補(bǔ)腎生髓成肝調(diào)控肝腎精虛大鼠肝再生的作用及機(jī)制研究

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1、湖北中醫(yī)藥大學(xué)碩士學(xué)位論文“補(bǔ)腎生髓成肝”調(diào)控肝腎精虛大鼠肝再生的作用及機(jī)制研究姓名：林立生申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：中西醫(yī)結(jié)合臨床指導(dǎo)教師：李瀚旻20120512摘要目的：通過觀察體現(xiàn)“補(bǔ)腎生髓成肝’’治療法則的院內(nèi)制劑(鄂藥制藥字z20113160)對肝腎精虛／肝腎陰虛(MSG-肝再生一大鼠)模型肝再生的影響及機(jī)制，探討“補(bǔ)腎生髓成肝"調(diào)控肝再生改善肝腎精虛證的生物學(xué)基礎(chǔ)，揭示慢性乙型肝炎肝腎陰虛證的科學(xué)內(nèi)涵和證候本質(zhì)，明確“久病入腎"、“重病入腎”(慢性乙型肝炎肝腎陰虛證)的客觀依據(jù)和量化考核指標(biāo)，為臨床采用骨髓干

2、細(xì)胞移植或“補(bǔ)腎生髓成肝"聯(lián)合骨髓干細(xì)胞移植治療肝衰竭提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，為慢性乙型肝炎肝腎陰虛證的客觀化、標(biāo)準(zhǔn)化、規(guī)范化和提高臨床療效提供科學(xué)依據(jù)。方法：wiStar大鼠新生乳鼠于出生第2、4、6、8、10天時(shí)皮下注射左旋谷氨酸單鈉一生理鹽水溶液，劑量為每次4mg／g體重，生理鹽水對照組大鼠皮下注射等體積醫(yī)用生理鹽水，PHx組大鼠不作處理。28天后離乳，6周時(shí)隨機(jī)分為PHx組、生理鹽水對照組、假手術(shù)組、模型組和補(bǔ)腎生髓成肝組，補(bǔ)腎生髓成肝組大鼠按39／kg劑量給予院內(nèi)制劑(鄂藥制藥字Z20113160)灌胃，其余各組給予等

3、量生理鹽水灌胃。連續(xù)給藥兩周后行肝大部分切除術(shù)切除肝臟左葉和中葉，假手術(shù)組翻動肝臟不切除。術(shù)后繼續(xù)給藥，在術(shù)后1天、3天、7天、10天時(shí)分別分析肝再生度、肝再生指數(shù)(％)和肝細(xì)胞分裂指數(shù)MI變化，觀察外周血紅細(xì)胞計(jì)數(shù)和血紅蛋白含量，分析骨髓單個(gè)核細(xì)胞CD34／CD45雙陽性率的變化，觀察肝組織CD34表達(dá)情況，觀察肝組織和垂體纖維粘連蛋白FN的表達(dá)。病理切片拍照后用ImagePro-Plus6．0軟件進(jìn)行圖像處理，選定分析區(qū)域，獲取平均光密度值MOD。所有數(shù)據(jù)均利用統(tǒng)計(jì)軟件SPSSl9．5中文版處理，多個(gè)樣本均數(shù)的組間

4、比較采用多因素方差分析，根據(jù)軟件統(tǒng)計(jì)結(jié)果繪制圖表。結(jié)果：肝腎精虛大鼠肝再生過程嚴(yán)重失調(diào)，表現(xiàn)為術(shù)后第1天肝再生亢進(jìn)，肝再生度(0．34±0．10)顯著高于PHx組(0．224-0．08)和生理鹽水對照組(0．21±0．05)，再生指數(shù)(1．884-0．14)高于PHx組(1．464-0．13)和生理鹽水對照組(1．474-0．18)、低于MSG一假手術(shù)組(3．404-0．兒)，肝細(xì)胞分裂指數(shù)MI(1．05±0．12)高于PHx組(0．86±0．16)和生理鹽水對照組(O．87±0．16o中晚期肝再生過程則受到顯著抑制，

5、術(shù)后第3、7和10天的肝再生度分別為0．42±o．08、0．57±0．12、0．70±O．08，低于PHx組和生理鹽水對照組；肝再生指數(shù)分別為2．07±0．04、2．41±0．06、2．84±0．10，低于PHx組、生理鹽水對照組和MSG-假手術(shù)組；M1分別為1．04±0．18、0．41土O．16、0．15±0．03，明顯低于PHx組和生理鹽水對照組。最終模型組大鼠在肝再生度、再生指數(shù)和肝細(xì)胞分裂指數(shù)等方面均低于其它各組，不能恢復(fù)到正常水平。經(jīng)“補(bǔ)腎生髓成肝"的院內(nèi)制劑(鄂藥制藥字z20113160)治療后，模型大鼠肝

6、再生紊亂情況得到一定糾正。術(shù)后第1天肝再生度(0．13±O．07)低于模型組(0．34±O．10)和PHx組(O．22±0．08)，肝再生指數(shù)(1．52±0．11)顯著低于模型組(1．88±0．14)，肝細(xì)胞分裂指數(shù)MI(0．77士0．14)低于模型組(1．054-O．12)，說明模型大鼠在肝再生早期的異?？哼M(jìn)被抑制。術(shù)后第3、7和10天補(bǔ)腎生髓成肝成肝組大鼠肝再生度分別為0．50±0．05、0．74±O．06、O．86-4-O．03，與模型組比較顯著升高；肝再生指數(shù)分別為2．19±0．11、2．84±O．12、3．2

7、7±O．06，高于模型組；肝細(xì)胞分裂指數(shù)分別為1．89土0．13、0．57±0．20、O．28±0．04，顯著高于模型組。外周血紅細(xì)胞RBC計(jì)數(shù)和血紅蛋白Hb含量結(jié)果顯示，MSG-假手術(shù)組顯著低于生理鹽水組，模型組顯著低于MSG-假手術(shù)組，經(jīng)“補(bǔ)腎生髓成肝’’方藥治療，補(bǔ)腎生髓成肝組外周血RBC計(jì)數(shù)、Hb含量恢復(fù)正常。流式細(xì)胞術(shù)分析結(jié)果顯示，術(shù)后l天、3天、7天、10天，模型組大鼠骨髓細(xì)胞中CD34／CD45雙陽性細(xì)胞率低于PHx組和生理鹽水對照組，差異具有顯著性，P<0．05。給予“補(bǔ)腎生髓成肝"方藥治療，補(bǔ)腎生髓成

8、肝組大鼠骨髓C034／CD45雙陽性細(xì)胞率明顯增加，在術(shù)后3天、7天、1o天均顯著高于模型組，差異具有顯著性，P<0．05。實(shí)驗(yàn)大鼠肝組織CD34的表達(dá)與骨髓CD34／CD45雙陽性細(xì)胞率的變化趨勢一致，術(shù)后1天、3天、7天、10天時(shí)模型組大鼠肝組織CD34的表達(dá)低于PHx組和生理鹽水對照組，差異具有顯著性，P<0．05；補(bǔ)腎生髓