資源描述：
《asiaⅰ型fmdv+vp1蛋白原核表達(dá)及條件優(yōu)化》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、新疆農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文AsiaⅠ型FMDVVP1蛋白原核表達(dá)及條件優(yōu)化姓名：魏婕申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：預(yù)防獸醫(yī)學(xué)指導(dǎo)教師：符子華;冉多良20090601AsiaI型FMDVVPl蛋白原核表達(dá)及條件優(yōu)化摘要口蹄疫(Footandmouthdisease，F(xiàn)MD)是由口蹄疫病毒(Footandmouthdiseasevirus，F(xiàn)MDV)引起的偶蹄動物發(fā)生的高度接觸性的傳染病。由于其爆發(fā)會對畜產(chǎn)品進(jìn)出口帶來嚴(yán)重影響，造成全球經(jīng)濟(jì)的巨大損失，因此被世界動物衛(wèi)生組織(Worldorganizationforanimalhealth，OI功列
2、為A類家畜傳染病之首。vPl蛋白是口蹄疫病毒的結(jié)構(gòu)蛋白，是主要的中和抗原位點(diǎn)，可以誘導(dǎo)動物機(jī)體產(chǎn)生中和抗體，對機(jī)體產(chǎn)生保護(hù)性反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)將AsiaI型FMDVVPl基因通過與pGEM．T載體連接，得到連接質(zhì)粒pGEM．KZ．VPl，經(jīng)過菌落擴(kuò)增、酶切回收純化VPl基因片段，將其與原核表達(dá)載體pET-28a連接，成功構(gòu)建重組表達(dá)載體pET28．KZ／03VPl。將重組載體轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21中，用不同的IPTG濃度及不同誘導(dǎo)時間誘導(dǎo)菌株表達(dá)VPl蛋白，分析不同IPTG濃度及不同誘導(dǎo)時間對蛋白表達(dá)量的影響，以確定最佳表達(dá)條件。結(jié)果表明，在
3、一定范圍內(nèi)，隨IPTG濃度的增高，表達(dá)量并不會隨之增大；而在固定誘導(dǎo)時間內(nèi)，隨誘導(dǎo)時間的延長，表達(dá)量會隨之增大。最后確定當(dāng)IPTG濃度為3mmol／L，誘導(dǎo)表達(dá)到最長時間9h時，VPl蛋白表達(dá)量最大。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果可以為以后大量表達(dá)重組蛋白VPl，及生產(chǎn)診斷試劑和疫苗產(chǎn)品提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，同時也為節(jié)省IPTG的使用量，降低生產(chǎn)成本，提高生產(chǎn)效率提供參考依據(jù)。關(guān)鍵詞：AsiaI型口蹄疫病毒；VPl蛋白；表達(dá)；IPTG；誘導(dǎo)濃度與時間OptimizationandprokaryoticexpressionoftheVP1proteinofFMDV
4、typeAsiaAbstractFMDVisthecausativeagentofFMD，ahighlycontagiousdiseaseofcloven-hoofedanimals，inadditioncountriesandthepeople’Slivingbyseverelyaffected．FMDinmanycountriesseverelylimitsitstradeinanimalsandanimalsproductsduetointernationalregulationsdesignedtolimitspreadofth
5、edisease．AnditwaspaidmofeattentionbyOIE．TheVPlgeneisthemainantigenicepitopesofFMDVwhichplaysveryimportantrolesininducingneutralizationantibodiesandmakeprotectivefunction．Inthisstudy,gottheVPlproductfromrecombinantplasmidofpGEM—KZ-VPl，thenligatedtheVPlgeneofFMDVofAsiaIand
6、thepET-28aexpressionvector,thentransformedintoBL21cellsandinducedtherecombinantplasmidwithdifferentconcentrationofIPTGanddifferenttimetoexpresstheVPlprotein．TheresultsofSDS—PAGEandWesternblotdemonstratedthattheexpressedVPlproteinwasexistedintheformofinclusionbody．Analyzi
7、ngtheeffectofdifferentconcentrationofIPTGanddifferenttimeonexpressionproduct，andconfirmedthebestinducedconcentrationofIPTGandtime．ExperimentalresultsindicatedthatwhentheconcentrationofIPTGincreased，theproductshavenotincreased，andwiththetimepasttheproductsincreased．Theult
8、imaconcentrationofIPTGwas3mmol／Landtimewas9h，whichisbetterconditionwheninducedVPlprotein．Keywords：FMDVt
