rna干擾抑制rpa70表達對食管癌細胞放射敏感性影響的體外實驗研究

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1、徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文RNA干擾抑制RPA70表達對食管癌細胞放射敏感性影響的體外實驗研究姓名：王洵申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：腫瘤學(xué)指導(dǎo)教師：顧玉明2012-05徐州醫(yī)學(xué)院碩士學(xué)位論文RNA干擾抑制砌陵70表達對食管癌細胞放射敏感性影響的體外實驗研究中文摘要目的觀察砌)A70的mIⅢA及其蛋白在食管癌TE．1細胞中的表達情況；觀察m)A70基因特異性反義寡核苷酸(AS．砒)A．70)對食管癌TE．1細胞中RPA70的mRNA及其蛋白表達的影響；探討特異性阻斷對狻70基因表達后聯(lián)合不同劑量的X線照射對食管癌TE．1細胞增殖、凋亡的影響。方法使用食管癌TE．1

2、細胞株，利用RT-PCR和免疫組化法分別檢測該細胞中Ⅺ狻70的mRNA及其蛋白的表達情況；使用脂質(zhì)體2000介導(dǎo)，采用瞬時轉(zhuǎn)染法轉(zhuǎn)染砒)A70特異性反義寡核苷酸(AS．對)A．70)及陰性對照寡核苷酸于食管癌TE．1細胞中，設(shè)實驗組(砌)A70基因特異性反義寡核苷酸)、陰性對照組(陰性對照寡核苷酸)、Mock組(加入轉(zhuǎn)染試劑脂質(zhì)體2000)及空白對照組(只加入無血清培養(yǎng)基Opti．MEM)，在24、48、72、96小時四個轉(zhuǎn)染時間點進行觀察：使用ImPCR、實時熒光定量PCR(qRT-PCR)和WeStemBlot法分別檢測各組、各時間段食管癌TE．1細

3、胞中尉)A70的mRNA及其蛋白的表達情況；用CCK．8法、流式細胞儀分別檢測AS．Ⅺ'A．70轉(zhuǎn)染后96h聯(lián)合輻射對食管癌TE．1細胞增殖和凋亡的影響。結(jié)果Ⅺ狻70的mRNA及其蛋白在食管癌TE．1細胞中均有表達；RT-PCR、qImPCR法結(jié)果表明實驗組轉(zhuǎn)染后砒後70的mI礬A含量在72h達到最低，Wbstemblot法結(jié)果表明實驗組轉(zhuǎn)染后雕)A70的蛋白表達在96h達到最低，其他各對照組轉(zhuǎn)染后剛)A70的mRNA及其蛋白含量無明顯改變；細胞增殖及凋亡分析結(jié)果示AS．砌)A．70轉(zhuǎn)染后96h聯(lián)合放射可明顯抑制食管癌TE．1細胞的增殖、誘導(dǎo)其凋亡，實驗

4、組的細胞抑制率和凋亡率明顯高于各對照組。(P

5、ractObjectiVeToobservemeexpressionof砌)A70mRNAandproteininesophageaJcarcinomaTE-1cell；ToobserVetheinnuenceofRPA70gene．specific觚tisenseoligonucleotides(AS-RPA一70)tot11e船～70mRNAandproteinexpressioninesophagealcarCinomaTE·1cell；ToinVestigate恤pr01iferationandapoptosisoftheSpeci6cinlli

6、bitorofRPA70geneexpressioncombinedwimdi伍玳mdosesofX—rayirradiationt0esophagealcarcinomaTE一1cell．MethodsImPCRa11dimmunohistochemist巧w(粕usedtodetectthet11e砌)A70mRNAa11dproteinexpressioninesophagealcarcinomaTB·1cell．AntisenseoligonuleotidesofRFIA70，mediatedbyLipofectamineTlⅥ2000，、ver

7、etransfectedtoesophagealcarcinomaTE-1cell．Fourgroupswerestudied：鋤tisensetraIlsfectedgroup，negativecontrol，mockgroup(onlyLipofect鋤ineTM2000)，blankcon臼的lgroupand24h、48h、72h、96hfourtransfectiontimeslots．ExpressionlevelsofRPA70mIⅢAinTE-lofeachgroupsweredetenllinedbyR1、．PCRaIldquantit

8、ativerealtimePCR(qR-T-PCIU，R】)A70protein