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1、賽萊西布對(duì)肝癌HepG2細(xì)胞增殖與凋亡影響【關(guān)鍵詞】,HepG2細(xì)胞;環(huán)氧合酶-2；賽萊西布；增殖;凋亡 摘要：目的探討選擇性環(huán)氧合酶-2(cox-2)抑制劑賽萊西布(celecoxib)對(duì)人肝癌細(xì)胞株HepG2細(xì)胞增殖、凋亡的影響及其可能的作用機(jī)制。方法用不同濃度的賽來西布處理HepG2細(xì)胞，分別應(yīng)用四甲基偶氮噻唑藍(lán)試驗(yàn)、DNA梯度電泳法、放射免疫法檢測(cè)賽亞西布對(duì)HepG2細(xì)胞增殖和凋亡及其cox-2活性的影響；應(yīng)用免疫印跡法和比色法檢測(cè)賽萊西布對(duì)HepG2細(xì)胞胱氨酸蛋白酶3(clasepase-3)蛋白質(zhì)的表達(dá)及活性的影響。
2、結(jié)果125，25，50μmol/L的賽萊西布作用于HepG2細(xì)胞后，HepG2細(xì)胞增殖受抑制，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<001)；賽萊西布干預(yù)組HepG2細(xì)胞DNA明顯降解，可見細(xì)胞凋亡特征性梯狀DNA條帶；干預(yù)組HepG2細(xì)胞caspase3蛋白表達(dá)及活性均明顯升高，與對(duì)照組比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<001)；賽萊西布明顯抑制HepG2細(xì)胞cox-2活性，與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<001)。結(jié)論賽萊西布可通過cox-2通路和caspase3通路抑制HepG2細(xì)胞增殖并誘導(dǎo)其凋亡?！ ￡P(guān)鍵
3、詞：HepG2細(xì)胞;環(huán)氧合酶-2；賽萊西布；增殖;凋亡 Effectsofcyclooxygenase-2onproliferationandapoptosisinHepG2cells Abstract：ObjectiveToexaminetheeffectsofaselectiveinhibitorofcox-2,celecoxibongroeasuredbyMTT,apoptosisentationassay,andcox-2activityeasuredbyRIA;Expressionofcaspase-3protEin
4、inHepG2cellsinedbyeasuredusingcolorimetricassay.ResultsAfterHepG2cellsol/L),celecoxibcouldsignificantlysuppressthegroalladder,thecharacteristicsofcellsundergoingapoptosis;Meanore,thelevelofcox-2activitymatorydrugs，NSAIDs)具有預(yù)防和輔助治療腫瘤尤其胃腸道腫瘤的作用〔6〕，但NSAIDs抑制腫瘤的作用機(jī)制尚不明確。本
5、研究選擇NSAIDs類藥物中的1種高選擇性cox-2抑制劑賽萊西布(賽來西布)，作用于人肝癌細(xì)胞株HepG2觀察其對(duì)HepG2細(xì)胞增殖與凋亡的影響，并探討其可能的作用機(jī)制。結(jié)果報(bào)告如下?！ ?材料與方法 11材料 111試劑賽萊西布(celecoxib，美國(guó)Cayman公司)；四甲基偶氮噻唑藍(lán)(MTT，上海華美生物工程公司)；二硫代蘇糖醇(DTT，美國(guó)Promega公司)；兔抗aspase-3抗體、兔抗人cox-2多克隆抗體(美國(guó)SantaCruz公司)；底物Ac-DEVD-pNa(N-Acetyl-Asp-Glu-Val-A
6、sp-p-Nitroanilide)、核糖核酸酶-A(RNaseA)、4-(2-羥乙基)-1-哌嗪乙烷磺酸(Hepes)、苯甲基磺酰氟(PMSF)、蛋白酶抑制劑(aprotinin，美國(guó)Sigma公司)，RMPI-1640培養(yǎng)基、小牛血清美國(guó)Gibco公司)；PGE2放射免疫測(cè)定試劑盒(蘇州大學(xué)醫(yī)學(xué)院)?！ ?12儀器5415R低溫臺(tái)式高速離心機(jī)(德國(guó)Eppendorf公司)；HVE50凝膠成像系統(tǒng)(美國(guó)SYNGENE公司)；GS-930薄層掃描圖像分析儀(日本島津公司)；2123TC型CO2培養(yǎng)箱(美國(guó)Sheldon公司)；EL
7、X800酶標(biāo)儀(美國(guó)Bio-Tek公司)?！ ?2方法 121細(xì)胞培養(yǎng)人肝腫瘤細(xì)胞株HepG2由廣西醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)中心保存。HepG2細(xì)胞為貼壁細(xì)胞，用含10%小牛血清、100U/ml青霉素和100μg/ml鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基在37℃、飽和濕度及5%CO2的細(xì)胞培養(yǎng)箱內(nèi)傳代培養(yǎng)。 122MTT法測(cè)定賽萊西布對(duì)HepG2細(xì)胞增殖的影響用25g/L胰蛋白酶消化對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的HepG2細(xì)胞制備單細(xì)胞懸液。以每孔5×103個(gè)細(xì)胞接種于96孔培養(yǎng)板，24h后換液，加入不同濃度賽萊西布使其終濃度分別為125，25，50μmol/
8、L。設(shè)不進(jìn)行藥物干預(yù)的細(xì)胞為對(duì)照組。每種濃度平行4個(gè)復(fù)孔，繼續(xù)培養(yǎng)。MTT法〔7〕測(cè)定賽萊西布對(duì)HepG2細(xì)胞增殖的影響?！ ?23DNA梯度電泳法檢測(cè)HepG2細(xì)胞凋亡DNA片斷將1×106個(gè)細(xì)胞接種于100ml培養(yǎng)瓶，細(xì)胞貼壁后換液，加入賽萊西
