麻疹病毒N蛋白原核表達(dá)純化條件的優(yōu)化.pdf

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1、第28卷第6期鄭州輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)Vo1．28No．62013年l2月JOURNALOFZHENGZHOUUNIVERSITYOFLIGHTINDUSTRY(NaturalScience)Dec．20l3文章編號(hào)：2095—476X(2013)06—0032—03麻疹病毒N蛋白原核表達(dá)’純化條件的優(yōu)化侯丹丹，王云龍，張怡青，孫新城，李玉林。，米海。，王繼創(chuàng)，程蕾(1．河南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，河南新鄉(xiāng)453007；2．鄭州輕工業(yè)學(xué)院食品與生物工程學(xué)院，河南鄭州450001；3．河南省生物工程技術(shù)研究中心，河南鄭J,I1450001)摘要：通過(guò)構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒，誘導(dǎo)表達(dá)

2、純化麻疹病毒N蛋白．將麻疹病毒N蛋白基因片段與載體pET一32a(+)相連接，通過(guò)PCR方法擴(kuò)增獲得重組質(zhì)粒pET一32a(+)／N，然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌E．coliBI21(DE3)內(nèi)，并優(yōu)化誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)間、溫度、誘導(dǎo)劑濃度等條件．SDS—PAGE和West．ernblot蛋白印跡檢測(cè)表明，麻疹病毒N蛋白分子質(zhì)量約為60kD，表達(dá)產(chǎn)物用Ni—NTA親和層析和DEAE純化后，純度達(dá)90％．關(guān)鍵詞：麻疹病毒；核殼蛋白；原核表達(dá)；蛋白純化中圖分類號(hào)：Q786．4文獻(xiàn)標(biāo)志碼：ADOI：10．3969／j．issn．2095—476X．2013．06．008Optimizationo

3、fmeaslesvirusNproteinSprokaryoticexpressionandpurificationHOUDan—dan，WANGYun—long，ZHANGYi．qing，SUNXin．cheng，LIYu—lin，MIHai，WANGji．chuang，CHENGLei。(1．ColldgeofLifeScience，HelzanNormalUniversity，Xinxiang453007，China；2．CollegeofFoodandBioengineering，ZhengzhouUnive~ityofLightIndustry，Zhengzhou450

4、001，China；3．Hei?~tnBiotechnologyResearchCenter，Zhengzhou450001，China)Abstract：Inordertoconstructarecombinantexpressionplasmidwhichinducedexpresspurificationmea．slesvirus(MV)Nprotein，therecombinantplamisedofpET一32a(+)／NamplifiedbyPCRfromMVNproteingeneswasinsertedintoexpressionvectorpET一32a(+)，

5、thenitwastransformedintoE．coliBL21(DE3)．Theconditionoftime，temperatureandconcentrationofIPTGwereoptimized．TheresultsofSDS．PAGEandWesterublottestsshowedthatMVNproteinmolecularwas60kD．TheproteinSpuritywas90％afterbeingpurifiedbyNi．NTAandDEAE．Keywords：measlesvirus；Nprotein；prokaryoticexpression；p

6、roteinpurification收稿日期：2013—04～12作者簡(jiǎn)介：侯丹丹(1985一)，女，河南省許昌市人，河南師范大學(xué)碩士研究生，主要研究方向?yàn)槲⑸锿ㄐ抛髡撸和踉讫?1962一)，男，河南省洛陽(yáng)市人，河南師范大學(xué)教授，主要研究方向?yàn)樯镏扑帲?期侯丹丹，等：麻疹病毒N蛋白原核表達(dá)純化條件的優(yōu)化·33·物，0．2ixL；DNA聚合酶，0．3L；模板，0．5L；dd0引言H0，4IxL)擴(kuò)增目的基因片段，擴(kuò)增產(chǎn)物與pET一麻疹是一種高度傳染的呼吸道疾病，具有典型32a(+)載體經(jīng)BamHI，XhoI雙酶切后，由T4的臨床癥狀，包括斑丘疹、發(fā)熱、咳嗽、鼻炎和結(jié)膜DNA連

7、接酶連接雙酶切產(chǎn)物而構(gòu)建重組質(zhì)粒炎．麻疹病毒是麻疹的病原體，分類上屬于副黏病pET一32a(+)／N；2)將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞大腸桿毒科麻疹病毒屬．麻疹病毒可以劃分為8個(gè)基因組菌中，接種于lmLLB液體培養(yǎng)基中，37cC搖床培(A—H)，21個(gè)基因型，核殼蛋白(N蛋白)是麻疹病養(yǎng)1h，然后取菌液5OL轉(zhuǎn)接于3．5mLLB(含毒的主要抗原，可產(chǎn)生中和(Nt)抗體．在研究基因Amp30mg／mL)液體培養(yǎng)基中，培養(yǎng)至OD6oo約為工程麻疹疫苗中，N蛋白基因是首選的病毒抗原J，0．3～0