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1、中國海洋大學(xué)碩士學(xué)位論文扇貝養(yǎng)殖海區(qū)真核浮游生物多樣性的研究姓名：吳寅嵩申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：水產(chǎn)養(yǎng)殖指導(dǎo)教師：李赟201206扇貝養(yǎng)殖海區(qū)真核浮游生物多樣性的研究摘要櫛孔扇貝(C矗腸，緲．加腫一)是我國重要的海水養(yǎng)殖經(jīng)濟(jì)貝類，曾給我國北方水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)帶來巨大的經(jīng)濟(jì)效益。自上世紀(jì)90年代，我國北方扇貝養(yǎng)殖海區(qū)連年暴發(fā)嚴(yán)重的櫛孔扇貝大規(guī)模死亡，經(jīng)濟(jì)損失巨大。已有的研究證明，造成扇貝夏季大規(guī)模死亡的病因是扇貝急性壞死癥(A、咐D)，其病原為一種球形皰疹病毒——A、仆Ⅳ。已有的研究表明，海區(qū)中的浮游生物能攜帶㈣，不同浮游生物的攜帶能力存在區(qū)別。為了明確養(yǎng)殖海區(qū)攜帶越仆Ⅳ
2、的主要浮游生物，有必要首先對養(yǎng)殖海區(qū)浮游生物的季節(jié)性變化進(jìn)行分析，了解在㈣，流行傳播的關(guān)鍵時(shí)期海區(qū)浮游生物的主要種類，從而為確定與刪流行有關(guān)的浮游生物提供參考。為了掌握櫛孔扇貝養(yǎng)殖海區(qū)真核浮游生物多樣性的情況及其變化，建立適合的研究方法。本研究首先采用PCR．DGGE技術(shù)分析了2009年6月到2010年6月期間采自青島流清河灣扇貝養(yǎng)殖海區(qū)的9個(gè)海水樣品中微型真核浮游生物的多樣性。依據(jù)l8SrDNA可變區(qū)序列的DGGE分析結(jié)果顯示，流清河灣扇貝養(yǎng)殖海區(qū)微型真核浮游生物包括甲藻、纖毛蟲、眼蟲、定鞭藻、硅藻、盤蜷蟲、隱藻、領(lǐng)鞭毛蟲、變形蟲和CeKozo鋤，其中甲藻類和纖
3、毛類生物的最高豐度分別達(dá)4l％和38．2％，是該海區(qū)的優(yōu)勢種類。對各月份DGGE譜帶聚類分析結(jié)果表明，2009年6、7、8、9月份微型浮游生物群落組成較為相似。此外，發(fā)現(xiàn)中肋骨條藻在扇貝發(fā)病前后均有分布，結(jié)合A：Ⅵ小，已有的研究結(jié)果，本研究認(rèn)為中肋骨條藻是A、mV水平傳播的參與者之一，但海區(qū)中廣泛分布的甲藻和纖毛蟲與A、NV傳播的聯(lián)系還有必要進(jìn)一步研究。為了掌握榮成桑溝灣真核浮游生物多樣性的情況，建立適合的研究方法。本研究通過構(gòu)建克隆文庫和PCR．RFLP技術(shù)對2010年9月24日采自榮成桑溝灣扇貝養(yǎng)殖海區(qū)表層的水樣中真核浮游生物多樣性進(jìn)行了分析。海水樣品依次經(jīng)2
4、5¨m，3um，0．22¨m濾膜過濾分別收集超微型真核浮游生物和微型真核浮游生物，提取基因組DNA，依據(jù)18SrDNA可變區(qū)序列構(gòu)建克隆文庫，對陽性克隆子進(jìn)行PCR—RFLP檢測，并且測序。研究結(jié)果表明，桑溝灣扇貝養(yǎng)殖海區(qū)超微型真核浮游生物包括Telonemia、褐藻門(Ochroph”a)、Myzozoa、Haptophyta、扇貝養(yǎng)殖海區(qū)真核浮游生物多樣性的研究隱藻門(Cr)，ptista)、纖毛門(Ciliophora)、領(lǐng)鞭蟲門(Choal】ozoa)、綠藻門(Chloroph”a)、Cercozoa、opalozoa、盤蜷門(Labl=抽thulomyc
5、ota)和Katablepharidoph”a的各類浮游生物。微型浮游生物包括Telonemia、褐藻門(Ochroph”a)、Haptoph”a、隱藻門(Cryptista)、纖毛門(Ciliophora)、綠藻門(Chlorophyta)、領(lǐng)鞭蟲門(Choanozoa)和Cercozoa的各類浮游生物。無論是超微型還是微型真核浮游生物中，褐藻門(0chroph”a)、纖毛門(Ciliophora)和綠藻門(Clllorophyta)都是主要的類群，這些物種在扇貝養(yǎng)殖海區(qū)中具有不同的功能，既有扇貝的餌料生物，也有赤潮生物。中肋骨條藻在該海區(qū)微型真核浮游生物群落中
6、被發(fā)現(xiàn)，是已被證明的可以攜帶AⅥW的浮游微藻。為了了解青島流清河灣和榮成桑溝灣超微型真核浮游生物的多樣性，比較超微型真核浮游生物群落的周年變化。本研究采用DGGE技術(shù)對2010年5月到2011年4月問采自兩個(gè)扇貝養(yǎng)殖海區(qū)表層的海水進(jìn)行分析。研究結(jié)果表明，桑溝灣扇貝養(yǎng)殖海區(qū)超微型真核浮游生物多樣性高于流清河灣。對兩個(gè)海區(qū)各月份的DGGE圖譜進(jìn)行聚類分析，結(jié)果表明桑溝灣扇貝養(yǎng)殖海區(qū)超微型真核浮游生物群落，除夏季以外，其群落較為穩(wěn)定。青島流清河扇貝養(yǎng)殖海區(qū)不同月份的超微型真核浮游生物群落變化較大，相似性較低。本研究說明桑溝灣扇貝養(yǎng)殖海區(qū)生態(tài)條件較穩(wěn)定。關(guān)鍵詞：櫛孔扇貝；
7、真核浮游生物；DGGE；克隆文庫：PCR．IⅫLP；扇貝養(yǎng)殖海區(qū)真核浮游生物多樣性的研究StlldyofDiVe瑋i哪ofEul【a刪cplanktonintheSeaA他aforSc枷opCultllreAbstl隱ctThescallop，C辦j口M聲．加，．陀，．f，isusedtobeoneofmem面orspeciescultlJred．mNorthCllina．However，thegreatexpansionandintensificationhaveinducedt11eoccurrenceofdiseasesillce1997wllichcaus
8、eappa
