mir--23b在bde47誘導(dǎo)cyp3a1表達(dá)中的調(diào)控作用及機(jī)制研究

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1、分類號(hào)：R12密級(jí)：?jiǎn)挝淮a：10312學(xué)號(hào)：20111189南京醫(yī)科犬掌碩士學(xué)位論文題目：miR-23b在BDE47誘導(dǎo)CYP3A1表達(dá)中的調(diào)控作用及機(jī)制研究南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所呈交的論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除了文中特別加以標(biāo)注引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫的成果作品。對(duì)本文的研究做出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人完全意識(shí)到本聲明的法律后果由本人承擔(dān)。作者簽名：蝴日期：知l牛年6月]日導(dǎo)師躲易肺日期．砂牌6月]日學(xué)位論文版

2、權(quán)使用授權(quán)書本學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國(guó)家有關(guān)部門或機(jī)構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱和借閱。本人授權(quán)南京醫(yī)科大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。本學(xué)位論文屬于(請(qǐng)?jiān)谝韵孪鄳?yīng)方框內(nèi)打“-4”)：1、保密2、不保解密后適用本授權(quán)書。作者簽名：酬＼蠹耷日期：加l‘降6月]日導(dǎo)師簽名．衛(wèi)柞誅卅期：w怍6月]日南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文目錄中文摘要??????????????????????????????

3、1ABSTRACT??????????????????????????????????????4前言???????????????????????????????7材料與方法????????????????????????????．10結(jié)果??????????????????????????????．27一、BDE47對(duì)H4IIE細(xì)胞CYP3A1的表達(dá)及活性的影響???????27二、miR-23b在BDE47誘導(dǎo)肝細(xì)胞CYP3A1表達(dá)中的作用??????33三、miR-23b對(duì)BDE47誘導(dǎo)大鼠CYP3A1表達(dá)及代謝產(chǎn)物生成的影

4、響?45分析與討論????????????????????????????．57結(jié)論???????????????????????????????????????一6l參考文獻(xiàn)?????????????????????????????．62綜述????????????????????????????????????68附錄???????????????????????????????．82攻讀碩士學(xué)位期間的研究成果????????????????????．84致謝???????????????????????????????．85

5、南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文miR-23b在BDE47誘導(dǎo)CYP3A1表達(dá)中的調(diào)控作用及機(jī)制研究南京醫(yī)科大學(xué)公共衛(wèi)生學(xué)院現(xiàn)代毒理學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室南京211166碩士研究生導(dǎo)師、于圳lJ中文摘要孫真真王守林教授目的：本研究旨從細(xì)胞和整體水平研究miR-23b調(diào)控BDE47誘導(dǎo)CYP3A1表達(dá)、活性及功能的重要作用及分子機(jī)制，為深入闡述BDE47的生物毒效應(yīng)及健康危害，并為環(huán)境污染物的健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)估提供理論依據(jù)和技術(shù)支撐。方法：首先利用表達(dá)CYP3A1酶的大鼠H4IIE細(xì)胞株，通過(guò)CCK．8、WestemBlot、siRNA干擾、CYP3

6、A誘導(dǎo)劑(地塞米松，DEX)處理和免疫熒光等試驗(yàn)確定BDE47的毒性劑量及BDE47對(duì)CYP3A1的誘導(dǎo)作用。然后通過(guò)生物信息學(xué)預(yù)測(cè)和real—timePCR驗(yàn)證，進(jìn)一步確認(rèn)目標(biāo)microRNA(miR．23b)，在此基礎(chǔ)上，運(yùn)用雙熒光素酶報(bào)告基因?qū)嶒?yàn)明確miR．23b和CYP3A1(大鼠)／CYP3A4(人)的靶向關(guān)系。然后利用microRNA的功能實(shí)驗(yàn)(miR．23b過(guò)表達(dá)和抑制表達(dá)試驗(yàn))驗(yàn)證miR．23b對(duì)CYP3A1／CYP3A4的調(diào)控作用。最后通過(guò)Lentiviral．a(chǎn)nti．miR-23b慢病毒和BDE47聯(lián)合處理大

7、鼠，檢測(cè)動(dòng)物樣本miR．23b水平、CYP3A1表達(dá)水平和活性變化，以及GC．MS檢測(cè)樣本BDE47原形和代謝產(chǎn)物的含量，進(jìn)一步驗(yàn)?zāi)暇┽t(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文證miR．23b在調(diào)控BDE47誘導(dǎo)CYP3A表達(dá)及其功能中的重要作用。結(jié)果：1．不同濃度的BDE47處理H4IIE細(xì)胞，可引起細(xì)胞活力呈劑量依賴性下降，DEX(CYP3A1誘導(dǎo)劑)預(yù)處理可明顯增強(qiáng)BDE47所致的細(xì)胞毒性；CYP3A1一siRNA轉(zhuǎn)染H4IIE細(xì)胞后，BDE47(20gM)的細(xì)胞毒性明顯下降。免疫熒光及WesternBlot實(shí)驗(yàn)顯示，BDE47可以顯著誘導(dǎo)CYP

8、3A1的表達(dá)。2．利用生物信息學(xué)軟件(miRanda—mirSVR、miRBase19、RNAhybrid、miRecords和PITA)初步確認(rèn)了miR-23b可能與CYP3A的調(diào)控表達(dá)有關(guān)，研究結(jié)果顯示，BDE47處理的細(xì)胞及BDE47染毒的大