白菜耐鋁基因型的篩選及耐鋁相關(guān)基因克隆

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1、獨(dú)創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學(xué)位論文，是在指導(dǎo)教師指導(dǎo)下，通過(guò)我的努力取得的成果，并且是自己撰寫(xiě)的。盡我所知，除了文中作了標(biāo)注和致謝中已經(jīng)作了答謝的地方外，論文中不包含其他人發(fā)表或撰寫(xiě)過(guò)的研究成果，也不包含在江西農(nóng)業(yè)大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)獲得學(xué)位或證書(shū)而使用過(guò)的材料。與我一同對(duì)本研究做出貢獻(xiàn)的同志，都在論文中作了明確的說(shuō)明并表示了謝意。如被查有嚴(yán)重侵犯他人知識(shí)產(chǎn)權(quán)的行為，由本人承擔(dān)應(yīng)有的責(zé)任。學(xué)位論文作者親筆簽名：蚴日期：論文使用授權(quán)的說(shuō)明秈12、6、7本人完全了解江西農(nóng)業(yè)大學(xué)有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，即學(xué)校有權(quán)送交論文的復(fù)印

2、件，允許論文被查閱和借閱；學(xué)?？梢怨颊撐牡娜炕虿糠謨?nèi)容，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存論文。保密，在——年后解密可適用本授權(quán)書(shū)?？诓槐Ｃ兀緦W(xué)位論文屬于不保密。團(tuán)(請(qǐng)?jiān)诜娇騼?nèi)打“√”)學(xué)位論文作者親筆簽名：壟l壘丑§日指導(dǎo)教師親筆簽名：期：型分6、7日期：刃／)·多·鄉(xiāng)本研究承蒙江西省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(編號(hào)：2007GZNO199)的資助。在此表示感謝!摘要摘要白菜(BrassicacampestrisL．ssp．chinensisMakino)屬于十字花科蕓薹屬白菜亞種，品種資源豐富，主要分布在我國(guó)南方地區(qū)，而南方

3、酸性紅壤的鋁毒害卻嚴(yán)重影響了其產(chǎn)量和質(zhì)量。本研究通過(guò)開(kāi)展白菜耐鋁基因的克隆，以期通過(guò)基因工程手段獲得白菜耐鋁性新品種。這不僅為蕓薹屬作物的遺傳改良奠定了基礎(chǔ)，而且對(duì)實(shí)現(xiàn)紅壤資源的高效利用具有重要的意義。本論文以矮腳黃白菜自交系(97．3．2)、黃心烏自交系(003．27)、上海青自交系(98．4．2)、黃芽菜自交系(97．8．6)、白蔓菁蕪菁自交系(001．24)五個(gè)白菜自交系為材料，篩選白菜最耐鋁基因型和最不耐鋁基因型，采用cDNA—AFLP、ReverseNorthernblot、RACE等優(yōu)勢(shì)互補(bǔ)的分子技術(shù)克隆白菜耐鋁基

4、因，研究結(jié)果如下：(1)對(duì)五種白菜自交系種子進(jìn)行不同程度的鋁脅迫處理，采用根相對(duì)伸長(zhǎng)率測(cè)定法和蘇木精染色法篩選出最耐鋁基因型為矮腳黃，最不耐鋁基因型為黃芽菜。(2)以矮腳黃自交系和黃芽菜自交系為材料，構(gòu)建不同鋁脅迫時(shí)期的白菜根尖RNA混合池，通過(guò)cDNA—AFLP技術(shù)篩選出5個(gè)耐鋁相關(guān)的TDFs，reverseNorthernblot驗(yàn)證均呈陽(yáng)性。(3)4個(gè)TDFs測(cè)序成功：H．A7T12長(zhǎng)485bp，與粳稻群組eDNA克隆同源性100％，編碼的蛋白質(zhì)與粳稻假擬蛋白的相似性100％；A．ASTl7長(zhǎng)271bp，與擬南芥煙酰胺腺

5、嘌呤二核苷酸結(jié)合域蛋白mRNA同源性89％，編碼的蛋白質(zhì)與擬南芥黃素腺嘌呤二核苷酸／煙酰胺腺嘌呤二核苷酸結(jié)合氧化還原酶相似性85％；A．A19T12長(zhǎng)301bp，與小鹽芥mRNA全長(zhǎng)cds克隆同源性81％，編碼的蛋白質(zhì)與擬南芥抗性蛋白相似性94％。A．A10T8長(zhǎng)300bp，與擬南芥二氫硫辛酰胺S乙酰基移轉(zhuǎn)酶基因同源性100％，編碼蛋白與二氫硫辛酰胺S乙?；妻D(zhuǎn)酶相似性100％，初步判斷其通過(guò)調(diào)控細(xì)胞物質(zhì)代謝來(lái)增強(qiáng)白菜耐鋁性。(4)RACE技術(shù)結(jié)合巢式PCR，獲得了A．A10T8基因全長(zhǎng)序列1691bp，包含6個(gè)ORF，最大O

6、RF位于299．1513之間，編碼405個(gè)氨基酸。BLAST顯示A．A10T8全長(zhǎng)基因與二氫硫辛酰胺S乙酰基移轉(zhuǎn)酶基因同源性100％，編碼的蛋白質(zhì)產(chǎn)物與二氫硫辛酰胺S乙酰基移轉(zhuǎn)酶相似性100％。關(guān)鍵詞：白菜；耐鋁基因；eDNA．AFLP；RACEABSTRACTBrassicachinensiswhichbelongstocruciferouspakchoisubspecies，mainlydistributesinsouthernChinawithabundantcultivars．butaluminumtoxicityof

7、theacidredsoilinsouthernChinahasseriousimpactonitsyieldandquality．BycloningthealuminiumresitancegeneofBrassicachinens西andexpectingtogetnewcultivarsofBrassicachinensiswithaluminiumresitancebymeansofgeneticengineeringinthisstudy．Itnotonlysetsabasisforgeneticimprovemen

8、tofBrassicachinensis．butalsoiSofgreatsignificancetouseofredsoilresourcesemciently．ThispaperusesthefiveinbredlinesofAijiaohuang(97·3-2)，Hua