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1、第28卷第6期鄭州輕工業(yè)學(xué)院學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版)Vo1.28No.62013年l2月JOURNALOFZHENGZHOUUNIVERSITYOFLIGHTINDUSTRY(NaturalScience)Dec.20l3文章編號(hào):2095—476X(2013)06—0032—03麻疹病毒N蛋白原核表達(dá)’純化條件的優(yōu)化侯丹丹,王云龍,張怡青,孫新城,李玉林。,米海。,王繼創(chuàng),程蕾(1.河南師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院,河南新鄉(xiāng)453007;2.鄭州輕工業(yè)學(xué)院食品與生物工程學(xué)院,河南鄭州450001;3.河南省生物工程技術(shù)研究中心,河南鄭J,I1450001)摘要:通過(guò)構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒,誘導(dǎo)表達(dá)
2、純化麻疹病毒N蛋白.將麻疹病毒N蛋白基因片段與載體pET一32a(+)相連接,通過(guò)PCR方法擴(kuò)增獲得重組質(zhì)粒pET一32a(+)/N,然后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)入大腸桿菌E.coliBI21(DE3)內(nèi),并優(yōu)化誘導(dǎo)表達(dá)時(shí)間、溫度、誘導(dǎo)劑濃度等條件.SDS—PAGE和West.ernblot蛋白印跡檢測(cè)表明,麻疹病毒N蛋白分子質(zhì)量約為60kD,表達(dá)產(chǎn)物用Ni—NTA親和層析和DEAE純化后,純度達(dá)90%.關(guān)鍵詞:麻疹病毒;核殼蛋白;原核表達(dá);蛋白純化中圖分類號(hào):Q786.4文獻(xiàn)標(biāo)志碼:ADOI:10.3969/j.issn.2095—476X.2013.06.008Optimizationo
3、fmeaslesvirusNproteinSprokaryoticexpressionandpurificationHOUDan—dan,WANGYun—long,ZHANGYi.qing,SUNXin.cheng,LIYu—lin,MIHai,WANGji.chuang,CHENGLei。(1.ColldgeofLifeScience,HelzanNormalUniversity,Xinxiang453007,China;2.CollegeofFoodandBioengineering,ZhengzhouUnive~ityofLightIndustry,Zhengzhou450
4、001,China;3.Hei?~tnBiotechnologyResearchCenter,Zhengzhou450001,China)Abstract:Inordertoconstructarecombinantexpressionplasmidwhichinducedexpresspurificationmea.slesvirus(MV)Nprotein,therecombinantplamisedofpET一32a(+)/NamplifiedbyPCRfromMVNproteingeneswasinsertedintoexpressionvectorpET一32a(+),
5、thenitwastransformedintoE.coliBL21(DE3).Theconditionoftime,temperatureandconcentrationofIPTGwereoptimized.TheresultsofSDS.PAGEandWesterublottestsshowedthatMVNproteinmolecularwas60kD.TheproteinSpuritywas90%afterbeingpurifiedbyNi.NTAandDEAE.Keywords:measlesvirus;Nprotein;prokaryoticexpression;p
6、roteinpurification收稿日期:2013—04~12作者簡(jiǎn)介:侯丹丹(1985一),女,河南省許昌市人,河南師范大學(xué)碩士研究生,主要研究方向?yàn)槲⑸锿ㄐ抛髡撸和踉讫?1962一),男,河南省洛陽(yáng)市人,河南師范大學(xué)教授,主要研究方向?yàn)樯镏扑帲?期侯丹丹,等:麻疹病毒N蛋白原核表達(dá)純化條件的優(yōu)化·33·物,0.2ixL;DNA聚合酶,0.3L;模板,0.5L;dd0引言H0,4IxL)擴(kuò)增目的基因片段,擴(kuò)增產(chǎn)物與pET一麻疹是一種高度傳染的呼吸道疾病,具有典型32a(+)載體經(jīng)BamHI,XhoI雙酶切后,由T4的臨床癥狀,包括斑丘疹、發(fā)熱、咳嗽、鼻炎和結(jié)膜DNA連
7、接酶連接雙酶切產(chǎn)物而構(gòu)建重組質(zhì)粒炎.麻疹病毒是麻疹的病原體,分類上屬于副黏病pET一32a(+)/N;2)將質(zhì)粒轉(zhuǎn)入宿主細(xì)胞大腸桿毒科麻疹病毒屬.麻疹病毒可以劃分為8個(gè)基因組菌中,接種于lmLLB液體培養(yǎng)基中,37cC搖床培(A—H),21個(gè)基因型,核殼蛋白(N蛋白)是麻疹病養(yǎng)1h,然后取菌液5OL轉(zhuǎn)接于3.5mLLB(含毒的主要抗原,可產(chǎn)生中和(Nt)抗體.在研究基因Amp30mg/mL)液體培養(yǎng)基中,培養(yǎng)至OD6oo約為工程麻疹疫苗中,N蛋白基因是首選的病毒抗原J,0.3~0