白菜耐鋁基因型的篩選及耐鋁相關基因克隆

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1、獨創(chuàng)性聲明本人聲明，所呈交的學位論文，是在指導教師指導下，通過我的努力取得的成果，并且是自己撰寫的。盡我所知，除了文中作了標注和致謝中已經(jīng)作了答謝的地方外，論文中不包含其他人發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含在江西農業(yè)大學或其它教育機構獲得學位或證書而使用過的材料。與我一同對本研究做出貢獻的同志，都在論文中作了明確的說明并表示了謝意。如被查有嚴重侵犯他人知識產權的行為，由本人承擔應有的責任。學位論文作者親筆簽名：蚴日期：論文使用授權的說明秈12、6、7本人完全了解江西農業(yè)大學有關保留、使用學位論文的規(guī)定，即學校有權送交論文的復印件，允許論文被查閱和借閱；學校可以公布論文的全部或部分

2、內容，可以采用影印、縮印或其他復制手段保存論文。保密，在——年后解密可適用本授權書?？诓槐Ｃ?，本學位論文屬于不保密。團(請在方框內打“√”)學位論文作者親筆簽名：壟l壘丑§日指導教師親筆簽名：期：型分6、7日期：刃／)·多·鄉(xiāng)本研究承蒙江西省自然科學基金項目(編號：2007GZNO199)的資助。在此表示感謝!摘要摘要白菜(BrassicacampestrisL．ssp．chinensisMakino)屬于十字花科蕓薹屬白菜亞種，品種資源豐富，主要分布在我國南方地區(qū)，而南方酸性紅壤的鋁毒害卻嚴重影響了其產量和質量。本研究通過開展白菜耐鋁基因的克隆，以期通過基因工程手段獲得白菜耐鋁

3、性新品種。這不僅為蕓薹屬作物的遺傳改良奠定了基礎，而且對實現(xiàn)紅壤資源的高效利用具有重要的意義。本論文以矮腳黃白菜自交系(97．3．2)、黃心烏自交系(003．27)、上海青自交系(98．4．2)、黃芽菜自交系(97．8．6)、白蔓菁蕪菁自交系(001．24)五個白菜自交系為材料，篩選白菜最耐鋁基因型和最不耐鋁基因型，采用cDNA—AFLP、ReverseNorthernblot、RACE等優(yōu)勢互補的分子技術克隆白菜耐鋁基因，研究結果如下：(1)對五種白菜自交系種子進行不同程度的鋁脅迫處理，采用根相對伸長率測定法和蘇木精染色法篩選出最耐鋁基因型為矮腳黃，最不耐鋁基因型為黃芽菜。(2

4、)以矮腳黃自交系和黃芽菜自交系為材料，構建不同鋁脅迫時期的白菜根尖RNA混合池，通過cDNA—AFLP技術篩選出5個耐鋁相關的TDFs，reverseNorthernblot驗證均呈陽性。(3)4個TDFs測序成功：H．A7T12長485bp，與粳稻群組eDNA克隆同源性100％，編碼的蛋白質與粳稻假擬蛋白的相似性100％；A．ASTl7長271bp，與擬南芥煙酰胺腺嘌呤二核苷酸結合域蛋白mRNA同源性89％，編碼的蛋白質與擬南芥黃素腺嘌呤二核苷酸／煙酰胺腺嘌呤二核苷酸結合氧化還原酶相似性85％；A．A19T12長301bp，與小鹽芥mRNA全長cds克隆同源性81％，編碼的蛋白

5、質與擬南芥抗性蛋白相似性94％。A．A10T8長300bp，與擬南芥二氫硫辛酰胺S乙?；妻D酶基因同源性100％，編碼蛋白與二氫硫辛酰胺S乙?；妻D酶相似性100％，初步判斷其通過調控細胞物質代謝來增強白菜耐鋁性。(4)RACE技術結合巢式PCR，獲得了A．A10T8基因全長序列1691bp，包含6個ORF，最大ORF位于299．1513之間，編碼405個氨基酸。BLAST顯示A．A10T8全長基因與二氫硫辛酰胺S乙?；妻D酶基因同源性100％，編碼的蛋白質產物與二氫硫辛酰胺S乙?；妻D酶相似性100％。關鍵詞：白菜；耐鋁基因；eDNA．AFLP；RACEABSTRACTBras

6、sicachinensiswhichbelongstocruciferouspakchoisubspecies，mainlydistributesinsouthernChinawithabundantcultivars．butaluminumtoxicityoftheacidredsoilinsouthernChinahasseriousimpactonitsyieldandquality．BycloningthealuminiumresitancegeneofBrassicachinens西andexpectingtogetnewcultivarsofBrassicachine

7、nsiswithaluminiumresitancebymeansofgeneticengineeringinthisstudy．ItnotonlysetsabasisforgeneticimprovementofBrassicachinensis．butalsoiSofgreatsignificancetouseofredsoilresourcesemciently．ThispaperusesthefiveinbredlinesofAijiaohuang(97·3-2)，Hua