谷胱甘肽與順鉑合用對肝癌細(xì)胞hepg2增殖及凋亡的影響

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1、谷胱甘肽與順鉑合用對肝癌細(xì)胞HepG2增殖及凋亡的影響作者：徐艷巖安郁寬李波清李京敏【摘要】目的探討谷胱甘肽(GSH)與順鉑(CDDP)聯(lián)合應(yīng)用對人肝癌細(xì)胞HepG2細(xì)胞增殖及凋亡的影響。方法應(yīng)用酸性磷酸酶法(APA)檢測細(xì)胞生長抑制率;用倒置顯微鏡觀察經(jīng)CDDP、GSH處理后的細(xì)胞形態(tài)學(xué)改變;采用流式細(xì)胞術(shù)研究GSH與CDDP合用對細(xì)胞周期的影響;AnnexinVFITC/PI雙染檢測細(xì)胞凋亡率;羅丹明123染色檢測線粒體膜電位(Δψm)變化。結(jié)果GSH與CDDP聯(lián)合應(yīng)用可以明顯抑制HepG2細(xì)胞增殖，癌細(xì)胞出現(xiàn)凋亡形態(tài)變化，其作用明顯高于GSH組與對照組細(xì)胞，且不低于CDD

2、P單獨(dú)給藥組;GSH與CDDP聯(lián)合應(yīng)用引起Δψm更明顯地下降。結(jié)論GSH與CDDP聯(lián)合用藥不降低CDDP對肝癌細(xì)胞的作用，其誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞HepG2凋亡的作用可能是通過線粒體通路實(shí)現(xiàn)的?！娟P(guān)鍵詞】谷胱甘肽;順鉑;肝癌細(xì)胞;凋亡;細(xì)胞周期　　【Abstract】ObjectiveToexploretheeffectofglutathione(GSH)binedinetheinhibitionrateofcells.InvertedmicroscopeorphologicalchangesofcellsafterCDDPandGSHtreatment.Floetryitochondri

3、almembranepotential(Δψm)eansofRhodamine123.ResultsGSHbinedoreover,oreobviousdeclineofΔψmthanCDDP.ConclusionsGSHbineditochondiapathportantroleininducingapoptosisofHepG2.　　【Keya;Apoptosis;Cellcycle　　順鉑(CDDP)是目前臨床上應(yīng)用較廣泛的一種高效抗癌藥物，但因其有肝、腎、神經(jīng)等毒性而使其應(yīng)用受到限制。有關(guān)　　2.4GSH與CDDP單獨(dú)及聯(lián)合使用對HepG2細(xì)胞凋亡率的影響對照組細(xì)胞培養(yǎng)2

4、4、48h后細(xì)胞凋亡率分別為(5.56±1.41)%，(9.96±2.16)%;CDDP組與GSH+CDDP組處理細(xì)胞24h后細(xì)胞凋亡率分別為(11.01±3.66)%，(9.37±6.52)%;作用48h后細(xì)胞凋亡率分別為(55.89±4.35)%，(55.98±4.26)%，兩加藥組與對照組相比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01);GSH+CDDP組與CDDP組比較差異無統(tǒng)計(jì)意義(P>0.05)?！　?.5GSH與CDDP單獨(dú)及聯(lián)合使用對HepG2細(xì)胞線粒體膜電位的影響GSH與CDDP聯(lián)合作用于HepG2細(xì)胞24、48h后，聯(lián)合用藥組弱熒光部分細(xì)胞百分比增高，線粒

5、體與羅丹明123結(jié)合能力下降，與對照組和CDDP組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，見表3。表3各組HepG2細(xì)胞線粒體跨膜電位檢測　　3討論　　CDDP是目前臨床上常用的廣譜抗癌藥物，可與癌細(xì)胞DNA鏈上的堿基結(jié)合，干擾DNA復(fù)制和RNA轉(zhuǎn)錄，從而抑制癌細(xì)胞分裂，但因其毒副作用大而使其使用受到限制。普通的臨床劑量就可造成腎損害，高劑量時(shí)也可造成肝毒性〔9〕?！　SH是由谷氨酸、半胱氨酸和甘氨酸結(jié)合而成的三肽，是人體細(xì)胞內(nèi)的重要代謝物質(zhì)，半胱氨酸上的巰基為其活性基團(tuán)，能夠清除體內(nèi)的超氧離子及其他自由基，保護(hù)細(xì)胞膜的完整性，維持細(xì)胞的正常代謝。研究發(fā)現(xiàn)，作為抗腫瘤治療

6、的輔助用藥，GSH對化療藥物所導(dǎo)致肝損害有較好的預(yù)防作用及治療效果〔10〕?！　”緦?shí)驗(yàn)認(rèn)為GSH并未明顯影響CDDP的細(xì)胞毒性。已有資料表明，CDDP造成臟器損傷的主要原因?yàn)樽杂苫鶕p傷，GSH最重要的作用就是抗氧化作用。GSH在抗自由基保護(hù)臟器的同時(shí)，并未影響到鉑的代謝和蓄積〔11，12〕?！　nnexin是一種分子量為35～36kD的Ca2+依賴性磷脂結(jié)合蛋白，能與細(xì)胞凋亡過程中翻轉(zhuǎn)到膜外的磷脂酰絲氨酸(PS)高親和力特異性結(jié)合。以標(biāo)記了FITC的Annexin作為熒光探針，利用流式細(xì)胞儀可檢測細(xì)胞凋亡的發(fā)生。PI是一種可以與DNA和RNA特異性接合的核酸染料，它不能透過完整

7、的細(xì)胞膜，但在凋亡中晚期的細(xì)胞和死細(xì)胞，PI能夠透過細(xì)胞膜而使細(xì)胞核紅染，將二者匹配使用，可以將活細(xì)胞、凋亡早期細(xì)胞、凋亡中晚期細(xì)胞和壞死細(xì)胞區(qū)分開來。由流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果得知，隨著作用時(shí)間的延長，GSH明顯降低了細(xì)胞的凋亡率，但給予CDDP+GSH后，GSH并未影響CDDP引起的細(xì)胞凋亡?！　〖?xì)胞凋亡的主要途徑之一是線粒體介導(dǎo)的凋亡通路。凋亡的重要事件與線粒體跨膜電位的改變有關(guān)。線粒體膜兩側(cè)質(zhì)子及其他離子的不對稱分布形成了線粒體Δψm，羅丹明123可被線粒體質(zhì)子泵攝入,其攝入量