銅綠假單胞菌產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶狀況及耐藥性分析

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1、銅綠假單胞菌產(chǎn)B■內(nèi)酰胺酶狀況及耐藥性分析庾鳳娟1陳麗2蔡晶晶1(1廣州市海珠區(qū)第一人民醫(yī)院510220;2中山市東升醫(yī)院528414)【摘要】目的了解木院銅綠假單胞菌多重耐藥菌株(MDRPA)產(chǎn)出率,分析銅綠假單胞菌3種主要β■內(nèi)酰胺酶(金屬β■內(nèi)酰胺酶、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶和AmpC酶啲產(chǎn)出狀況。方法用法國生物梅里埃公司的VITEK-2細(xì)菌鑒定與藥敏系統(tǒng)進(jìn)行180株銅綠假單胞菌的鑒定與藥敏,篩選出多重耐藥菌株,對(duì)可疑產(chǎn)金屬β■內(nèi)酰胺酶、超廣譜β-內(nèi)酰胺酶、AmpC酶

2、的菌株,用雙紙片協(xié)同試驗(yàn)和頭泡西丁三維試驗(yàn)進(jìn)行3種酶的表型確證。結(jié)果180株銅綠假單胞菌中篩選出MDRPA31株,β-內(nèi)酰胺酶產(chǎn)酶率為30.6%(55/180),其中產(chǎn)金屬β-內(nèi)酰胺酶的占18.9%(34/180),產(chǎn)AmpC酶的占12.8%(23/180),產(chǎn)超廣譜β?內(nèi)酰胺酶(ESBLs)占5.0%(9/180);藥敏試驗(yàn)中,對(duì)氨曲南、頭抱毗肪、頭抱他唳、環(huán)丙沙星、亞胺培南、L■氧氟沙星、哌拉西林、哌拉西林/三卩坐巴坦、頭抱哌酮/舒巴坦這些臨床常用抗牛素,產(chǎn)酶菌較不產(chǎn)酶菌敏感性明顯降

3、低(P均小于0.05),對(duì)其它抗牛素耐藥率均大于50%。結(jié)論木院引起臨床感染的銅綠假單胞菌產(chǎn)牛的β?內(nèi)酰胺酶以金屬酶最常見,其次為AmpC酶和超廣譜β■內(nèi)酰胺酶;MDRPA產(chǎn)β?內(nèi)酰胺酶率明顯高于NMDRPA;產(chǎn)酶菌株耐藥性明顯高于非產(chǎn)酶菌株;MDRPA都有較高程度的耐藥?!娟P(guān)鍵詞】金屬β■內(nèi)酰胺酶超廣譜β■內(nèi)酰胺酶AmpC酶耐藥性【中圖分類號(hào)】R446.5【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】2095-1752(2013)07-0038-02銅綠假單胞菌(Pseudomona

4、saeruginosa)是下呼吸道感染、ICU感染的首要病原菌,而且可造成一定程度的院內(nèi)感染流行。我國全國性監(jiān)測(cè)數(shù)據(jù)顯示:從1994年到2009年,PA在所有院內(nèi)感染的革蘭陰性菌中排第1位[1,2]o由于廣譜抗牛素的廣泛應(yīng)用,多藥耐藥銅綠假單胞菌感染成為一個(gè)嚴(yán)重的問題。銅綠假單胞菌的耐藥機(jī)制十分復(fù)雜,銅綠假單胞菌產(chǎn)β■內(nèi)酰胺酶是其主要的耐藥機(jī)制[3]o為了解本院銅綠假單胞菌β?內(nèi)酰胺酶的發(fā)生率,MDRPA產(chǎn)出率以及其耐藥特點(diǎn),該文對(duì)臨床分離的180株銅綠假單胞菌進(jìn)行3種主要β■內(nèi)酰胺酶的

5、檢測(cè),同時(shí)進(jìn)行藥敏試驗(yàn),結(jié)果如下。1材料與方法1.1材料1.1.1實(shí)驗(yàn)菌株2011年7月-2011年12月從廣州市海珠區(qū)第一人民醫(yī)院臨床標(biāo)本中分離出銅綠假單胞菌180株。1.1.2標(biāo)準(zhǔn)菌株肺炎克雷伯菌ATCC700603、陰溝腸桿菌29M、人腸埃希菌ATCC25922和銅綠假單胞菌ATCC27853。1.1.3儀器與試劑VITEK-2全自動(dòng)細(xì)菌鑒定與藥敏儀及相應(yīng)的卡條為法國梅里埃公司產(chǎn)品。1.1.4藥敏紙片及培養(yǎng)基M?H瓊脂由江門市凱林有限公司提供。三維試驗(yàn)用藥品鄰氯西林(CLO)、三卩坐巴坦鈉(TZB),為美國Si

6、gma公司產(chǎn)品。1.2方法1.2.1菌株分離鑒定與藥敏臨床標(biāo)本按常規(guī)方法分離純化細(xì)菌,用VITEK-2自動(dòng)細(xì)菌鑒定與藥敏系統(tǒng)進(jìn)行菌株的鑒定與藥敏,質(zhì)控菌株為銅綠假單胞菌ATCC27853o對(duì)3類或3類以上抗菌藥物耐藥的菌株判定為多重耐藥銅綠假單胞菌株(MDRPA)o1.2.2金屬β-內(nèi)酰胺酶(MBL)檢測(cè)參考文獻(xiàn)⑷操作,質(zhì)控菌株為銅綠假單胞菌ATCC27853o1.2.3AmpC酶表型篩選與確認(rèn)試驗(yàn):按三維試驗(yàn)方法⑸進(jìn)行。1.2.4ESBLs表型篩選與確認(rèn)試驗(yàn):根據(jù)NCCLS規(guī)則,釆用ESBLs檢測(cè)的初篩及

7、確證試驗(yàn)。1.2.5統(tǒng)計(jì)學(xué)分析四格表資料卡方檢驗(yàn)。2結(jié)果2.1180株銅綠假單胞菌β■內(nèi)酰胺酶的檢出與構(gòu)成共檢出產(chǎn)β-內(nèi)酰胺酶菌55株,具體檢岀情況見表1?表1180株銅綠假單胞菌β?內(nèi)酰胺酶的檢出情況2.2產(chǎn)酶茵與不產(chǎn)酶茵抗生素敏感性詳見表2。表2產(chǎn)酶菌與不產(chǎn)酶菌藥敏結(jié)果3討論銅綠假單胞菌對(duì)β■內(nèi)酰胺類抗生素耐藥的主要機(jī)制是產(chǎn)生β-內(nèi)酰胺酶(β-lactamases,BLA),其中最常見的β-內(nèi)酰胺酶主要是金屬β-內(nèi)酰胺酶AmpC酶和E

8、SBLs[6]。細(xì)菌產(chǎn)生金屬酶后會(huì)對(duì)絕大多數(shù)的β-內(nèi)酰胺類抗生素(包括含酶抑制劑的復(fù)合抗生素),如青霉素類、頭泡菌素類、碳青霉烯類等耐藥[7]。AmpC酶主要由染色體介導(dǎo),是一種誘導(dǎo)酶,通常情況下其表達(dá)水平很低,不表現(xiàn)耐藥,但經(jīng)誘導(dǎo)及突變激活后,酶水平迅速增加,引起對(duì)多種B-內(nèi)酰胺類抗生素的交叉耐藥,它能有效水解第3代頭泡菌素、頭霉素

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