mbp原核表達及其對樹突狀細胞表型和功能成熟的影響

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1、叢墼廈趑盍達區(qū)基盤撾塞達緝胞塞型塑邊熊盛塾數(shù)整煎⑧論文作者簽名：指導(dǎo)教師簽名：論文評閱人1：評閱人2：評閱人3：評閱人4：評閱人5：』啦—罐逵率一塞童煌熬援』浙江太堂撼壹堂瞳匿壘遷閱匿名遷闥答辯委員會主席：韭童煌斂援Z進江太堂墟立堂院委員1：夏太煎熬援』逝江太堂委員2：三壹壹熬援Z逝婆態(tài)堂委員3：周鹽福．劇．熬援』逝墊太堂委員4：鹽旭璦副教授』逝婆太堂委員5：浙江大學(xué)研究生學(xué)位論文獨創(chuàng)性聲明＼刪本人聲明所呈交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師指導(dǎo)下進行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特別加以標(biāo)注和致謝的地方外，論文中不包含其他人已

2、經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不包含為獲得浙江大學(xué)或其他教育機構(gòu)的學(xué)位或證書而使用過的材料。與我一同工作的同志對本研究所做的任何貢獻均已在論文中作了明確的說明并表示謝意。學(xué)位論文作者簽名：鴟孕簽字日期：≯IP年≯月咱學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解澎姿盤堂有權(quán)保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交本論文的復(fù)印件和磁盤，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)逝姿盤鱟可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索和傳播，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存、匯編學(xué)位論文。(保密的學(xué)位論文在解密后適用本授權(quán)書)學(xué)位論文作者簽名

3、：鐫璋J導(dǎo)師簽名：篪遵備簽字目期：如、甲爺月7怕簽字日期：刃，侔硼≯泊浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文致謝致謝回顧在浙江大學(xué)學(xué)習(xí)在職研究生課程的這幾年，感覺收益頗多，知識方面拓展不少，科研方面更是受益匪淺。在這里首先要感謝我的導(dǎo)師潘建平教授，從潘教授身上我深切感受到一位學(xué)者嚴謹治學(xué)的作風(fēng)和誨人不倦的態(tài)度。我的日常工作和科研學(xué)術(shù)研究關(guān)系不大，因此對科研領(lǐng)域的新進展不是特別熟悉，而潘教授總是不厭其煩地進行指導(dǎo)。并從技術(shù)上給予無私的幫助，使我的課題研究能順利進行。此外還要感謝周林福老師的支持和幫助，感謝同一屆的呂棠山同學(xué)，感謝師妹辛?xí)喳?、?/p>

4、鴻鵠的幫助。浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要MBP原核表達及其對樹突狀細胞表型和功能成熟的影響浙江大學(xué)醫(yī)學(xué)院碩士研究生導(dǎo)師免疫學(xué)翁秀妹潘建平教授中文摘要背景和目的麥芽糖結(jié)合蛋白(maltosebindingprotein，MBP)是近年發(fā)現(xiàn)的免疫佐劑，它可提高重組亞單位疫苗的免疫原性。研究發(fā)現(xiàn)，MBP具有廣泛的免疫活性，可激活NK細胞、巨噬細胞和1111細胞；也可通過TLR4活化DC，產(chǎn)生前炎癥因子參與免疫。由此提示MBP可作為免疫增強劑，單獨作用時也可提高機體免疫應(yīng)答。DC是功能最強的專職性抗原提呈細胞(antigen．pr

5、esentingcell，APC)，是唯一能直接激活初始T細胞的專職性APC，在固有免疫和適應(yīng)性免疫中均發(fā)揮著重要的作用。DC的發(fā)育分為成熟與未成熟階段，兩者具有不同的生物學(xué)特征和細胞表型。非成熟DC低表達MHC分子和CD40、CD54、CDS0、CD86等共刺激分子和粘附分子；成熟的DC高表達CD80(B7．1)、CD86(B7．2)、CD40等共刺激分子，和細胞間粘附分子ICAM．1(CD54)等。迄今，有關(guān)MBP的研究，主要集中在研究MBP融合重組蛋白的活性。然而關(guān)于MBP直接作用于免疫系統(tǒng)，并提高疫苗免疫應(yīng)答反應(yīng)的

6、機制還不清楚。所以，本課題通過構(gòu)建MBP原核表達載體，表達并分離純化MBP，在此基礎(chǔ)上，研究MBP對DC分化和功能成熟的影響．旨在為闡明MBP作為新型免疫增強劑的分子II浙江大學(xué)碩上學(xué)位論文中文摘要機制提供新的實驗依據(jù)，為疫苗佐劑的研究提供新的線索。方法1．構(gòu)建MBP原核表達系統(tǒng)：以大腸桿菌K12DNA為模板，PCR擴增malE基因并構(gòu)建其原核表達系統(tǒng)。采用SDS．PAGE檢測目的蛋白MBP表達情況，AmyloseResin柱提純MBP。WestemBlot鑒定MBP的免疫反應(yīng)性。2．DC2．4細胞系的培養(yǎng)：DC2．4培養(yǎng)

7、于含10％FCS的RPMI．1640完全培養(yǎng)基(含300mg／L谷氨酰胺，100U／ml青霉素，100I-tg／ml鏈霉素)。3．實驗分組：實驗分為3組，1)空白對照組；2)1¨g／mlMBP組；3)5}tg／mlMBP組。收集DC2．4細胞，各組分別用以下方式處理：1)空白對照組，即DC2．4組；2)DC2．4+1pg／rnlMBP；3)DC2．4+5gg／mlMBP。然后將24孔板放入37。C、含5％C02的孵箱中培養(yǎng)10h。收集細胞和培養(yǎng)上清，分別用于DC表型和細胞因子濃度檢測。實驗重復(fù)3次。4．DC2．4表型變化的

8、檢測：流式細胞術(shù)分析DC表面分子CD40、CD54、CD80、CD86、MHC．I及MHC．II表達。5．細胞因子檢測：ELISA檢測培養(yǎng)上清中細胞因子IL．1B、IL．6、IL．12及IL-23的濃度。結(jié)果1．所克隆的matE基因DNA序列與文獻報道完全相同。所構(gòu)建的原核表達系統(tǒng)能成功表達MBP蛋白。