構(gòu)樹葉總黃酮對(duì)肝癌hepg-2細(xì)胞增殖和凋亡作用的研究

構(gòu)樹葉總黃酮對(duì)肝癌hepg-2細(xì)胞增殖和凋亡作用的研究

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1、分類號(hào)R36學(xué)校代碼10601密級(jí)編號(hào)碩士研究生學(xué)位論文構(gòu)樹葉總黃酮對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞增殖和凋亡作用的研究學(xué)科專業(yè):病理學(xué)與病理生理學(xué)研究方向:天然藥物抗腫瘤研究生姓名:劉建楠學(xué)號(hào):Y0901020學(xué)位類型科學(xué)學(xué)位導(dǎo)師姓名:朱開梅教授1獨(dú)創(chuàng)聲明本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進(jìn)行的研究工作及取得的研究成果。據(jù)我所知,除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外,論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫過(guò)的研究成果,也不包含未獲得(注:如沒(méi)有其他需要特別聲明的,本欄可空)或其他教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位或證書使用過(guò)的材

2、料。與我一同工作的同志對(duì)本研究所做的任何貢獻(xiàn)均已在論文中作了明確的說(shuō)明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名:簽字日期:年月日----------------------------------------------------------------學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解桂林醫(yī)學(xué)院有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定,有權(quán)保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和磁盤,允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)桂林醫(yī)學(xué)院可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索,可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制

3、手段保存、匯編學(xué)位論文。同時(shí)授權(quán)中國(guó)學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社、中國(guó)科學(xué)技術(shù)信息研究所將本學(xué)位論文收錄到《中國(guó)優(yōu)秀博碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》、《中國(guó)學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù)》,并通過(guò)網(wǎng)絡(luò)向社會(huì)公眾提供信息服務(wù)。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名:導(dǎo)師簽字:簽字日期:年月日簽字日期:年月日2目錄中文摘要………………………………………………………………5ABSTRACT………………………………………………………………8英漢縮略詞對(duì)照表……………………………………………………13前言…………

4、…………………………………………………………14第一部構(gòu)樹葉總黃酮藥物提取制備…………………………………171實(shí)驗(yàn)材料與儀器……………………………………………………172實(shí)驗(yàn)方法………………………………………………………………173實(shí)驗(yàn)結(jié)果………………………………………………………………224討論……………………………………………………………………24第二部分構(gòu)樹葉總黃酮對(duì)人HepG-2細(xì)胞增殖與凋亡作用的研究…261實(shí)驗(yàn)材料與儀器………………………………………………………262實(shí)驗(yàn)方法…………………

5、……………………………………………293結(jié)果……………………………………………………………………324討論……………………………………………………………………35第三部分構(gòu)樹葉總黃酮對(duì)人肝癌細(xì)胞株HepG-2細(xì)胞Bax、Bcl-2表達(dá)的影響………………………………………………………………381實(shí)驗(yàn)材料與儀器………………………………………………………382實(shí)驗(yàn)方法………………………………………………………………403結(jié)果……………………………………………………………………464討論……………………………

6、………………………………………50全文結(jié)論…………………………………………………………………53參考文獻(xiàn)………………………………………………………………54綜述………………………………………………………………………613攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄……………………………………76致謝………………………………………………………………………774構(gòu)樹葉總黃酮對(duì)肝癌HepG-2細(xì)胞增殖和凋亡作用的研究中文摘要研究?jī)?nèi)容和目的1采用微波輔助提取法從構(gòu)樹緊中提取構(gòu)樹葉總黃酮,經(jīng)大孔樹脂柱、聚酰胺柱進(jìn)行分離純化,

7、做初步鑒定。2體外觀察構(gòu)樹葉總黃酮抑制肝癌細(xì)胞株HepG-2細(xì)胞生長(zhǎng)的作用,明確量效關(guān)系,選擇藥物的半數(shù)抑制濃度為后期進(jìn)行構(gòu)樹葉總黃酮抗肝癌機(jī)制研究做參考。3為開發(fā)利用構(gòu)樹葉資源提供科學(xué)的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。研究方法1采用微波輔助提取法,提取構(gòu)樹葉總黃酮初品,將提取物進(jìn)一步進(jìn)行分離鑒定。2應(yīng)用噻唑藍(lán)(methylthiazolyltetrazolium,MTT)法測(cè)定不同濃度的構(gòu)樹葉總黃酮作用不同時(shí)間(24h、48h、72h)對(duì)人肝癌HepG-2細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。3在倒置顯微鏡下觀察不同濃度的構(gòu)樹葉總黃酮作用人

8、肝癌HepG-2細(xì)胞后的形態(tài)學(xué)變化。4采用hoechest33342熒光染色觀察不同濃度構(gòu)樹葉總黃酮作用于人肝癌HepG-2細(xì)胞48h后細(xì)胞凋亡形態(tài)變化。55通過(guò)免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)人肝癌HepG-2細(xì)胞經(jīng)構(gòu)樹葉總黃酮誘導(dǎo)凋亡過(guò)程中的Bcl-2、Bax蛋白表達(dá)。6RT-PCR檢測(cè)Bcl-2、Bax相關(guān)基因經(jīng)構(gòu)樹葉總黃酮處理前后表達(dá)變化。研究結(jié)果1微波輔助提取法提取構(gòu)樹葉總黃酮,經(jīng)過(guò)分離純化后,測(cè)定提取得率為(139mg/100g)。2MTT結(jié)果顯示,構(gòu)樹

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