凡胃腑氣血失于調(diào)暢多見胃氣虛弱、氣機痞阻，或胃氣壅滯，久而終致血瘀，化熱傷陰影響血行成氣血營運障礙為患，如《臨證指南醫(yī)案》所云:“久病入絡(luò)，氣血皆空”“凡氣久阻，血亦應(yīng)病”。初病在氣分，氣機遏阻胃痛且痞，有礙化生水谷之精微，繼之則兼瘀，見血行遲滯，瘀阻血絡(luò)，遷延不愈，瘀血凝聚于胃，瘀血不散則氣血升降功能則傷之更甚，久之則胃氣衰敗，形成惡變。故CAG有實證、虛證之分。實證以胃脘脹痛為主，34 包括胸背痛、脅痛、熱痛、刺痛、等，疼痛拒按，便燥，喜冷飲，口干苦，苔薄黃脈弦緊為多見。在實證中常見證型有血瘀痰阻、胃火郁熱、肝郁氣滯、食滯傷胃。虛證以胃脘部疼痛為主，包括冷、脹、灼痛，喜熱飲喜溫喜按，多見苔白脈沉。在虛證中常見證型有氣陰兩虛、脾胃虛熱、脾胃虛寒。另外，尚有肝郁脾虛者，屬虛實夾雜證型?？赏ㄟ^電子胃鏡、病理分析等現(xiàn)代醫(yī)學(xué)分析解剖手段進行虛實辨證，通過觀察胃黏膜病變與證的關(guān)系能更有效地增強辨證分型的準確性。如CAG胃鏡病理，胃黏膜紅白相間以紅為主，甚至充血、水腫、膽汁返流，多為氣滯證；胃黏膜紅白相間，以白為主，甚至黏膜蒼白，組織缺損，多為虛寒證；胃黏膜萎縮、粗糙，具有細小顆粒或有較大結(jié)節(jié)，形似息肉，血管顯露或局部見有瘀血，多為血瘀或血瘀痰阻證；胃黏膜糜爛，顏色變白，腺體萎縮，血管顯露，多為氣陰兩虛證或伴有瘀血所致。大致可以得出目前中醫(yī)學(xué)界對CAG病因病機比較一致的看法是：本病脾胃虧損較為突出，是主要的病理表現(xiàn)，脾陽虛弱、胃陰虧損加上血脈瘀阻導(dǎo)致胃失于濡養(yǎng)，是胃腺體萎縮的重要病機。正虛為本，邪實為標，虛實錯雜；病位在胃，病變涉及肝、脾、腎等臟器。在共同認識下稍微不同的是：有學(xué)者強調(diào)“虛損為本”，有學(xué)者強調(diào)“邪實為主”，也有學(xué)者強調(diào)“虛實錯雜為主”。4.3中醫(yī)藥治療現(xiàn)狀我國胃癌死亡率居各類腫瘤死亡率之首，中藥阻斷胃癌前病變有著重大的意義，中醫(yī)中藥在CAG的現(xiàn)代治療中發(fā)揮了較多優(yōu)勢。4.3.1治療原則[28]⑴調(diào)氣活血:肝脾胃功能的紊亂，胃為多氣多血之府，胃病之初期尚在氣分，日久入血，發(fā)展至萎縮性胃炎時，瘀血之象漸現(xiàn)?！熬貌《囵觥?，一方面慢性萎縮性胃炎患者一般病情遷延，漸致脾胃氣虛，氣為血之帥，氣虛無力助血行，而致血瘀；另一方面慢性萎縮性胃炎35 患者因肝脾胃功能的失和，導(dǎo)致氣機不暢，必然引起血行壅滯，產(chǎn)生血瘀征象；血瘀既是病理因素又是病理產(chǎn)物，血為氣之母，血瘀又加重氣滯和氣虛。瘀血不去，新血不生，最終氣血兩虛。因此，在治療慢性萎縮性胃炎過程中，要辨清補氣行血、行氣活血和氣血雙補，且[27]重視活血化瘀在治療本病中的地位，并貫徹整個治療始終。楊容青認為本病臨證治療以氣血營運為主導(dǎo)，以流通健運主證主方，將條達氣血、生化氣血，使氣血升降功能恢復(fù)正常作為治療重點，融于方藥運用之中，是CAG處方用藥的主要思路和思維方法。⑵健脾和胃:胃是水谷之海，腑以通為用以降為和。慢性萎縮性胃炎由于諸種病因所致脾胃功能的紊亂，升降失司，日久脾胃虛弱，則諸癥皆顯。腐熟水谷的功能有賴于脾的升清和胃之降濁，脾胃同處中州互為表里，生理相連，病理也相為影響。因此，治療上要注重調(diào)胃健脾、升降相因。如《臨證指南醫(yī)案》所述：“脾宜升則健，胃宜降則和”。⑶補虛泄實:慢性萎縮性胃炎性質(zhì)屬虛實夾雜，病程較長，“久病多虛”因虛致實。因此，治療上要掌握攻補輕重、攻補兼施、補虛瀉實之妙。⑷疏肝和胃:肝喜調(diào)達而主疏泄為剛臟。若氣機不暢肝失疏泄則橫逆于胃，致胃脹痛不適；胃主受納腐熟水谷，其功能的正常與否與肝的調(diào)暢和疏泄氣血之運行密不可分?！渡蚴献鹕鷷分性唬骸拔竿?，邪干胃脘病也……唯肝氣相乘為尤甚，以木性暴，且正克也?！敝委煈?yīng)調(diào)暢氣機疏肝和胃，以達胃之安和目的。4.3.2辨證施治4.3.2.1中藥治療[29]高富貴將本病中醫(yī)辨證分為胃陽虛、胃陰虛和胃陰陽兩虛3型。胃陽虛型用香砂六君子湯合理中湯加減；胃陰虛型用自擬三酸湯加味；胃陰陽兩虛型以自擬益胃湯加減，結(jié)果治療CAG108例統(tǒng)計36 [30]總有效率93.5%。張子理對68例合并腸化或異型增生的CAG進行辨證分型治療:脾虛氣郁用香櫞枳術(shù)湯治療，脾胃虛寒用黃芪建中湯治療，肝胃不和用四逆散治療，異型增生逆轉(zhuǎn)率為58.14%，腸化[31]逆轉(zhuǎn)率為64.00%，總有效率為94.12%。董建華等分為脾胃氣虛、虛火灼胃和氣陰兩虛三個證型，分別用甘溫建胃方（黨參、木香、三七粉、黃芪、茯苓、白術(shù)等）、甘平養(yǎng)胃方（太子參、雞內(nèi)金、香椽皮、炙百合、烏藥）和酸甘益胃方（石斛、烏梅、佛手、沙參、麥冬、丹參）。其中癌前病變征象改善率為95.76%，消失率為52.12%，主[32]癥痊愈率達65.45%，改善臨床癥狀率達98.78%。邢士杰等觀察本病60例，分為四個證型，以香砂六君子合黃芪建中湯加減健脾溫中和胃治療脾胃虛寒證；以化肝煎加減疏肝清熱和胃治療肝胃郁熱證；以沙參麥冬湯加減滋養(yǎng)胃陰治療胃陰不足證；以柴胡疏肝散加減疏肝和胃治療肝胃不和證。結(jié)果:有效32例（53%），顯效24例（40%），無效4例（7%）。[33]孟氏針對CAG血瘀、氣陰兩虛的基本病機，治以“活血通絡(luò)、益氣養(yǎng)陰”，以丹參飲加減合葉氏養(yǎng)胃湯，若脘腹脹滿者加炒萊菔子、砂仁；胃痛寒甚加川椒；消化不良者加炒雞內(nèi)金；便溏加白扁豆、炒山藥。同時還可參照胃鏡下黏膜的表現(xiàn)進行微觀辨證，如黏膜光滑、薄脆，分泌物少，顏色以紅為主，治以養(yǎng)陰益胃，以麥門冬、石斛、太子參、知母等滋陰之品為主；如黏膜蒼白、變薄，胃壁蠕動減弱，黏膜下血管清晰可見，治以健脾益氣，以白術(shù)黨參、黃芪等為主；若伴有不同程度的不典型增生或腸上皮化生，酌加薏苡仁、白花蛇舌草等以活血、清熱解毒并有一定的抗癌作用，利于恢復(fù)癌前病變；若見到胃鏡下水腫、黏膜粗糙不平、暗紅或有結(jié)節(jié)隆起呈鵝卵石樣或顆粒狀，或有幽門變形、瘀點瘀斑、瘢痕形成等，治以活血化瘀，加用三[34]七、丹參等。白氏自擬三參調(diào)胃湯加減[茯苓、石斛、沙參、枳殼烏梅、三七粉（沖服）、白術(shù)、丹參、黨參、白及、蒲公英]加減治療37 慢性萎縮性胃炎85例，有效27例，顯效54例，有效率95.3%，明[35]顯優(yōu)于口服維酶素片、維胃合劑及復(fù)方胃友片的對照組。孫氏自擬丹參瀉心湯治療慢性萎縮性胃炎45例，用干姜、半夏、丹參、黃芩、黃連、蒲公英、黨參等為基本方，若HP陽性，偏濕熱者，加連翹、白花蛇舌草；伴不典型增生、腸上皮化生者加土茯苓、莪術(shù)；偏虛寒者減黃連、黃芩用量，加高良姜、白術(shù)、桂枝；總有效率88.9%。李[36]氏以溫、清、和、補、消5法合用為基礎(chǔ)制定消痞湯（半夏、莪術(shù)、苦參、丹參、黨參、白術(shù)、枳實、黃連），濕盛型去枳實、白術(shù)，加炒白芍、炮干姜、茯苓；氣滯型加桂枝、黃芪；虛火型去莪術(shù)、半夏、黨參易太子參，加烏梅、石斛。共治療慢性萎縮性胃炎105例，[37]總有效率97.14%。袁氏用半夏瀉心湯隨癥加減治療36例，總有效率為94.44%。[38]趙氏用益胃化瘀湯（白芍15g、百合15g、佛手12g、莪術(shù)10g、丹參18g、烏梅9g、山楂20g、當歸9g、太子參15g、麥門冬10g、三七粉5g、香櫞12g）治療CAG45例，有效率達88.89%，隨證加減：上腹痛者，加延胡索、川楝子；吐酸者，加瓦楞子、烏賊骨；胃陰虛者，加玉竹、石斛；腹脹者加萊菔子、木香、炒麥芽、厚樸；惡心欲[27]嘔者，加姜竹茹、藿香。楊容青治療胃陰虛熱者，治以養(yǎng)胃生津、調(diào)中養(yǎng)陰，選用麥門冬湯為主方；胃火郁熱者，治以通下存津、清熱和胃，選用大柴胡湯為主方；肝郁氣滯者，治以理氣和胃、舒肝解郁，選用四逆散為主方；氣陰兩虛者，治以調(diào)中和胃、益氣養(yǎng)陰，以益氣養(yǎng)陰湯為主方；脾胃虛寒者，以溫中散寒、甘溫補虛，選用黃芪建中湯為主方；血瘀痰阻者，治以活血化瘀、益氣通絡(luò)，選用丹澤湯為主方；食滯傷胃者，治以和胃止痛、消食導(dǎo)滯，選用平胃散為主方；屬虛實夾雜之肝郁脾虛者，治以健脾化濕、舒肝和胃，選用柴平湯為主方；吞酸嘈雜者加吳茱萸、黃連；心悸不寐者加五味子、炒棗仁；干噦者加竹茹、白豆蔻；胃冷者加高良姜、丁香；腰膝軟者加杜仲、牛38 膝；刺痛甚者加五靈脂、蒲黃；背痛重者加葛根、細辛；脹重者加佛手、枳殼、厚樸；脅痛重者加郁金、香櫞；胃脘脹痛甚者加香附、延胡索；腹痛重者加香櫞、香附；腹泄便溏者加五味子、訶子、黃連等。諸藥與主證主方配合，隨證加減常獲良好效果。4.3.2.2針灸或針灸配合中藥內(nèi)服療法不少學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)，針灸在CAG的治療中也有較好的療效。王[39]氏等采用針刺配合中藥內(nèi)服治療CAG48例，取穴足三里、胃俞、中脘、內(nèi)關(guān)，脾胃濕熱加三陰交、陰陵泉，氣滯血瘀加血海；肝胃不和加太沖、肝俞；用平補平瀉法，另服中藥湯劑（炒白術(shù)、麥門冬、茯苓、炙黃芪、太子參、黃芩、百合、白花蛇舌草等）隨證化裁。結(jié)果顯示，臨床顯效15例，治愈9例，有效16例，無效8例，總有效[40]率83.3%。孫氏等采用針灸取中脘、曲澤、內(nèi)關(guān)、胃俞、足三里等穴治療CAG30例，結(jié)果治療組與對照組（甲硝唑、克拉霉素及維生素）總有效率分別為90%、75%，治療組療效明顯優(yōu)于對照組[41]（P<0.05）。黃氏等運用艾灸與中藥口服相結(jié)合的方法，將84例CAG患者隨機分為治療組與對照組各42例，治療組用艾條懸灸足三里、中脘、天樞加口服健脾瀉心湯（白術(shù)、廣木香、半夏、砂仁、陳皮、茯苓、太子參、黃芪等），每日2次，1個月為1療程。對照組服用葉酸5mg，每日2次；有Hp感染加用甲硝唑0.4g，每日2次，阿莫西林0.5g，每日3次，口服2周；腹脹、消化不良加用麗珠得樂220mg，每日2次，西沙比利5-10mg，每日3次。結(jié)果顯示：治療組有效21例，顯效18例，無效3例，總有效率92.86%；對照組有效16例，顯效14例，無效12例，總有效率71.43%，治療組總有效率高于對照組，統(tǒng)計學(xué)有明顯差異（P<0.05）。4.4動物實驗?zāi)Ｐ脱芯?.4.1運用各種理化因素反復(fù)刺激胃黏膜形成慢性胃炎[42]張淑芹等用Wistar大鼠20只，雌雄各半，用2%水楊酸鈉溶39 [43]液灌胃共6周，6周后光鏡檢查造模成功。張瀝等用55℃150g/L氯化鈉灌胃，每次2.5mL，每日2次，10周后建立大鼠模型。陶梅等[44]運用55℃蒸餾水，2.5mL/d，共灌胃24周，建立大鼠萎縮性胃炎[45]動物模型。北京中醫(yī)藥大學(xué)趙鳳志模仿此法并且做改進，以10%NaCl和60~70℃熱糊，結(jié)合幽門環(huán)處金屬彈簧植入法，灌胃2次/周，4個月后成功復(fù)制出大鼠慢性萎縮性胃炎模型，并伴有不同程度IM及異型上皮增生，為胃癌的前期科研實驗創(chuàng)造了有利的條件。楊[46]鴻等建立膽汁反流導(dǎo)致的CAG動物模型，采用大鼠十二指腸橫斷加胃空腸吻合術(shù)，引起胃黏膜萎縮并初步分析其損傷機制：發(fā)現(xiàn)術(shù)后第14和20周大鼠的胃黏膜就出現(xiàn)萎縮性改變，病理形態(tài)學(xué)積分顯著增高。上述兩種方法由于其造成的模型病變都比較局限，均是由手術(shù)[47]方法建立的，所以沒有太多報道。蘇劍東等采用體積分數(shù)為60%乙醇、50℃脫氧膽酸鈉（20mmol/L）空腹灌胃及氨水自由飲用法來刺激胃黏膜，給予模型組（20只）6個月，對照組（10只）正常飼養(yǎng)，造模結(jié)束時有4只出現(xiàn)伴不典型增生，8只出現(xiàn)伴明顯腸上皮化[48]生，造模成功率答90%。姒健敏等應(yīng)用0.05%吲哚美辛，20mmol/L去氧膽酸鈉，60%酒精，0.05%~0.1%氨水，對SD大鼠給藥6個月，[49]成功地建立CAG模型，且穩(wěn)定性良好。危北海等采用寒涼膽汁灌胃、主動免疫、饑飽失常、去氧膽酸鈉自由飲用的綜合法，90天后成功造出大鼠CAG模型。4.4.2免疫因素制模法[42]張淑芹等采用主動免疫法建立慢性萎縮性胃炎模型，以Wistar大鼠雌雄各半共20只，每只大鼠皮下注射佐劑抗原（用同品系大鼠胃黏膜的生理鹽水組織勻漿與Freund佐劑1∶1配成乳劑）0.3mL，3周后重復(fù)注射1次，并且雙日自由進食，單日禁食，6周后病理證實造模成功。40 4.4.3有中醫(yī)特色的病癥結(jié)合模型[50]陳小野等觀察大鼠CAG病與證相結(jié)合的模型實驗，發(fā)現(xiàn)第四十五周胃黏膜病理改變，該模型復(fù)制用的是脫氧膽酸鈉加主動免疫和阿斯匹林溶液的交替飲用方法。其中腎虛證的模型采用的是阿斯匹林溶液或者以0.08%濃度加入脫氧膽酸鈉溶液中自飲肝郁證的模型采用的是腎上腺素注射加夾尾法；脾虛證的模型制備采用的是破氣、耗[51]氣加上饑飽失常法；造模時間總共是40周。徐珊等用MNNG(N-甲基-N’-硝基-N-亞硝基胍)，用電子分析天平稱取MNNG2g，用蒸餾水以2000mL稀釋配成濃度1mg/mL的保存液，每3天配制一次，4℃的冰箱中避光保存，每天取保存液將其稀釋濃度為100/mL作為各慢性萎縮性胃炎模型組大鼠的飲用水，共10周；同時用濃度40%的乙醉灌胃，2mL/只，每逢周一、四各灌胃1次，共10周。其中，濕熱證的模型組第7周起撤除普通飼料，換成高脂高糖飼料（2%膽固醇、20%蔗糖、67%普通飼料、1%膽酸鈉、10%豬油、）喂養(yǎng)，同時每天將大鼠放進人造模箱，恒溫干燥箱內(nèi)放有濕溫度表和超聲霧化器，箱內(nèi)相對濕度（95±3）%，溫度在（33±2）℃，2h/（次·d），造模4周；肝郁組第7周起用鉗子夾大鼠尾部，使老師處于激怒、打斗狀態(tài)，30min/（次·d），并且每7天0.15%腎上腺素腹側(cè)皮下注射1次，每次每只用量是0.1mL（含腎上腺素0.1mg），共4次，造模4周；脾虛證的CAG模型組，從第7周起用饑飽失常加上苦寒瀉下法建立脾虛證候模型：大鼠每天灌胃生大黃煎劑，濃度為1g/mL，20mL/（kg·d），1次/d，并且采取雙日足量喂食，單日禁食，連續(xù)6周。4.4.4生物制模法[52]Li等用小老鼠的適應(yīng)性H.pylori（cagA2，vacA2）來接種大鼠，結(jié)果兩個月后大鼠全部成功感染，其主要發(fā)生部位在胃竇，有些大鼠還發(fā)現(xiàn)潰瘍。潰瘍邊緣與胃竇部位能觀察到輕至中度的炎癥，潰瘍愈合時間延長，細胞凋亡數(shù)目明顯增加。41 4.5關(guān)于細胞凋亡的討論細胞凋亡（Apoptosis）是由自穩(wěn)機制促發(fā)的細胞程序化死亡，受基因調(diào)控。1972年英國科學(xué)家Kerr等人首先提出了生物學(xué)中的[53]Apoptosis的概念。細胞凋亡作為細胞的一種基本生命現(xiàn)象，不僅在個體形成、器官細胞量的平衡、機體衰老方面發(fā)揮重要作用，而且它與腫瘤的發(fā)生也密切相關(guān)。細胞凋亡與增殖失衡是腫瘤發(fā)生的生物學(xué)基礎(chǔ)。細胞凋亡是胃粘膜上皮細胞死亡的主要形式，與其生長發(fā)育、衰老、炎癥及腫瘤等生理病理狀態(tài)密切相關(guān)。粘膜憑借凋亡與增殖之間的平衡維持其完整性，細胞凋亡的抑制與細胞增殖的增強兩者都是腫瘤發(fā)生和生物學(xué)基礎(chǔ)。近年來研究發(fā)現(xiàn)，胃粘膜病變和細胞增殖及凋亡關(guān)系密切，細胞增殖和凋亡的相互消長決定了許多胃粘膜病變的發(fā)[54，55]生、發(fā)展及轉(zhuǎn)歸。研究發(fā)現(xiàn)CAG胃粘膜細胞凋亡增加，并認為[56，57]此種變化與粘膜萎縮、腸化乃至癌變都有密切關(guān)系，有學(xué)者據(jù)[58]此推測細胞調(diào)亡是胃癌演化進程中的早期事件。研究還發(fā)現(xiàn)細胞凋[59]亡與細胞增殖呈負相關(guān)。胃癌病人細胞凋亡受抑已是共識，而慢性萎縮性胃炎為胃癌前變化的最初階段，國內(nèi)臨床報道中藥可以阻斷或[3]逆轉(zhuǎn)胃癌的癌前病變，但其分子機制尚待闡明。因此，從細胞凋亡的角度闡明中藥治療CAG，干預(yù)胃癌的發(fā)生是我們研究的內(nèi)容之一。Bcl-2是從B淋巴細胞瘤中分離出來的原癌基因，是至今為止研究得最多的抑凋亡基因。該基因含有3個外顯子，其編碼的蛋白質(zhì)主[60]要分布于細胞膜、核膜和線粒體膜。Bcl-2可以抑制多種因素誘導(dǎo)的細胞凋亡。研究表明，Bcl-2抑制細胞凋亡可能與其以下幾種作用[4]有關(guān)。1.細胞催抗氧化作用：在去除生長因子所誘發(fā)的凋亡中，活性氧損傷（ROS）是促發(fā)細胞死亡的主要誘因，Bcl-2的過度表達可減少氧自由基產(chǎn)生和脂質(zhì)過氧化物的形成。Bcl-2可以抑制細胞色素c的釋放，從而抑制了超氧陰離子的產(chǎn)生。此外，Bcl-2還可以增加42 胞內(nèi)的谷胱甘肽（GSH）等抗氧化劑，升高NAD+/NADH的比值，抑制和凋亡相聯(lián)系的GSH降低，促進GSH進入核內(nèi)，從而影響細胞的氧化還原狀態(tài)。但也有證據(jù)表明，在沒有自由基的情況下Bcl-2也能抑制凋亡。因此，Bcl-2的性質(zhì)遠非僅僅是一種抗氧化劑。2.抑制[5]鈣離子跨膜流動：Wei等曾報道鈣泵特異性抑制劑Thapsigargen（TG）誘導(dǎo)的WEH17.2等細胞的凋亡可被Bcl-2所抑制，其原因是Bcl-2抑制了Ca2+的跨膜流動，提示Bcl-2可通過調(diào)節(jié)胞內(nèi)鈣離子濃[6]度來調(diào)節(jié)凋亡。3.離子通道蛋白和吸附/錨定蛋白最近Reed提出Bcl-2蛋白可能具有雙重功能：離子通道蛋白和吸附/錨定蛋白，提出Bcl-2抑制凋亡的部分新機制。目前Bcl-2是凋亡分子機制研究的主要靶分子。NF-κB屬于真核轉(zhuǎn)錄因子家族，共有5個成員，根據(jù)它們的Rel同源結(jié)構(gòu)域（RHD）C末端不同分為兩類:一類是NF-κB1（p50）和NF-κB2（p52），分別由前體蛋白p105和p100水解而來，C端不含轉(zhuǎn)錄活化域；另一類由RelA（p65）、RelB和RelC組成，C端含有轉(zhuǎn)錄活化域。NF-κB成員相互形成同源或異源二聚體后才具有轉(zhuǎn)錄活[61]性，通常所說的NF-κB是特指p50-RelA異二聚體。一般通過NIK→IKK→IκB→NF-κB信號通路活化NF-κB，即各種細胞外刺激激活NF-κB誘導(dǎo)激酶（NIK），NIK又激活I(lǐng)κB激酶（IKK），后者引起IκB磷酸化。磷酸化的IκB和泛素結(jié)合后被降解，NF-κB游離出來并轉(zhuǎn)位至核，作用于目的基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控區(qū)，調(diào)控基因表達。NF-κB活化的反饋調(diào)節(jié)有正反饋和負反饋兩種方式，即NF-κB調(diào)控的基因表達產(chǎn)物中既有能促進其活化的產(chǎn)物如TNF-α等，也有能抑制其活化的產(chǎn)物如IκBα。大約100余種基因可被NF-κB調(diào)控，多種細胞因子和粘附分子的基因啟動子或增強子中都具有NF-κB結(jié)合位點。研究表明，胃粘膜上皮細胞的凋亡調(diào)節(jié)與NF-κB有關(guān)。一方面，NF-κB可促進細胞凋亡，如引起促凋亡蛋白p53、Bcl家族中部分成43 [7]員（Bax、Bad、Bcl-Xs）表達增加。p53亦可誘導(dǎo)Bax活化、刺激[8]細胞色素C釋放、激活Caspase級聯(lián)反應(yīng)而促使細胞凋亡。Ryan等[62]新近研究結(jié)果也證實NF-κB在p53基因的上游對其進行調(diào)節(jié)，抑制NF-κB活性，明顯降低p53對腫瘤的監(jiān)視作用。另一方面，NF-κB[8]還可抑制細胞凋亡，如引起腫瘤壞死因子受體相關(guān)因子如TRAF1和TRAF2、凋亡抑制蛋白如c-IAP1和c-IAP2等表達增加，從而延長細胞生存期。抑癌基因PTEN具有促進細胞凋亡的作用，Vasudevan[63]等研究發(fā)現(xiàn)NF-κB（p65）通過阻斷CBP/p300和PTEN的啟動子結(jié)合，抑制PTEN基因表達，產(chǎn)生抗凋亡作用。NF-κB是促進細胞凋亡還是抑制凋亡目前尚不清楚，可能與微環(huán)境狀況、不同細胞因子相[8]互作用、刺激物如H.pylori的毒性及宿主的免疫功能有關(guān)。胃粘膜上皮惡性轉(zhuǎn)化過程中細胞增殖和凋亡活躍，使得細胞群不穩(wěn)定性增加，隨著病情進展，細胞增殖增加而凋亡逐漸減少。有學(xué)者推測在胃粘膜癌變過程中，可能有“細胞選擇性增殖”現(xiàn)象，導(dǎo)致一些增殖能力低下的細胞經(jīng)過凋亡被“淘汰”，而增殖能力強的細胞則通過不斷異常增殖而逐漸形成腫瘤。H.pylori感染后通過活化NF-κB導(dǎo)致一系列炎性因子產(chǎn)生，早期表現(xiàn)為粘膜充血、水腫、糜爛，后期慢性炎性反應(yīng)中，粘膜上皮逐漸萎縮，并出現(xiàn)腸上皮化生或不典型增生等癌前病變。由于炎性細胞呼吸爆發(fā)釋放氧自由基可對DNA造成損傷，引起上皮細胞突變，細胞頻繁增殖亦增加了DNA復(fù)制錯配的機會，加之“細胞選擇性增殖”現(xiàn)象，結(jié)果異常增殖能力強的細胞不斷增殖，最終導(dǎo)致胃癌形成。4.6安胃湯理法方藥的研究中醫(yī)的“痞滿”“胃脘痛”“嘈雜”在臨床上與CAG的癥狀表現(xiàn)類似。安胃湯是已故全國名老中醫(yī)林沛湘教授的經(jīng)驗方，林教授認為：胃氣以降為順，胃腑以通為用。胃病從胃本身來說其主要病機仍是胃失和降、胃腑失通。其二是胃為潤土，脾為燥土。胃氣以降為用，而44 脾氣以升為順，兩者關(guān)系相輔相成，相互為用，相互影響。CAG的病機在于稟賦不足、后天失調(diào)、或饑飽失常、勞倦過度、以及久病正虛不復(fù)等多種原因造成“脾不能升，胃不能降”。其病因病機復(fù)雜，涉及臟腑頗多。諸多醫(yī)家較一致認為脾胃虛弱為本，氣虛、陰虛、血瘀、氣滯和熱毒并見，兼見痰濁和濕邪，是一種虛實相兼，寒熱錯雜之病癥，病變主要涉及脾胃肝。安胃湯在林沛湘教授治療慢性胃病驗方基礎(chǔ)上組方而成，由半夏瀉心湯、芍藥甘草湯、丹參飲及百合湯等方化裁組合而成。具有消痞和胃、理氣化濕之功，在臨床應(yīng)用多年，療效顯著。黃連，苦寒，入心、胃、肝、小腸、大腸經(jīng)。功用瀉火解毒、清熱燥濕，主要用于濕熱中阻、胃熱脘痞嘔吐、瀉痢腹痛，亦可用于濕溫高熱、肝胃失和、嘔吐泛酸等癥?！侗静荼玖x》：“黃連大苦大寒，苦燥濕，寒勝熱，能泄降一切有余之濕火，而心、脾、肝、腎之熱，膽、胃、大小腸之火，無不治之。上以清風(fēng)火之目病，中以平肝胃之嘔吐，下以通腹痛之滯下，皆燥濕清熱之效也。……連之苦寒，尤以苦勝，故燥濕之功獨顯，凡諸證之必需于連者，類皆濕熱郁蒸，恃以為苦燥泄降之資，不僅以清熱見長，凡非舌厚苔黃、膩濁滿布者，亦不任此大苦大燥之品”?！侗静菥V目》：“去心竅惡血，解服藥過劑煩悶及巴豆、輕粉毒”。《神農(nóng)本草經(jīng)》：“主熱氣目痛，眥傷泣出，明目，腸癖腹痛下痢，婦人陰中腫痛”?！墩渲槟摇罚骸捌溆糜辛盒剐呐K火，一也；去中焦?jié)駸?，二也；諸瘡必用，三也；去風(fēng)濕，四也；治赤眼暴發(fā)，五也；止中部見血，六也”?！秳e錄》：“主五臟冷熱，久下泄癖膿血，止消渴，大驚……調(diào)胃厚腸，益膽，療口瘡”。半夏辛溫，小毒，歸胃、脾、肺經(jīng)。具有消痞散結(jié)、降逆止嘔、燥濕化痰之功。功治臟腑濕痰，為治濕痰、寒痰之要藥；又和胃降逆，為嘔家要藥，不分寒熱皆可配伍用之；還可用于消胸痹、結(jié)胸、心下痞、梅核氣及瘰疬癭瘤之氣血痰聚?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》：“味辛，平，有45 毒。治傷寒寒熱，心下堅，下氣，喉咽腫痛，頭眩，胸脹，咳逆腸鳴，止汗”?！稖罕静荨罚骸鞍胂乃子脼榉嗡帲且?。止吐為足陽明，除痰為足太陰，小柴胡中雖為止嘔，亦助柴胡能主惡寒，是又為足少陽也，又助黃芩能去熱，是又為足陽明胃也。往來寒熱，在表里之中，故用此有各半之意，本以治傷寒之寒熱，所以名半夏”?！端幮哉摗罚骸跋迪?，開胃健脾，止嘔吐，去胸中痰滿，下肺氣，主咳結(jié)”?！侗静萁?jīng)疏》認為“半夏為足陽明胃經(jīng)之藥，而非肺經(jīng)之藥”。《別錄》：“消心腹胸膈，痰熱滿結(jié)，咳嗽上氣，心下急痛堅痞，時氣嘔逆”?！毒址健罚骸把云涑e冷，暖元藏，溫脾胃，進飲食，治心腹一切痃癖冷氣及年高風(fēng)秘、冷秘或泄瀉”?！夺t(yī)學(xué)起源》也認為：“治寒痰及形寒飲冷傷肺而咳，大和胃氣，除胃寒，進飲食”。干姜：辛熱，歸脾、胃、心、肺經(jīng)。功用溫肺化飲、溫中散寒、回陽通脈，能散脾胃寒飲，又助運脾陽，為溫中散寒之要藥。主用于脾胃寒證，亡陽證，寒飲伏肺喘咳等癥，虛實皆可?！侗静萸笳妗罚骸案山鬅釤o毒，守而不走，凡胃中虛冷，元陽欲脫，合以附子同投，則能回陽立效，……且同五味則能通肺氣而治寒嗽。同白術(shù)能燥濕而補脾，同歸芍則能入氣而生血。故凡因寒內(nèi)入，而見臟腑痼蔽，關(guān)節(jié)不通，經(jīng)絡(luò)阻塞，冷痹寒痢，反胃隔絕者，無不借此以為拯救除寒”?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》：“主胸悶咳逆上氣，溫中，止血，出汗，逐風(fēng)濕痹，腸癖下痢，生者尤良”?！墩渲槟摇罚骸案山溆糜兴模和ㄐ闹?，一也；去臟腑沉寒痼冷，二也；發(fā)諸經(jīng)之寒氣，三也；治感寒腹痛，四也”。烏藥：辛溫，歸肺、脾、腎、膀胱經(jīng)。功用溫腎散寒、行氣止痛，上可走脾肺，疏理胸腹之氣，下可溫腎散寒以溫散膀胱冷氣，胸腹之脹痛、疝氣、痛經(jīng)、尿頻遺尿等凡屬于氣滯虛寒皆可用之?！端幤坊x》：“烏藥氣雄性溫，故快氣宣通，疏散凝滯。甚于香附，外解表而理肌，內(nèi)寬中而順氣，以之散寒氣，則客寒冷痛自除；驅(qū)邪氣則天行疫瘴即卻；開郁氣，中惡腹痛，胸膈脹滿，頓然可減；疏經(jīng)氣，中風(fēng)46 四肢不遂，初產(chǎn)血氣凝滯，漸次能通，皆藉其氣雄之功也”?！侗静菥V目》：“治腳氣、疝氣，氣厥頭痛，腫脹喘急，止小便頻數(shù)及白濁”。《本草綱目拾遺》：“主中惡心腹痛，……宿食不消，天行疫瘴，膀胱痛間冷氣攻沖背膂，婦人血氣，小兒腹中諸蟲”。白芍：苦酸微寒，入肝、脾經(jīng)，功用斂陰止汗、養(yǎng)血調(diào)經(jīng)、平肝止痛?？嗫蔀a熱、酸能收斂，用于血虛淤血或陰虛有熱的月經(jīng)病，肝陰不足、肝郁氣滯或肝陽上亢的頭痛、眩暈、脅肋疼痛、脘腹四肢拘攣虛痛、陰虛盜汗或自汗等證?！侗静菥V目》：“止下痢腹痛后重”?！墩渲槟摇罚骸鞍籽a赤散，瀉肝補脾胃……其用有六：安脾經(jīng)，一也；治腹痛，二也；收胃氣，三也；止瀉痢，四也；和血脈，五也；固腠理，六也”?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》：“主邪氣腹痛，……止痛，利小便，益氣”?！侗静輦湟罚骸把a血，瀉肝，益脾，斂肝陰，治血虛之腹痛”?！侗静萸笳妗罚骸俺嗌炙幣c白芍藥主治略同，但白則有斂陰益營之力，赤則只有散邪氣行血之意；白則能于土中瀉木，赤則能于血中活滯”。百合：甘微寒，歸肺、心經(jīng)。功用養(yǎng)陰潤肺、養(yǎng)陰安神，性潤治肺臟燥或陰虛久咳之痰血，尤以治熱病后期之虛熱心煩導(dǎo)致的失眠。《本草綱目拾遺》：“清痰火，補虛損”?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》：“主邪氣腹脹，心痛。利大小便，補中益氣”。《日華子本草》：“安心，定膽，益智，養(yǎng)五臟。治癲邪啼泣、狂叫，驚悸”。丹參：苦微寒，入心、肝經(jīng)。功用活血調(diào)經(jīng)、清心安神、涼血消癰?？嗪敌梗挚扇胗谘?，為活血化瘀要藥，廣泛用于各種瘀血證，為婦科調(diào)經(jīng)止痛佳品，適用于經(jīng)產(chǎn)諸證，又善治癥瘕積聚的心腹刺痛；還善涼血清心而除煩安神，治溫病熱入營血之內(nèi)熱心悸失眠及癰腫瘡毒?！度杖A子本草》：“養(yǎng)神定志，通利關(guān)脈。治冷熱勞，骨節(jié)疼痛，四肢不遂。排膿止痛，生肌長肉……止血崩帶下，調(diào)婦人經(jīng)脈不勻。血邪心煩，惡瘡疥癬，癭贅腫毒，丹毒。頭痛，赤眼……”?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》：“主心腹邪氣，腸鳴幽幽如走水，寒熱積聚，破癥除47 瘕，止煩滿，益氣”。《吳普本草》：“治心腹痛”?！秳e錄》：“養(yǎng)血，去心腹痼疾結(jié)氣”?！兜崮媳静荨罚骸把a心定志，安神寧心。治健忘怔忡，驚悸不寐”?！侗静菥V目》：“活血，通心絡(luò)。治疝痛”。薏苡仁：甘淡微寒，入脾、胃、肺經(jīng)。功用健脾利水、滲濕止瀉，清熱排膿除痹、舒筋緩急。甘淡滲利瀉而不傷正，補脾而不滋膩，凡脾虛濕滯、水濕滯留均可用之，常用于脾虛泄瀉、水腫小便不利等證。滲濕而緩筋脈攣急，善治痹痛拘攣、腳氣浮腫。并可清熱排膿，用于肺癰、腸癰?！侗静菥V目》：“薏苡仁，陽明藥也，能健脾益胃。虛則補其母，故肺痿、肺癰用之。筋骨之病，以治陽明為本，故拘攣筋急、風(fēng)痹者用之。土能勝水除濕，故泄瀉、水腫用之”?！秳e錄》：“除筋骨邪氣不仁，利腸胃，消水腫，令人能食”。《食療本草》：“去干濕腳氣”?！侗静菪戮帯罚骸稗踩首钌评?，不至耗損真陰之氣，凡濕盛在下身者，最宜用之。視病之輕重，準用藥之多寡，則陰陽不傷，而濕病易去。故凡遇水濕之癥，用薏仁一、二兩為君，而佐之健脾祛濕之味，未有不速于奏效者也，倘薄其氣味之平和而輕用之，無益也”。《神農(nóng)本草經(jīng)》：“主筋急拘攣，不可屈伸，風(fēng)濕痹，下氣”。甘草：甘平，歸心、肺、脾、胃經(jīng)。功用清熱解毒、緩急止痛、益氣補中、祛痰止咳，調(diào)和諸藥，應(yīng)用廣泛。量大可用于心氣不足之心悸怔忡，補益心脾以復(fù)脈；脾胃虛弱中氣不足者，能補脾而益氣；潤肺祛痰而治咳喘；解百毒而治瘡瘍腫毒、食物和藥物中毒；能緩解拘攣而止虛痛，治腹痛攣急或四肢攣急。又善和百藥，寒熱通調(diào)，與熱藥同用能緩和其熱，以防燥烈傷陰；與寒藥同用能緩和其寒，以防傷及脾胃陽氣；與寒熱藥同用，能調(diào)和藥性以得其平；與峻烈藥同用，又能緩和藥物的作用等，故有“國老”之美稱?！侗静輬D經(jīng)》：“甘草能解百毒，為眾藥之要，孫思邈論云：有人中烏頭、巴豆毒，甘草入腹即定。方稱大豆解百藥毒，嘗試不效，乃加甘草為甘豆湯，其驗更速”?！稖罕静荨罚骸案收吡钊酥袧M，中滿者勿食甘，甘緩而雍氣，非48 中滿所宜也”?！渡褶r(nóng)本草經(jīng)》：“主五臟六腑寒熱邪氣，堅筋骨，長肌肉，倍氣力，金瘡腫，解毒”?！队盟幏ㄏ蟆罚骸案什?，陽不足者，補之以甘，甘溫能除大熱……腹中急痛，腹皮急縮者，宜倍用之。其性能緩急，而又協(xié)和諸藥，使之不爭，故熱藥得之緩其熱，寒藥得之緩其寒，寒熱相雜，用之得其平”?！侗静菥V目》：“解小兒胎毒驚癇，降火止痛”。木香：辛苦溫，入脾、胃、大腸、膽經(jīng)。功用行氣調(diào)中止痛。辛苦溫瀉通滯，為行氣止痛之要藥，行氣寬腸。凡脾胃或大腸氣滯諸證，皆可應(yīng)用，又能疏肝理氣助脾運化，肝失疏泄而致濕熱郁蒸、氣機阻滯之脅痛、脘腹脹痛，或黃疸皆可用之。在滋補劑中稍稍加之，則補而不膩?！端幮哉摗罚骸爸闻搜獨獯绦男耐床豢扇?，末，酒服之。治九種心痛，積年冷氣，痃癖癥塊脹痛，逐諸雍氣上沖煩悶。治霍亂吐瀉，心腹疚刺”?！侗静菥V目》：“木香乃三焦氣分之藥，能升降諸氣”。《日華子本草》：“治心腹一切氣，膀胱冷痛，嘔逆反胃，霍亂，泄瀉，痢疾，健脾消食，安胎”。安胃湯中半夏入胃為君，和胃降逆，燥濕開結(jié)，消痞除滿；黃連瀉火解毒，干姜溫中逐寒，二藥同用，寒熱并施，辛開苦降；百合味甘而性涼能清瀉胃腑之邪熱，養(yǎng)護胃氣；烏藥順氣開郁，散寒止痛，配合百合，則養(yǎng)津護胃而無滋膩之慮，行氣散寒而無溫燥之虞；白芍、炙甘草酸甘化陰以生津液，柔肝緩急而止疼痛；丹參、木香行氣滯而[64]化血瘀；薏苡仁，健脾清熱。本方取半夏瀉心湯調(diào)和脾胃治痞滿，芍藥、甘草湯緩急止痛，丹參飲、百合湯調(diào)和胃之氣血津液，使胃氣復(fù)于通降，藥物組成，大多配對而用，其功用相反相成，相得益彰，是和與降的統(tǒng)一，燥與潤的結(jié)合，體現(xiàn)了調(diào)理胃氣為主，兼顧脾肝的治療原則。[65]現(xiàn)代藥理研究認為：干姜的有效成分姜烯酮、干姜醚具有明顯的抗炎作用，干姜浸劑能抑制應(yīng)激性潰瘍與抑制胃液分泌和降低胃液49 酸度；黃連的有效成分小檗堿低濃度時興奮胃腸平滑肌，高濃度時則呈現(xiàn)解痙作用，黃連素和黃連甲醇對胃黏膜具有保護作用；白芍的有效成份白芍總苷具有增強人體免疫功能和鎮(zhèn)痛作用并具有解痙作用；半夏能調(diào)節(jié)胃腸道功能，半夏中的直鏈淀粉有抗炎、抗腫瘤作用，有顯著的抑制胃液分泌和胃液酸性成分的變化；丹參具有增加胃竇部和體部黏膜的血流量，具有保護黏膜屏障完整性，增強其防御機能的作用；烏藥對胃腸平滑肌具有雙重作用，能增加消化液的分泌；百合具有抗癌作用，從百合鱗莖中提出的一種生物堿，是有絲分裂毒素的一種典型代表，能抑制癌細胞的增殖，臨床上用以治療癌癥；甘草的有效成分甘草甲醇、甘草素、異甘草素對胃腸道平滑肌有明顯解痙作用，能調(diào)節(jié)機體免疫功能，具有抗炎、抗腫瘤作用；甘草鋅有一定的抗應(yīng)激和抗炎的作用，甘草總甙尚具有抗氧化作用；白芍甘草單用及合用對離體兔腸管運動有明顯的抑制作用；木香可升高血漿MLT水平，具有抗?jié)?、抗炎作用，對腸痙攣有對抗作用；薏苡仁的有效成分苡仁提物和苡仁丙酮提物均有抗癌作用。4.7安胃湯促進胃黏膜逆轉(zhuǎn)機制的探討⑴本實驗表明安胃湯對慢性萎縮性胃炎有很好的治療效果，具有如下作用：①改善胃黏膜組織病理形態(tài)；②調(diào)控基因Bcl-2與NF-kB的表達水平，改善胃黏膜狀態(tài)，促使胃黏膜修復(fù)；③安胃湯可能通過降低Bcl-2及NF-kB在胃黏膜及血液中的表達，調(diào)節(jié)促進細胞凋亡，增強黏膜屏障的防御和修復(fù)的功能，從而達到治療慢性萎縮性胃炎的目的。⑵本實驗為臨床上應(yīng)用安胃湯治療CAG患者提供了科學(xué)的依據(jù)。5存在的問題和展望⑴動物模型缺乏統(tǒng)一標準，實驗結(jié)果難以比較：由于慢性胃炎動物模型種類繁多，形成機制各異，科研選擇模型各有不同，缺乏公認的統(tǒng)一標準，致使中藥復(fù)方的實驗研究結(jié)果無法橫向比較，對綜合法50 制備的動物模型，各作用因素之間的關(guān)系和各因素在制模過程中所起作用的大小也較模糊，故建立統(tǒng)一有效慢性胃炎的動物模型是當務(wù)之急。⑵動物模型的中醫(yī)辨證分型無法分別，就安胃湯對何種類型的慢性萎縮性胃炎的治療效果較好，還無法有更好的實驗來證明。⑶慢性萎縮性胃炎的發(fā)生往往是多因素相互作用的結(jié)果，其作用機制比較復(fù)雜。從以往及本次實驗結(jié)果分析，安胃湯可能通過降低Bcl-2及NF-kB在胃黏膜的表達，促進細胞凋亡，增強黏膜屏障的防御和修復(fù)的功能，從而達到治療慢性萎縮性胃炎的目的。其作用也是多靶點、多途徑、多效應(yīng)的。因為經(jīng)費等條件限制，未能從更廣泛的角度去探討其作用機理，比較在CAG發(fā)生發(fā)展過程中各因素間的相互關(guān)系。結(jié)合現(xiàn)代醫(yī)學(xué)發(fā)展，我們希望進一步深入探討化濁解毒方治療慢性萎縮性胃炎的作用機理。51 結(jié)論1.安胃湯改善了實驗性慢性萎縮性胃炎大鼠組織病理學(xué)形態(tài)。具有保護胃黏膜、修復(fù)胃黏膜的作用。2.安胃湯在降低降低Bcl-2及NF-kB基因含量表達水平方面，安胃湯大劑量組作用明顯強于中、小劑量組，中劑量組作用強于小劑量組，體現(xiàn)出一定的量效關(guān)系。3.安胃湯在降低Bcl-2及NF-kB基因含量表達水平方面，安胃湯大、中劑量組作用明顯強于維霉素對照組及胃復(fù)春對照組。4.安胃湯降低慢性萎縮性胃炎大鼠Bcl-2及NF-kB基因含量表達水平，促進細胞凋亡，這可能是安胃湯減緩胃黏膜細胞向異型增生和胃癌方向轉(zhuǎn)變進程的重要機制。52 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綜述中藥抗胃癌機制的基因分子水平實驗研究現(xiàn)狀123余翥，林壽寧，張學(xué)寧（1.廣西中醫(yī)藥大學(xué)2009研究生2班，廣西南寧530001；2.廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院消化內(nèi)科，廣西南寧530001；3.廣西中醫(yī)藥大學(xué)2011研究生2班，廣西南寧530001）[關(guān)鍵詞]中醫(yī)藥；胃癌；基因分子；實驗研究現(xiàn)代分子生物學(xué)的不斷發(fā)展和檢測技術(shù)的提高為中醫(yī)科研實驗創(chuàng)造了十分有利的條件?，F(xiàn)就近幾年中醫(yī)科研從基因分子水平上對中藥治療胃癌作用機質(zhì)的研究作一綜述。1中藥提取制劑類的研究[1]Bcl-2蛋白家族是細胞凋亡過程中重要的調(diào)控因子，分布于核膜和胞漿內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，可穩(wěn)定細胞內(nèi)質(zhì)膜系統(tǒng)、抑制線粒體內(nèi)離子及細胞色素C的釋放，從而抑制細胞凋亡的發(fā)生，過度表達是腫瘤發(fā)生及[2]產(chǎn)生耐藥性的重要原因之一。高澤立等報道猴菇多糖口服治療后，20例CAG伴IM組12例腸上皮化生消失，20例CAG伴DYS組8例異型增生消失；Bcl-2表達量(熒光指數(shù)FI)減少，治療前后FI陽性率有顯著差異(P<0.05)，猴菇多糖可降低胃黏膜癌前病變Bcl-2蛋白[3]表達。姚保泰等報道鹽酸小檗堿對大鼠胃癌前病變模型干預(yù)后，可增加胃癌前病變細胞的凋亡率，降低Bcl-2蛋白表達水平，下調(diào)Bcl-2mRNA的表達水平。[4]P53是一類重要的抑癌基因,參與細胞周期調(diào)控,促進細胞凋亡,維持基因組的穩(wěn)定性，很可能起到控制Bax、Bcl-2之間比率的作用，[5]是迄今發(fā)現(xiàn)的突變頻率最高的抑瘤基因。PCNA是一種細胞核蛋白質(zhì)，是細胞DNA合成所必需的，對細胞由G1期向S期過渡起著重[6]要的調(diào)節(jié)作用，與胃癌的細胞增殖、浸潤及轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。Bax則65 具有對抗Bcl-2蛋白抑制細胞凋亡的作用，可促進線粒體內(nèi)細胞色素C的釋放，其高表達可促進細胞凋亡。Bcl-2與Bax二者的比值決定[7]細胞接受刺激信號是凋亡還是存活。向廷秀等報道，槲皮素對胃癌細胞增殖有抑制作用，可改變胃癌細胞的周期分布和誘導(dǎo)細胞凋亡，其可能的分子機制之一是可下調(diào)P53和PCNA的表達，降低Bcl-2／[8]Bax比值。余惠昊等報道，反左金丸水提物（黃連:吳茱萸=1:6）對人胃癌細胞SGC-7901有誘導(dǎo)細胞凋亡作用，機制可能是抑制凋亡基[9]因Bcl-2表達下調(diào)和促進凋亡的基因Bax表達上調(diào)。陸興熱等報道三七總苷能通過各種細胞信號通路導(dǎo)致胃癌細胞BGC-823中Bcl-2蛋白表達受抑制，而Bax蛋白表達受到激活，Bcl-2/Bax比值大幅度[10]降低從而促進胃癌細胞凋亡。張偉等報道小歸芍超臨界提取物（當歸，白芍，白術(shù)，瓜蔞）能明顯抑制人胃癌BGc-823細胞中Bcl-2及PCNA基因的表達，從離體實驗的基礎(chǔ)上證實其對胃癌的形成有明顯的抑制作用。[11]caspase-3在細胞凋亡的信號傳導(dǎo)中處于核心位臵，許多凋亡的信號最終會匯集到此蛋白，caspase-3在多種組織細胞中有表達。Fas[12]抗原是I型跨膜蛋白，也是細胞表面重要的死亡受體，屬腫瘤壞死[13]因子超家族成員,是最重要的死亡分子之一。張珂等發(fā)現(xiàn)槲皮素具有下調(diào)Bcl-2的表達和上調(diào)caspase-3表達的作用，其機制可能使caspase-3無活性的32kDapro-caspase-3經(jīng)自裂解或其它蛋白酶的切割作用使N端去掉3kDa的前肽裂解成有活性的caspase-3誘導(dǎo)細胞[14]凋亡。鄭國華等研究報道，大蒜油和自藜蘆醇聯(lián)合用藥作用后可促進胃癌細胞Fas抗原表達增高是其誘導(dǎo)細胞凋亡的機制之一；同時該藥組能明顯降低胃癌細胞中Bcl-2基因mRNA的表達及促進Bax基因mRNA的表達增加,是其誘導(dǎo)細胞凋亡的另一途徑。2中成藥及復(fù)方類的研究[15]H-ras原癌基因?qū)儆贕蛋白類，突變阻斷了GAP激活rasGTP66 [16]酶的作用,而使ras處于持續(xù)激活狀態(tài)，從而導(dǎo)致腫瘤的發(fā)生。EGFR是原癌基因C-erbB-1的表達產(chǎn)物，它與相應(yīng)的配體結(jié)合后發(fā)揮其調(diào)[17]節(jié)細胞生長的作用。EGF是一種重要的生物活性肽，近年發(fā)現(xiàn)該因子廣泛存在消化道內(nèi)，是參與胃黏膜損傷修復(fù)過程中最重要的肽類物[18]質(zhì)，且與表皮生長因子受體上調(diào)密切相關(guān)。沈舒文等報道金果胃康顆?？梢种拼笫笪刚衬-ras，EGFR基因蛋白的表達,從而抑制胃黏膜H-ras、EGFR蛋白表達的異常改變，逆轉(zhuǎn)或阻止胃癌的發(fā)生。袁[19]紅霞等報道善胃方治療慢性萎縮性胃炎伴胃黏膜異型增生且符合中醫(yī)氣陰兩虛型的患者后，多數(shù)患者病理情況的萎縮、腸化、不典型增生均有改善，治療前后EGF、EGFR表達顯著降低，在一定程度上[20]使胃黏膜病理逆轉(zhuǎn)。石雪迎等報道三七有可能通過降低EGFR、C-erbB-2、H-ras、Bcl-2癌基因的異常表達,發(fā)揮治療胃癌前病變的作用。[21]P21^ras是原癌基因，參與細胞生長與分化的調(diào)節(jié)，起著生物[22]開頭的作用，在腫瘤中表達增高。VEGF是促進血管增生和形成的[23]最重要的因子之一，是一種晚期腫瘤生物學(xué)行為。張運貴等報道胃復(fù)春片對胃黏膜中、重度異型增生有促進病變胃黏膜的逆轉(zhuǎn)，可降低P21^ras、P53蛋白在中、重度異型增生組織中過度表達的水平。胡運[24]蓮等報道加味左金丸各劑量組能不同程度地降低EGFR、VEGF、Bcl-2蛋白的表達，以中劑量為優(yōu)，可能是通過對抗C-erbB-l、VEGF、Bcl-2基因的激活、抑制EGFR、VEGF、Bcl-2蛋白的表達，以恢復(fù)平衡而發(fā)揮治療胃癌前病變的作用，這種多基因調(diào)控作用可能與中藥[25]多成分、中醫(yī)整體調(diào)節(jié)優(yōu)勢有關(guān)。席時燕等報道半夏瀉心方中的辛苦組、辛開組及苦降組含藥血清對BGC-823細胞增殖有明顯的抑制作用，其作用機理與下調(diào)Bcl-2的表達有關(guān)；但辛甘組、苦甘組抑制較弱，全方和甘補組無明顯影響，提示這些配伍形式可能存在拮抗作用；提示辛開苦降法可能是中醫(yī)藥防治胃癌的主要治則治法之一。郭67 [26]喜軍等報道胃痞顆粒一號對胃黏膜癌前病變有逆轉(zhuǎn)治療作用，通過抑制Bcl-2、P53(突變型)蛋白表達，促進Fas蛋白表達和細胞凋亡指[27]數(shù)增加，從而有利于胃黏膜異型增生的上皮細胞發(fā)生凋亡。胡玲等報道胃炎消治療后胃粘膜AI明顯高于治療前，Bcl-2蛋白表達明顯下[28]降，通過抑制Bcl-2蛋白表達誘導(dǎo)胃癌癌前病變細胞凋亡。孟捷等報道消痞顆粒劑以百合烏藥湯化裁而成,治療后胃黏膜病變病理形態(tài)明顯改善,胃黏膜Bcl-2陽性表達明顯減弱，Bax表達有一定增強，可能是其通過降低Bcl-2／Bax比值、調(diào)節(jié)細胞增殖凋亡而起作用。趙[29]占考等報道胃萎I號沖劑治療CAG后，細胞凋亡率和Bax表達率分別從21.81%、41.18%升高至40.52%、61.76%；而Bcl-2表達率從85.71%下降至22.86%(P<0.05)，其機理可能是通過降低患者Bcl-2/Bax比值加速誘導(dǎo)胃黏膜細胞凋亡從而能有效治療慢性萎縮性[30]胃炎。蔡朔等報道中藥胃復(fù)康對人SGC-7901胃癌細胞株藥物血清處理后，P53表達明顯增強，Bcl-2表達明顯減弱，隨著作用時間的延長表達變化更明顯，說明可能是通過影響癌基因Bcl-2和抑癌基因[31]P53的表達而實現(xiàn)導(dǎo)人SGC-7901胃癌細胞凋亡的。田劭丹等報道新加良附方在治療移植性人胃癌動物模型實驗中發(fā)現(xiàn)，高劑量組能上調(diào)腫瘤組織Bax蛋白表達，下調(diào)Bcl-2蛋白表達；中劑量組能下調(diào)[32]Bcl-2蛋白表達，從而誘導(dǎo)胃癌細胞發(fā)生凋亡。杜斌等用益氣活血清熱方治療觀察CAG患者，發(fā)現(xiàn)對CAG癌前病變的臨床癥狀、胃鏡征象、病理變化有顯著改善作用，治療組總有效率為93．3％，胃黏膜萎縮與腸上皮化生的變化具有顯著性差異，P53、Bcl-2蛋白表達變化明顯，其機理可能與抑制癌基因的激活和抑癌基因的失活，促進[33]胃癌前細胞凋亡有關(guān)。曲婷婷等報道活血行氣方（三棱、莪術(shù)、桃仁、紅花、赤芍、甘草等）對于改善胃癌中晚期腫脹、腹?jié)M、疼痛等癥狀有一定的作用，藥物血清處理人胃癌SGC-7901細胞株后P53表達明顯增強而Bcl-2表達明顯減弱，可能是其誘導(dǎo)人胃癌細胞凋亡的68 機制。3總結(jié)和展望目前，Bcl-2基因家族和Bax基因已成為中醫(yī)實驗研究選取的熱點觀察基因，說明該對基因家族的重要性；而其它腫瘤相關(guān)基因也被越來越多地采納為觀察指標，這對中醫(yī)科研開拓新思路、揭示新的作用機理有重大意義。當中藥復(fù)方實驗出現(xiàn)觀察結(jié)果與臨床效果的對比存在顯著差異性，進一步研究后可能發(fā)現(xiàn)其中的主要配伍以避免拮抗沖突（比如席[25]時燕等研究報道半夏瀉心方實驗）——這樣的思路一方面可以為進一步篩選處方中的主要配伍組合而提供理論依據(jù)，節(jié)約中藥資源；另一方面也為對比選擇更優(yōu)質(zhì)的抗腫瘤復(fù)方做出貢獻。雖然中醫(yī)科研從基因分子水平研究中藥治療胃癌作用機制的起步相對較晚，但是臨床療效觀察及各種實驗均表明中醫(yī)藥物有很好的應(yīng)用前景，這是不可否認的事實！隨著對蛋白靶點研究的不斷深入以及活性測試手段和篩選技術(shù)水平的不斷提高，相信會有更多更優(yōu)質(zhì)的中藥類抗胃癌制劑涌現(xiàn)出來，其中的作用機制也會被更多的發(fā)現(xiàn)和鑒定！[參考文獻][1]KangMH,ReynoldsCP.Bcl-2Inhibitors:TargetingMitochondrialApoptoticPa-thwaysinCancerTherapy[J].ClinCancerRes,2009,15(4):1126-1132.[2]高澤立,安淑華,吳敏生,等.猴菇多糖對胃癌癌前病變的逆轉(zhuǎn)治療研究[J].中成藥,2000,22(8):555-558.[3]姚保泰,吳敏,王博.鹽酸小檗堿抑制實驗性大鼠胃癌前病變細胞Bcl-2表達作用的研究[J].中華中醫(yī)藥雜志,2005,20(3):186-187.[4]PintodeSousaJ,SilvaF,DavidL,etal.ClinicopathologicalsignificanceandsurvivalinfluenceofP53proteinexpressionin69 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致謝本課題是在導(dǎo)師林壽寧教授的悉心指導(dǎo)下完成的，在論文完成之際，特向我的導(dǎo)師致以崇高的敬意和誠摯的感謝！感謝導(dǎo)師三年來對我的精心培養(yǎng)與深切關(guān)懷。導(dǎo)師學(xué)識淵博，治學(xué)嚴謹，醫(yī)技精湛，醫(yī)德高尚，學(xué)術(shù)上精益求精，我感懷至深，終生難忘！導(dǎo)師崇高的品德風(fēng)范和嚴格的做人準則使我感受至深，獲益良多，激勵我未來在中醫(yī)藥事業(yè)上勇往直前。感謝廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院消化內(nèi)科朱永蘋、雷力民等各位老師對我學(xué)業(yè)上的鼓勵和教誨！感謝廣西中醫(yī)藥大學(xué)實驗動物中心主任黃正團老師對本實驗的大力協(xié)助和支持！感謝韋唯師兄、楊偉興師兄，王想麗、朱岳耕、余紫靜、曾紀媛等同門及師弟師妹們對我實驗和生活的各個方面給予的幫助和關(guān)心！感謝三年來為我成長付出艱辛與汗水的研究生處各位老師!感謝在百忙中參加我畢業(yè)論文評閱、答辯的各位專家、老師、同學(xué)!衷心地感謝養(yǎng)育和支持我的父母和家人，是他們幫助我圓滿完成學(xué)業(yè)！感謝所有關(guān)心和幫助過我的老師和同學(xué)！感謝所有關(guān)心和幫助過我的人！73 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄[1]林壽寧,朱永蘋,廖冬燕,黃建明,劉容,余翥.廣西少數(shù)民族地區(qū)農(nóng)村衛(wèi)生適宜技術(shù)現(xiàn)狀與需求調(diào)查方法初探.第二十二屆全國中西醫(yī)結(jié)合消化系統(tǒng)疾病學(xué)術(shù)會議暨消化疾病診治進展學(xué)習(xí)班論文匯編[C].2010:716-718.[2]林壽寧;朱永蘋;廖冬燕;黃建明;劉容;楊偉興;余翥.廣西少數(shù)民族地區(qū)農(nóng)村脾胃疾病診療適宜技術(shù)現(xiàn)狀與需求調(diào)查方法初探.中華中醫(yī)藥學(xué)會第二十二屆全國脾胃病學(xué)術(shù)交流會暨2010年脾胃病診療新進展學(xué)習(xí)班論文匯編[C].2010:827-830.[3]余翥,林壽寧,張學(xué)寧.中藥抗胃癌機制的基因分子水平實驗研究現(xiàn)狀[J].醫(yī)學(xué)綜述,已錄用。74 廣西中醫(yī)藥大學(xué)研究生學(xué)位論文作者聲明本人聲明：本人呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下取得的研究成果。對前人及其他人員對本文的啟發(fā)和貢獻已在論文中作出了明確的聲明，并表示了謝意。論文中除了特別加以標注和致謝的地方外，不包含其他人和其它機構(gòu)已經(jīng)發(fā)表或者撰寫過的研究成果。導(dǎo)師和本人同意學(xué)校保留本人學(xué)位論文并向國家有關(guān)部門或資料庫送交論文的復(fù)印件或者電子版，允許論文被查閱和借閱；并授權(quán)廣西中醫(yī)藥大學(xué)可以將本人學(xué)位論文的全部或者部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或者其它復(fù)制手段和匯編學(xué)位論文（保密論文在解密后應(yīng)遵守此規(guī)定）。（四號楷體）學(xué)生簽名：導(dǎo)師簽名：日期：年月日75 個人簡歷姓名：余翥性別：男出生年月：1984年9民族：漢族籍貫：海南政治面貌：中共黨員求學(xué)經(jīng)歷:2000年9月-2004年6月三亞市第一中學(xué)2004年9月-2009年6月湖南中醫(yī)藥大學(xué)（醫(yī)學(xué)學(xué)士）2009年9月至今廣西中醫(yī)藥大學(xué)中醫(yī)內(nèi)科學(xué)（碩士）科研及工作情況:2010年-2012年:廣西中醫(yī)藥大學(xué)附屬瑞康醫(yī)院臨床輪轉(zhuǎn)實習(xí)承擔(dān)或主研科研課題:參與廣西自然科學(xué)基金項目：安胃湯對慢性萎縮性胃炎大鼠細胞凋亡及NF-κB、Bcl-2因子的影響76
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