黃芩苷酸解制備黃芩素純化分離工藝的研究

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1、第3章黃芩苷酸解制備黃芩素純化分離工藝的研究3.1引言黃芩素（Baicalein）：又名黃芩苷元，黃芩元，黃芩黃素，5，6，7-三羥基黃酮。其分子式為，分子量為270.24，結(jié)構(gòu)如下圖所示：純黃芩素為黃色棱柱狀結(jié)晶(由乙醇中)。溶于乙醇、甲醇、乙醚、丙酮、醋酸乙酯、熱冰醋酸，微溶于氯仿和硝基苯，幾乎不溶于水，溶于稀氫氧化鈉呈綠棕色，濃硫酸中呈黃色并顯綠色熒光。存在于唇形科植物黃芩(ScutellariabaicalensisGeorgi)的根、紫葳科植物木蝴蝶[Oroxylumindicum(L.)Vent.]的種子、莖皮中，也可化學合成。3.2實驗材料、儀器、藥品3.2.1實驗原料從

2、黃芩根中提取得到的黃芩苷作為原料。3.2.2實驗所需的試劑試劑生產(chǎn)廠家黃芩素標準品（>98%）阿拉丁試劑（中國）有限公司無水乙醇（分析純）天津市大茂化學試劑廠甲醇（分析純）天津市凱通化工有限公司硫酸山東萊陽市雙雙化工有限公司乙酸乙酯天津市凱通化工有限公司氯仿天津市凱通化工有限公司乙醚天津市凱通化工有限公司3.2.3實驗儀器儀器及設備型號生產(chǎn)廠家數(shù)顯恒溫水浴鍋HH-2國華電器有限公司旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀RE-3000A上海亞榮生化儀器廠數(shù)控超聲波清洗器KQ5200DE昆山市超聲儀器有限公司三用紫外燈UV-Ⅱ北京智源通生物技術(shù)研究所紫外分光光度計U-2001日本日立公司循環(huán)水式多用真空泵SHZ-D(

3、Ⅲ)天津華鑫儀器廠電熱恒溫鼓風干燥箱DHG-9053A上海市實驗儀器總廠高效液相色譜分析儀Surveyor美國Finnigan托盤天平HC-TP11-1O上海清科天平電子天平AL204梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司常規(guī)玻璃儀器3.3實驗方法3.3試驗方案首先以中藥黃芩根部為原料提取黃酮類化合物，經(jīng)乙醇水溶液熱回流得黃酮類化合物提取液，再用酸沉堿溶法純化出黃芩苷，再分別用水，５０％，９５％的乙醇洗滌得高純度黃芩苷；將黃芩苷酸水解得黃芩素，分別探討不同條件下的酸解效果并分析得出最佳酸解工藝條件，用不同極性的溶劑萃取得高純度黃芩素。3.４可行性分析實驗所用到的黃芩原料及各環(huán)節(jié)的藥品已儲備

4、，而且各種相應儀器設備（包括數(shù)顯水浴鍋、油浴鍋、真空循環(huán)水泵等）和技術(shù)條件均已具備。本研究通過乙醇熱回流提取總黃酮，酸沉堿溶法分離純化，方法簡單，乙醇易于回收再利用，易于實現(xiàn)工業(yè)化。從黃芩根部提取黃芩苷酸水解制備黃芩素，并對黃芩素進行純化。綜上，通過對大量文獻的查閱，并借助于實驗室已具備的設備，完成本實驗的每一個過程，最終的目標是能夠?qū)崿F(xiàn)的，本實驗方案是可行的。3.3.1黃芩苷酸解基本原理利用黃芩素與黃芩苷結(jié)構(gòu)相似的特點及黃芩苷在強酸、加熱條件下不穩(wěn)定易水解生成黃芩素和葡萄糖醛酸的性質(zhì)進行反應。圖3.1、黃芩苷酸解制備黃芩素的反應式3.3.2黃芩素提取純化分離的工藝流程圖準確稱取一定質(zhì)

5、量的黃芩苷，并按一定的固液比加入酸，乙醇，去離子水，在水浴鍋中設定好反應時間和溫度加熱回流。用薄層色譜（TLC）跟蹤反應進程（展開劑為：乙酸乙酯/丁酮/乙酸/水=10/7/5/3,體積比），待反應完成后將反應液傾入一定體積的去離子水中，有淺黃色析絮狀沉淀出，靜置若干小時后，減壓抽濾，取濾餅，用蒸餾水洗至中性，干燥，即得到黃芩素粗品。本實驗采用無毒，價廉的溶液作為反應物及催化劑，首先通過單因素實驗考察各因素對總黃酮含量的影響，然后采用正交試驗進行工藝優(yōu)化，確定最佳的工藝參數(shù)。其次在選用一定的有機溶劑對得到的黃芩素粗品進行萃取純化，得到純度較高的黃芩素，其工藝流程圖如圖3.1所示。薄層色譜

6、跟蹤乙醇水溶液+酸黃芩苷析出黃色沉淀反應液傾入去離子水減壓濃縮靜置去離子水洗至中性干燥黃芩素粗品圖3.1黃芩苷酸解制備黃芩素工藝流程圖3.3.3.黃芩素總黃酮含量的測定及計算以黃芩素標準品為對照，采用采用紫外/可見分光光度計測定黃芩素中的總黃酮含量。將反應得到的黃芩素粗品精密稱取1.0mg，用甲醇溶解并定容至50ml的容量瓶中，加甲醇至刻度即得，在吸收波長272nm條件下測定吸光度。根據(jù)下列公式計算總黃酮得率：總黃酮得率=（浸膏質(zhì)量×總黃酮含量）/原料質(zhì)量×100%3.3.4黃芩素的分析方法3.3.4.1定性分析試驗中采用薄層層析（TLC）法對黃芩苷進行定性鑒定，其方法為將標準品及樣品

7、配成合適濃度的甲醇液，用點樣毛細管點樣，點3~4次，保證點樣斑點直徑不大于2mm。將點樣好的硅膠板下端浸入展開劑中上行展開。展層完畢后，取出硅膠板晾干，在三用紫外燈下觀察對比顯色及展開情況。3.3.4.2定量分析3.1測定波長的確定準確取黃芩素標準品0.1mg加甲醇溶解，稀釋至50ml容量瓶中，置于紫外/可見分光光度儀中，在200~600nm掃描，繪制紫外吸收光譜，其中max=262nm、335nm分別為黃酮的吸收峰。黃芩素在272nm處有最大