5-羥色胺對大鼠海馬ca1區(qū)nmda電流的調節(jié)作用

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1、河北醫(yī)科大學碩士學位論文5--羥色胺對大鼠海馬CA1區(qū)NMDA電流的調節(jié)作用姓名：李文雅申請學位級別：碩士專業(yè)：藥理學指導教師：王永利201203中文摘要5一羥色胺對大鼠海馬CAl區(qū)NMDA電流的調節(jié)作用摘要5．羥色胺(5-hydroxytryptamine，5-HT，serotonin)是中樞神經系統(tǒng)重要的單胺類遞質，幾乎遍及整個中樞神經系統(tǒng)。5．HT神經遞質通過和不同的受體亞型結合，激活第二信使及離子通道，參與心血管、呼吸、體溫、攝食、性行為、睡眠、疼痛、情感等多種復雜的生理和病理過程的調節(jié)。大量研究發(fā)現(xiàn)，多種伴有認知障礙的精神類疾病

2、，如阿茨海默癥、抑郁、焦慮等疾病，均存在5．羥色胺能神經系統(tǒng)的紊亂。N．甲基．D．天門冬氨酸(N．methyl．D．aspartate，NMDA)受體是一種特殊的離子通道蛋白，屬于電壓、配體雙重門控離子通道，對Ca2+具有通透性，但可被M92+電壓依賴性的阻斷，主要分布在大腦海馬、丘腦、皮層、紋狀體等的突觸后膜上。當外源性的給予NMDA時，可激活NMDA受體，產生一個主要成分是Na+$I]Ca2+內流的NMDA電流。在中樞神經系統(tǒng)中，NMDA受體參與了突觸可塑性以及學習記憶等生理功能的調節(jié)，并在情緒障礙、腦功能紊亂疾病(如腦缺血、神經退行

3、性疾病、癲癇、精神分裂癥等疾病的發(fā)生中也發(fā)揮著重要的調節(jié)作用。5．羥色胺能神經系統(tǒng)和NMDA受體都參與正常和病理情況下認知與情感的調節(jié)，5-HT與NMDA受體的相互作用可以影響海馬依賴性的長時程記憶。5-HT對NMDA受體的調節(jié)是很復雜的。研究發(fā)現(xiàn)，在缺乏_M92+時，5-HT可降低NMDA受體介導的去極化。然而在M92+存在時，5-HT可顯著增強NMDA介導的去極化。另外在大鼠額前皮質錐體神經元，5-HT抑制了NMDA的反應。相反，在蛙運動神經元上，5-HT卻可增強NMDA受體介導的去極化。鑒于以上研究的不一致性，本實驗應用腦片膜片鉗技

4、術，以NMDA電流為指標，觀察5．HT對大鼠海馬CAl區(qū)錐體神經元處NMDA電流的影響，并進一步探討參與此調節(jié)作用的5．HT受體亞型。鑒于5．HT2R、5-HT3R可影響長時程增強的形成，參與了學習記憶生理功能的調節(jié)，且海馬區(qū)主要分布有5．HT2R和5．HT3R，故本研究主要觀察了5-HT2R和5．HT3R是否參與5．HT對NMDA電流的調節(jié)作用。目的：研究5．HT對大鼠海馬CAl區(qū)錐體神經元NMDA電流的調節(jié)作中文摘要用；研究5．HT2R、5-HT3R是否參與此調節(jié)作用，并探討其相應機制。方法：選用出生兩周左右的SD乳大鼠，按照常規(guī)方法

5、制備厚度為3009in的腦片，并將其移至持續(xù)通以95％02和5％C02飽和的人工腦脊液(ACSF)中，于30．32℃孵育1小時。將孵育好的腦片置于灌流槽中并用尼龍網(wǎng)固定，持續(xù)灌流95％02和5％C02飽和的ACSF，流速為3ml／min，利用帶有紅外微分干涉相差顯微鏡的腦片膜片鉗系統(tǒng)，在全細胞(whole．cell)模式下，設置鉗制電壓為．60mV，采用灌流給藥的方式，記錄海馬CAl區(qū)錐體神經元NMDA受體的內向電流；觀察NMDA受體特異性拮抗劑AP．V對NMDA電流的影響、不同濃度5．HT對NMDA電流的調節(jié)作用、以及5．HT2R拮抗齊

6、JJKetanserin或5．HT3R拮抗劑Ondansetron對5．HT調節(jié)NMDA電流的影響。實驗采用自身對照的方法，即在同一神經元細胞上先測定NMDA電流的幅度作為對照，然后再測定AP．V或不同濃度5．HT干預時NMDA電流的幅度，并以對照電流值標化給藥后的電流值。結果：(1)區(qū)分神經元和神經膠質細胞。在全細胞模式下，施加．60mⅧmV-一．60mV的去極化刺激，我們記錄到一個明顯的內向鈉電流，表明我們所選取記錄的細胞是神經元而非神經膠質細胞。(2)區(qū)分錐體神經元和中間神經元。在全細胞電流鉗模式下，給予一個0PA～100PA-．0

7、PA電流刺激，我們記錄到的動作電位是低頻放電且有頻率適應現(xiàn)象，表明我們所記錄的細胞是錐體神經元而非中間神經元。(3)確證NMDA電流。應用NMDA受體特異性拮抗劑AP．V(1001aM)后，由NMDA誘發(fā)的內向移動電流被基本阻斷，若將NMDA誘發(fā)的內向移動電流設為100％，則應用AP．V后此電流僅為2．08±0．81％(n=7，p

8、n記錄時間內，NMDA電流未出現(xiàn)受體脫敏或者Rundown現(xiàn)象，表明該神經元產生的NMDA電流至少在50minP勺是穩(wěn)定的。(5)5-HT可顯著增強大鼠海馬CAl區(qū)錐體神經元的NMDA電流。若