鹽度脅迫下尼羅羅非魚鰓離子細胞和na+-k+-atpasea1的滲透調(diào)節(jié)

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1、學(xué)校代碼：10264研究生學(xué)號：M100107291上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文題目：鹽度脅迫下尼羅羅非魚鰓離子細胞和++Na-K-ATPasea1的滲透調(diào)節(jié)英文題目：Osmoregulationofionocytesand++Na-K-ATPasea1ingillofO.niloticusundersalinitiesstress專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖研究領(lǐng)域：水產(chǎn)動物遺傳育種姓名：莊青青指導(dǎo)教師：趙金良教授二O一三年三月二十七日1上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文上海海洋大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴謹學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨立進行研究工作所取得的

2、成果。除文中已經(jīng)明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對所寫的內(nèi)容負責(zé)，并完全意識到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：日期：年月日上海海洋大學(xué)學(xué)位論文版權(quán)使用授權(quán)書學(xué)位論文作者完全了解學(xué)校有關(guān)保留、使用學(xué)位論文的規(guī)定，同意學(xué)校保留并向國家有關(guān)部門或機構(gòu)送交論文的復(fù)印件和電子版，允許論文被查閱或借閱。本人授權(quán)上海海洋大學(xué)可以將本學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進行檢索，可以采用影印、縮印或掃描等復(fù)制手段保存和匯編本學(xué)位論文。保密□，在年解密后適用本版權(quán)書。本學(xué)位論文屬于不保密□學(xué)位論文作者簽名：指導(dǎo)教師

3、簽名：日期：年月日日期：年月日2上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文答辯委員會成員名單姓名工作單位職稱備注來琦芳中國水科院東海水產(chǎn)研究所研究員主席崔映宇同濟大學(xué)副教授委員王成輝上海海洋大學(xué)教授委員趙金良上海海洋大學(xué)教授委員唐首杰上海海洋大學(xué)講師秘書地點水產(chǎn)與生命學(xué)院C217時間2013.05.273++鹽度脅迫下尼羅羅非魚鰓離子細胞和Na-K-ATPasea1的滲透調(diào)節(jié)摘要鰓是魚類進行離子交換的主要滲透調(diào)節(jié)器官，鰓上皮中含有的大量離子細胞(也稱線粒體豐富細胞、氯細胞)是離子分泌和吸收的主要場所。離子細胞膜上的+++++Na-K-ATP酶(Na-K-ATPase，NKA)也稱為Na

4、泵，是一種普遍存在的跨膜蛋+白，是離子轉(zhuǎn)運的關(guān)鍵酶之一，可通過水解一分子ATP主動地將3Na運出膜外+和將2K運進膜內(nèi)。NKA通過提供其他離子運輸系統(tǒng)的動力來維持跨膜穩(wěn)態(tài)。尼羅羅非魚(Oreochromisniloticus)為廣鹽性養(yǎng)殖魚類，本研究通過開展尼羅羅非魚從淡水轉(zhuǎn)入到不同鹽度的咸水環(huán)境中脅迫實驗，分析生化水平（NKA酶活）、分子水平（NKA轉(zhuǎn)錄水平）、生理水平（血清滲透壓和離子）和細胞水平（鰓離子細胞類型、數(shù)目、位置）變化情況，系統(tǒng)闡述尼羅羅非魚鰓離子細胞和++Na-K-ATPase應(yīng)對環(huán)境鹽度變化的滲透調(diào)節(jié)，為開展半咸水養(yǎng)殖魚類品種馴化和選育工作提供基礎(chǔ)資料和依據(jù)。本研究首先利

5、用掃描電鏡和免疫組化技術(shù)，研究了尼羅羅非魚鰓中離子細胞的分布，及其不同鹽度(0、10、20、30)脅迫對離子細胞數(shù)目和形態(tài)變化的影響。掃描電鏡結(jié)果表明，離子細胞分布在鰓絲的鰓小片基部，根據(jù)其表面開口長度，可分為Ⅰ型（＞6.5μm）、Ⅱ型（3.2～6.5μm）和Ⅲ型（＜3.2μm）3種亞型；不同鹽度下離子細胞總數(shù)目變化趨勢為：鹽度10＜鹽度20＜鹽度0＜鹽度30；從鹽度0轉(zhuǎn)移到鹽度10后，離子細胞總數(shù)目減少，Ⅰ型離子細胞數(shù)目顯著下降；鹽度20中的離子細胞數(shù)量高于鹽度10，但不顯著；鹽度30中的離子細胞總數(shù)隨Ⅲ型離子細胞數(shù)量的提高而顯著增加。免疫組織化學(xué)進一步證實了不同鹽度條++件下Na-K-A

6、TPase免疫反應(yīng)陽性細胞均分布在鰓絲的鰓小片基部。掃描電鏡和免疫組化技術(shù)結(jié)果表明，尼羅羅非魚可通過改變鰓離子細胞數(shù)量和形態(tài)結(jié)構(gòu)來適應(yīng)環(huán)境中的鹽度變化，推測Ⅰ型和Ⅲ型離子細胞分別在低鹽、高鹽適應(yīng)中起著重要作用。為進一步揭示尼羅羅非魚鰓的滲透調(diào)節(jié)機理，分別設(shè)置了兩種不同的鹽度脅I上海海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文迫實驗，實驗組A（鹽度0→7.5→15→20→25）和實驗組B（鹽度+-+0→7.5→15→7.5→0），檢測其血清滲透壓、血清離子（Na、Cl、K）濃度與鹽++度變化關(guān)系，以及鰓Na-K-ATPase（NKA）酶活活性與NKAa1mRNA表達水平變化與鹽度變化關(guān)系。結(jié)果表明，實驗組A中，血清滲

7、透壓水平隨環(huán)境鹽度+-的增加顯著增加，呈正相關(guān)關(guān)系；血清Na、Cl濃度隨著鹽度增加而升高，血清+K濃度先隨著鹽度（7.5，15）上升顯著，但在20和25鹽度中顯著下降；鰓NKA酶活活性及NKAa1mRNA表達水平也隨著鹽度的增加呈上升趨勢。實驗組B+-+中，從0鹽度轉(zhuǎn)移至15鹽度中，血清滲透壓、血清Na、Cl、K濃度、NKAa1mRNA表達水平及酶活力均呈現(xiàn)出顯著上升趨勢；從15鹽度轉(zhuǎn)移至0鹽度時，各指標(biāo)均呈