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1、中圖分類號：R743.9論文編號：HBLG2015-150UDC：密級：公開碩士學位論文PI3K/Akt/mTOR信號通路對血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)自噬的調(diào)節(jié)作用作者姓名：王一超學科名稱：神經(jīng)病學研究方向：腦血管病學習單位：華北理工大學學習時間:3年提交日期:2015年5月7日申請學位類別：醫(yī)學碩士導師姓名：劉斌教授單位：華北理工大學附屬醫(yī)院論文評閱人：劉信榮教授單位：華北理工大學附屬醫(yī)院元小冬教授單位：開灤總醫(yī)院論文答辯日期：2015年6月6日答辯委員會主席：元小冬教授關鍵詞：血管性癡呆；自噬；PI3K/Akt/mTOR信號通路；Beclin1；LC3蛋白唐山華北理工大學2
2、015年6月PI3K/Akt/mTORSignalingPathwayRegulatesAutophagyInducedbyHippocampusCA1AreaofRatswithVascularDementiaDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofMedicinebyWangYichao(Neurology)Supervisor:ProfessorLiuBinJune,2
3、015獨創(chuàng)性說明本人鄭重聲明：所呈交的論文是我個人在導師指導下進行的研究工作及取得的研究成果。盡我所知，除了文中特別加以標注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已經(jīng)發(fā)表或撰寫的研究成果，也不包含為獲得華北理工大學以外其他教育機構的學位或證書所使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中做了明確的說明并表示了謝意。論文作者簽名：日期：年月日關于論文使用授權的說明本人完全了解華北理工大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即：已獲學位的研究生必須按學校規(guī)定提交學位論文，學校有權保留、送交論文的復印件，允許論文被查閱和借閱；學校可以將學位論文的全部或部分內(nèi)容采用影印、縮
4、印或編入有關數(shù)據(jù)庫進行公開、檢索和交流。作者及導師同意論文公開及網(wǎng)上交流的時間：□自授予學位之日起；□自年月日起。作者簽名：導師簽名：簽字日期：年月日簽字日期：年月日摘要摘要目的通過對血管性癡呆模型大鼠應用PI3K/Akt/mTOR通路抑制劑LY294002、雷帕霉素進行干預，觀察PI3K、Akt、mTOR通路蛋白表達及對自噬相關蛋白LC3、Beclin1表達的影響，探討PI3K/Akt/mTOR信號通路對血管性癡呆大鼠海馬CA1區(qū)自噬的調(diào)節(jié)作用。方法1動物分組192只健康雄性SD實驗大鼠隨機分為假手術組（Sham組）、血管性癡呆模型組（VD組）、PI3K抑制劑組（LY2940
5、02組）和mTOR抑制劑組（雷帕霉素組），每組大鼠再隨機分為模型制備成功后的1、2、4、8周4個亞組（每組12只）。2血管性癡呆模型制備采用改良Pulsinelli四血管阻斷法制備血管性癡呆大鼠模型。3給藥方法側腦室立體定位：Bregma點向左或右旁開0.9mm，向后1.5mm，用微型牙科鉆打孔，有明顯穿破感后拔出。用微量進樣器吸取10mmol/L的LY294002溶液10μl，沿鉆孔緩慢進針，進針深度達3.8mm，于5分鐘內(nèi)勻速緩慢注入，等留針5min后緩慢拔針。雷帕霉素組方法同LY294002組。4采用免疫組織化學染色法檢測各組大鼠海馬CA1區(qū)PI3K、Akt、mTOR蛋白
6、表達及定位。5采用免疫印跡法檢測各組大鼠海馬CA1區(qū)LC3II/LC3I比值、Beclin1蛋白的表達及變化情況。6采用熒光顯微鏡檢測大鼠海馬CA1區(qū)自噬相關蛋白LC3的表達及定位。7組織切片采用OLYMPUS攝像顯微鏡（400×）攝像，并應用MoticMed6.0數(shù)碼醫(yī)學圖像分析系統(tǒng)進行數(shù)據(jù)分析；Westernblot結果應用ImageJ圖片分析系統(tǒng)進行分析。8應用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)分析與處理，計量資料以均數(shù)±標準差表示。多組間比較采用單因素方差分析，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。結果1PI3K免疫組化檢測結果：與Sham組比較，VD組各時間點的PI3K蛋
7、白表達均明顯增高（P＜0.05或P＜0.01）；與VD組比較，LY294002組與雷帕霉素組各個時間點PI3K蛋白表達無明顯變化(P＞0.05)。2Akt免疫組化檢測結果：與Sham組比較，VD組各時間點的Akt蛋白表達均明顯增高（P＜0.05或P＜0.01）；與VD組比較，LY294002組各個時間點的Akt蛋白表達均減少（P＜0.05或P＜0.01）；雷帕霉素組各個時間點Akt蛋白表達無明顯變化(P＞0.05)。3mTOR免疫組化檢測結果：與Sham組比較，VD組各時間點的mTOR蛋白表
