同基因骨髓造血干細(xì)胞移植免疫重建誘導(dǎo)小鼠皮膚移植免疫耐受的初步研究

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1、江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文同基因骨髓造血干細(xì)胞移植免疫重建誘導(dǎo)小鼠皮膚移植免疫耐受的初步研究姓名：周慶申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：徐三榮20120616江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文摘要目的：探討小鼠異基因皮膚移植后接受清髓性預(yù)處理，通過(guò)受體同基因骨髓造血干細(xì)胞移植重建免疫系統(tǒng)誘導(dǎo)皮膚移植物免疫耐受的可行性。方法：1、建立皮膚移植模型：受體雌性BALB／c小鼠隨機(jī)分為2組，A：同基因移植組，BALB／c．BALB／c；B：異基因移植組，C57B啪．BALB／c。通過(guò)觀察移植皮膚形態(tài)變化及成活時(shí)間驗(yàn)證皮

2、膚移植模型的可靠性。2、建立免疫重建模型：受體雌性BALB／e小鼠隨機(jī)分為3組，A：空白對(duì)照組；B：全身照射(TBI)組；C：TBI+骨髓移植(BMT)組。受體小鼠接受致死劑量直線加速器射線全身照射，TBI后4--6小時(shí)內(nèi)經(jīng)尾靜脈注射供體雄性BALB／c小鼠骨髓細(xì)胞。通過(guò)觀察TBI后各組小鼠一般情況變化和存活時(shí)間，檢測(cè)外周血白細(xì)胞及血小板計(jì)數(shù)，脾細(xì)胞對(duì)刀豆蛋白A(ConA)的增殖反應(yīng)能力，PCR檢測(cè)受體內(nèi)性別決定基因Sry基因初步檢測(cè)免疫重建水平。3、同基因骨髓造血干細(xì)胞移植免疫重建誘導(dǎo)皮膚移植免

3、疫耐受：受體雌性BALB／c小鼠隨機(jī)分為4組，A：移植對(duì)照組：B：環(huán)孢霉素A(CsA)鰣l；C：CsA+TBI組；D：CsA+TBI+BMT組。受體BALB／C小鼠接受供體C57BL／6小鼠皮肽移植，皮膚移植當(dāng)天爭(zhēng)術(shù)后第7天f旺人腹腔注射CsA，第8人接受斂夕匕劑毋的+“線加速器射線個(gè)身照射，4---6小時(shí)內(nèi)通過(guò)尾靜脈i}射受體l叫基I大I骨{ijii細(xì)胞。通過(guò)記I江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文錄皮膚移植物存活時(shí)間、觀察皮膚移植物HE染色組織學(xué)改變、單向混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢測(cè)免疫耐受的效應(yīng)；TBI后

4、記錄小鼠生存率及外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)檢測(cè)免疫重建情況。結(jié)果：1、同基因移植組，除1例皮膚移植物因抓咬死亡，其余存活良好；異基因移植組，除l例皮膚移植物在術(shù)后7天因皮下淤血死亡，其余在9""14天內(nèi)因排斥反應(yīng)死亡，兩組手術(shù)成功率為93．33％。2、B組小鼠在TBI后12天內(nèi)全部死亡，而C組小鼠除1只于TBI后第6天死亡，其余長(zhǎng)期存活，其白細(xì)胞數(shù)與血小板數(shù)在TBI后第7天均降到最低，之后持續(xù)性增高，第2l天時(shí)白細(xì)胞數(shù)與A組比較無(wú)顯著差異(尸>O．05)，而血小板數(shù)達(dá)到正常值水平：第2l天時(shí)C組淋巴細(xì)胞對(duì)C

5、onA增值反應(yīng)能力與A組比較無(wú)顯著差異(尸>O．05)：第28天時(shí)C組體內(nèi)均能檢測(cè)到Sry基因。3、存活時(shí)間：A、B組未接受TBI均存活良好，C組小鼠在TBI后6~lO天內(nèi)全部死亡，而D組小鼠在觀察期間存活良好；外周血白細(xì)胞計(jì)數(shù)：C組白細(xì)胞數(shù)呈持續(xù)性降低直到全部死亡，D組于TBI后第6天時(shí)降至最低點(diǎn)，之后持續(xù)上升，于第l8天達(dá)到B組水平；皮膚成活時(shí)間：D組移植皮膚平均存活時(shí)間為34．9天，顯著長(zhǎng)于各對(duì)照組(尸

6、性排斥反應(yīng)，淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)較少，組織結(jié)構(gòu)清晰；混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)：D組小鼠脾細(xì)胞對(duì)供體小鼠脾細(xì)胞增殖反應(yīng)顯著降低，而對(duì)第三方小鼠脾細(xì)胞增殖反應(yīng)與A組和B糾I比較無(wú)顯著差異(尸>O．05)。江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文結(jié)論：1、采用背．背皮膚移植可建立穩(wěn)定的小鼠皮膚移植模型。2、通過(guò)直線加速器射線小鼠全身照射后受體同基因骨髓移植可建立免疫重建模型。3、皮膚移植后直線加速器射線全身照射，利用受體同基因骨髓移植重建免疫系統(tǒng)可顯著延長(zhǎng)小鼠皮膚移植物存活時(shí)間，可誘導(dǎo)供體特異性免疫耐受。受關(guān)鍵詞：造血干細(xì)胞，骨髓移植，皮

7、膚移植，免疫重建，免疫耐江蘇大學(xué)碩士學(xué)位論文ABSTRACTObjective：Tostudythepossibilityofusingsyngeneicbonemarrowhematopoietiestemcellstoreconstituteimmunesystemandinducetransplantationtolerancetofullymismatchedskinallograflsinmice．Methods：1．Skintransplantationmodels：recipient

8、soffemaleBALB／cmiceweredividedrandomlyintotwogroups，A：Syngenictransplantationgroup，BALB／c—BALB／c，B：Allogeneictransplantationgroup，C57BL／6一BALB／c．Theskinmorphologyfeatureandsurvivaltimewererecordedtoverifythereliabilityofthemodelsofskintranspla