降鈣素基因相關肽在頜骨骨折愈合過程中對轉(zhuǎn)化生長因子-β1的調(diào)控作用研究

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1、第三軍醫(yī)大學碩士學位論文降鈣素基因相關肽在頜骨骨折愈合過程中對轉(zhuǎn)化生長因子--β1的調(diào)控作用研究姓名：周燕申請學位級別：碩士專業(yè)：口腔臨床醫(yī)學指導教師：譚穎徽201205第三軍醫(yī)大學碩士學位論文降鈣素基因相關肽在頷骨骨折愈合過程中對轉(zhuǎn)化生長因子一p。的調(diào)控作用研究木摘要降鈣素基因相關肽(Calcatoningenerelatedpeptide，CGRP)作為一種肽類神經(jīng)遞質(zhì)，主要分布在代謝活躍的骨組織中，可調(diào)節(jié)骨細胞生長、分化、活性，從而調(diào)控骨折愈合過程，但是其具體調(diào)控機制目前尚不明確。同時研究發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)化生長因子．13(TGF一13)可同時刺激

2、間充質(zhì)干細胞、軟骨細胞和成骨細胞的增殖及分化，還可以誘導細胞外蛋白質(zhì)的產(chǎn)生，在軟骨形成期及骨形成改建期發(fā)揮十分重要的作用。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)TGF—D有五種不同結構為TGF．pl-5，骨折愈合過程中不同結構的TGF．p在不同時間到達表達峰值，發(fā)揮的調(diào)控作用也不相同。其中TGF—Dl的表達時間最長，TGF—pl與TGF—p2的比例約為4：1，TGF—pl也是目前研究的最多的一個亞結構。在頜骨骨折愈合過程中，降鈣素基因相關肽是否通過對TGF．Bl的調(diào)控，促使骨折愈合?本實驗在課題組以往工作的基礎上，建立失下牙槽神經(jīng)支配的下頜骨骨折模型，檢測骨痂中CGR

3、P的分布，進而研究頜骨骨折愈合的骨痂中CGRP的改變對TGF．Bl的表達所產(chǎn)生的影響；體外細胞實驗研究中，通過加入外源性CGRP培養(yǎng)成骨細胞，檢測成骨細胞培養(yǎng)液中TGF—Bl的表達，研究對成骨細胞的調(diào)控作用。方法：細胞實驗：觀察CGRP對成骨細胞TGF—p1表達的影響。原代培養(yǎng)新生兔顱骨成骨細胞，對所培養(yǎng)的細胞進行形態(tài)學觀察及堿性磷酸酶染色鑒定后，分別向細胞培養(yǎng)液中加入不同濃度的CGRP，分別在不同時間段進行處理，用MTT法檢測成骨細胞生長活力，用western—blot檢測成骨細胞中TGF—B1的蛋白表達。動物實驗：實驗建立失下牙槽神經(jīng)下頜

4、骨骨折愈合實驗組和單純性下頜骨骨折愈合對照組的實驗動物模型(每組各25只)。兩組動物分別傷后于4d、7d、14d、21d、28d于耳緣靜脈處空氣栓塞致死，截取制備骨折處之骨痂，采用免疫組化方法對觀察愈合情況，運用Western—blot法檢測TGF．D1蛋白表達。結果：細胞實驗結果：(1)原代培養(yǎng)并分離兔顱骨成骨細胞，進行堿性磷酸酶(ALP)染色}國家自然科學基金資助項目(30973334)第三軍醫(yī)大學碩士學位論文鑒定。(2)外源性地加入同一濃度的CGRP后隨著時間的增加MTT值也呈增加趨勢；(3)同一時間點做比較，隨著CGRP濃度的不斷增加

5、，MTT值也呈上升趨勢，并且在48h和72h組，這種趨勢愈加明顯(P<0．05)。(4)Westernblot實驗中隨CGRP濃度的增加TGF．pl條帶灰度顯著升高，顯示TGF—B1蛋白的表達逐漸增強(P

6、陽性染色，鈣化并轉(zhuǎn)變?yōu)樾鹿堑能浌羌捌浔砻娴某晒羌毎?，其中?4d時對照組TGF．D1呈強陽性染色，與實驗組比較有表達差異(P

7、能力。(2)CGRP對成骨細胞的增殖具有促進作用。(3)骨折愈合過程中，失下牙槽神經(jīng)實驗組由于神經(jīng)缺失所至的CGRP表達減少，導致TGF一131的表達降低，影響骨痂的正常愈合。(4)在骨痂生長過程中TGF—pl的表達量隨著時間的增加而遞增。關鍵詞：降鈣素基因相關膚；失下牙槽神經(jīng)支配；轉(zhuǎn)化生長因子一pl；頜骨骨折愈合；成骨細胞；6第三軍醫(yī)大學碩士學位論文TheEffectsofCGRPontheexpressionandActivityofTGF—D1intheHealingofMandibularFractureinRabbitsAbstra

8、ctCalcatoningenerelatedpeptide(CGRP)，asapeptideneurotransmittersismainlydistribute