肝癌發(fā)生中mef2對hdacs的調(diào)控及hdaci丙戊酸聯(lián)合順鉑對肝癌細胞的增殖抑制研究

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1、浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文肝癌發(fā)生中MEF2對HDACs的調(diào)控及HDACI丙戊酸聯(lián)合順鉑對肝癌細胞的增殖抑制研究姓名：曹恒斌申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：藥理學(xué)指導(dǎo)教師：申屠建中20120224浙江大學(xué)碩上論文摘要肝癌發(fā)生中MEF2對HDACs的調(diào)控及HDACI丙戊酸聯(lián)合順鉑對肝癌細胞的增殖抑制研究浙江大學(xué)藥學(xué)院同等學(xué)力碩士研究生指導(dǎo)教師摘要藥理學(xué)曹恒斌申屠建中教授研究目的本研究應(yīng)用實時熒光定量PCR(Real．timePCR)法測定大鼠在誘導(dǎo)肝癌發(fā)生發(fā)展過程中，肝臟組織中MEF2舭c及HDAC4／10的mRNA表達水平，考察MEF2A／2C-與HDAC4／1

2、0mRNA表達的相關(guān)性。然后通過MTT法探討丙戊酸(VPA)聯(lián)合順鉑(DDP)對人肝癌細胞HepG2、BEL7404、SMMC7721的增殖抑制作用。通過計算聯(lián)合用藥的抑制率，進一步評價兩藥物對肝癌細胞是否具有協(xié)同作用。材料與方法采用O．01％二乙基亞硝胺飼喂Wistar大鼠，建立大鼠肝癌模型，分別于4、8、12、16、18周后斷頸處死，每批8．10只；空白組為10只，給純凈水自由飲用，按相同時問處死，每批2只，取肝臟標本，保存于．80。C冰箱。提取大鼠肝組織中的總RNA并逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，應(yīng)用Real．timePCR檢測組織中MEF2A／2C與H

3、DAC4／10mRNA表達量。然后采用三組不同濃度的VPA與三組不同濃度的DDP及九組聯(lián)合用藥組作用于人肝癌細胞HepG2、BEL7404、SMMC7721，24、48、72h后，觀察細胞數(shù)量和形態(tài)的變化，用MTT法分析藥物對細胞增殖的抑制率(IR)，計算聯(lián)合用藥對細胞增殖抑制率q值，考察聯(lián)合使用是否為協(xié)同作用。V浙江大學(xué)碩士論文摘要結(jié)果18周以后，大鼠致癌率為100％，總死亡率為35％，MEF2A／2CmRNA在第4、8周的樣本中表達量大量增加(P<0．01)，HDAC4／10mRNA在第4周的樣本中也大量表達(P

4、水平．但兩者的mRNA表達水平在時間上不存在相關(guān)性。72h后，各用藥組細胞數(shù)目減少十分明顯，其中VPA+DDP組較單獨用藥組減少更為顯著，其細胞形態(tài)發(fā)生較大改變。采用MTT比色法顯示，對照組細胞生長率明顯高于各實驗組，聯(lián)合用藥組對細胞增殖的抑制率(1R)更為顯著，且隨著藥物濃度增加及作用時間延長，各組對細胞增殖IR明顯增加。根據(jù)q值結(jié)果，在VPA較高濃度(>_1001xg·ml以)時聯(lián)合用藥組具有明顯的協(xié)同作用。結(jié)論，在大鼠肝癌誘導(dǎo)發(fā)生過程中，MEF2與HDACs的mRNA表達量增加，MEF2與肝組蛋白去乙?；嘘P(guān)。但MEF2與HDACs的mRNA

5、表達量在時間上關(guān)聯(lián)性不是非常明確。VPA能增強DDP對人肝癌細胞的增殖抑制作用，并且與藥物濃度及作用時間呈依賴趨勢，在VPA較高濃度(>100I_tg·ml‘1)時，兩藥聯(lián)合使用具有協(xié)同優(yōu)勢?！娟P(guān)鍵詞l：肝癌；MEF2；HDACs；丙戊酸；肝癌細胞；MTT；抑制率；協(xié)同作用VI浙江大學(xué)碩士論文摘要RegulationofMEF2toHDACsintheprogressoflivercancerandtheinhibitoryeffectofHDACIVPAcombinedwithCisplatinonproliferationinHepatomac

6、ellsAbstractCollegeofPharmacyZhejiangUniversityPharmacologyPost-graduateHengbinCAOSupervisorProfessorShentuJIANZHONGobjectiveWehaveexploredthecorrelationbetweenMEF2andIIHDACsbydetectingtheexpressionlevelofMEF2A／2CandHDAC4／10inrathepatocellularcarcinomausingreal-timefluorescenc

7、equantitativePCRandinvestigatedtheinhibitoryeffectofValproateacid(VPA)combined、析mCisplatinonproliferationinHepG2cell，BEL7404cellandSMMC772lcell．MethodsRatlivercancerwasinducedbyfeedingvvitlldiethylinitrosamine(DEN)．ThetotalRNAisolatedfromratlivertissuewasreverselytranscribedin

8、tocDN久andreal-timefluorescencequantitativePCR(Q·PCR)methodwas