凡納濱對蝦(litopenaeus vannamei)和羅氏沼蝦(macrobrachium rosenbergii)卵黃蛋白原mrna合成部位的初步研究

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1、學(xué)校代碼：10264研究生學(xué)號M090101086上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文凡納濱對蝦（Litopenaeusvannamei）和羅氏沼蝦題目：（Macrobrachiumrosenbergii）卵黃蛋白原mRNA合成部位的初步研究Studyonsiteofvitellogeninsynthesisinthe英文題目：shrimpLitopenaeusvannameiandMacrobrachiumrosenbergii專業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖研究方向：水產(chǎn)動物繁殖與發(fā)育生物學(xué)姓名：李媛媛指導(dǎo)教師：蔡生力二O一二年

2、四月五日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴謹學(xué)風。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內(nèi)容負責，并完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版

3、，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本版權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密□學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：日期：年月日日期：年月日上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文答辯委員會成員名單姓名工作單位職稱備注趙金良上海海洋大學(xué)教授主席馬凌波東海水產(chǎn)研究所研究員委員鄒曙明上海海洋大學(xué)教授委員李云上海海洋大學(xué)講師秘書答辯地點水產(chǎn)與生命學(xué)院答辯日期2012.5.23A

4、208上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文凡納濱對蝦（Litopenaeusvannamei）和羅氏沼蝦（Macrobrachiumrosenbergii）卵黃蛋白原合成部位的初步研究摘要甲殼綱十足目是我國水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)的主要經(jīng)濟種類。卵黃積累是甲殼動物卵母[1][2]細胞發(fā)育成熟的必要前提，也是雌性個體生殖周期中的關(guān)鍵階段。蝦類胚胎發(fā)育以及無節(jié)幼體發(fā)育完全依賴于卵黃來滿足營養(yǎng)需要。卵黃蛋白在甲殼類中的合成部位一直以來是一個爭論不休的話題，就目前的研究成果看來，內(nèi)源性合成和外源性合成都有報道。本實驗選擇甲殼綱十足目對下

5、派的凡納濱對蝦（Litopenaeusvannamei）和真蝦派的羅氏沼蝦（Macrobrachiumrosenbergii）為研究對象，通過熒光定量PCR和Northern雜交的方法，初步探討其卵巢發(fā)育不同階段卵黃蛋白原的合成部位以及相對合成量。根據(jù)卵巢發(fā)育情況把凡納濱對蝦的卵巢分為6個時期：卵原細胞增殖期，卵黃發(fā)生前期，初級卵黃發(fā)生期，次級卵黃發(fā)生期，成熟期，恢復(fù)期。把羅氏沼蝦的卵巢分為5個發(fā)育階段：卵黃發(fā)生前期，初級卵黃發(fā)生期，次級卵黃發(fā)生期，成熟期，抱卵期。雌性凡納濱對蝦和羅氏沼蝦分別提取卵巢和

6、肝胰腺的總RNA，設(shè)計特異性引物進行熒光定量PCR擴增，對卵黃蛋白原mRNA表達進行相對定量分析。凡納濱對蝦的熒光定量PCR結(jié)果表明：在卵巢中，隨著卵巢的發(fā)育，卵黃蛋白原mRNA的相對表達量不斷增加，分別為：1.1,5.9,10.4,26.9,85.0，產(chǎn)卵以后急劇減少，為1.6。在肝胰腺中，隨著卵巢發(fā)育，相對表達量不斷增加，分別為：1.3,3.3,7.1,37.3,51.6，產(chǎn)卵以后急劇減少，為1.0。肝胰腺在次級卵黃發(fā)生期卵黃蛋白原mRNA增加明顯，卵巢在成熟期卵黃蛋白原mRNA增加明顯。同時，No

7、rthern雜交結(jié)果顯示，卵巢和肝胰腺在大于6.0kb的位置都有雜交信號的出現(xiàn)。尤其在初級卵黃發(fā)生期，次級卵黃發(fā)生期和成熟期的卵巢和肝胰腺中都檢測到了比較強烈的雜交信號，并且雜交信號有隨著卵巢的發(fā)育不斷增強的趨勢，而且在成熟期，肝胰腺中的雜交信號要明顯弱于卵巢。羅氏沼蝦的熒光定量PCR研究表明：在卵巢和肝胰腺中都有卵黃蛋白原mRNA的表達。隨著卵巢的發(fā)育，肝胰腺中卵黃蛋白原mRNA的相對表達量不斷增加，分別為：3.4,12.6,15.2，并在成熟期達到最大，為38.9，產(chǎn)卵以后為2.9，而卵I上海海洋大

8、學(xué)碩士學(xué)位論文巢在整個發(fā)育過程中對卵黃蛋白原合成的貢獻比較小，分別為1.0,1.3,1.7,4.8,1.5,除成熟期外，其他各期差異不顯著。同時，Northern雜交結(jié)果表明在次級卵黃發(fā)生期和成熟期的肝胰腺中有較明顯的雜交信號的出現(xiàn)，并且雜交信號隨著卵巢的發(fā)育而增強。在卵巢中則沒有檢測到非常明顯的雜交信號的出現(xiàn)。這與熒光定量PCR中的結(jié)果吻合。與凡納濱對蝦相似，羅氏沼蝦的卵黃蛋白原的相對表達量也是隨著卵巢的發(fā)育不斷增加，在成熟期達到最大，抱