發(fā)菜論文：發(fā)菜 海藻糖 麥芽寡糖基海藻糖水解酶 脅迫

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1、發(fā)菜論文：發(fā)菜中麥芽寡糖基海藻糖水解酶基因的克隆及其在脅迫條件下的響應(yīng)【中文摘要】發(fā)菜是一種極端環(huán)境下生長(zhǎng)的陸生藍(lán)藻,對(duì)逆境具有極強(qiáng)的適應(yīng)力,因此是抗逆性研究中一種典型的植物資源,對(duì)其抗逆性研究具有重要的意義。目前人們對(duì)發(fā)菜適應(yīng)極端環(huán)境的研究已經(jīng)受到人們的廣泛關(guān)注,但是還沒(méi)有突破性的進(jìn)展。本研究以發(fā)菜這一具有很強(qiáng)抗逆性的絲狀藍(lán)藻作為研究材料,應(yīng)用基因工程技術(shù),從發(fā)菜中克隆得到合成海藻糖途徑的一個(gè)重要酶:麥芽寡糖基海藻糖水解酶MTH,轉(zhuǎn)入大腸桿菌中進(jìn)行重組表達(dá),并對(duì)蛋白進(jìn)行了純化和酶活測(cè)定。同時(shí),通過(guò)干旱和鹽脅迫發(fā)菜,檢測(cè)其N(xiāo)fMTS和

2、NfMTH酶的表達(dá)量及相同條件下海藻糖和蔗糖的含量情況。得到以下結(jié)果和結(jié)論:通過(guò)設(shè)計(jì)簡(jiǎn)并引物,從發(fā)菜(Nostocflaglliforme)中克隆出MTH的基因TreZ,對(duì)該基因序列測(cè)序表明開(kāi)讀框全長(zhǎng)1848bp,編碼的蛋白質(zhì)有615個(gè)氨基酸。生物信息學(xué)分析得到該基因編碼的氨基酸序列包含四個(gè)麥芽寡糖基海藻糖水解酶的高度保守區(qū)域。將該基因在大腸桿菌中進(jìn)行表達(dá),通過(guò)SDS-PAGE檢測(cè)到在0.5mMIPTG誘導(dǎo)條件下該基因在大腸桿菌中有很高的表達(dá)量,分子質(zhì)量約為70kD。所得的重組蛋白經(jīng)過(guò)純化后,用麥芽六糖作為底物進(jìn)行酶活反應(yīng),能水解麥芽

3、...【英文摘要】NostocflaglliformewhichdistributedinwestandnorthwestofChinawidelyisoneofvaluableterrigenouscyanobacterias.Its’livingenvioromentisextremelyatrocious.AgenomicDNAfragmentencodingaputativemaltooligosyltrehalosetrehalohydrolase(NfMTH)fortrehalosebiosynthesiswasclone

4、dbythedegenerateprimer-PCRfromcyanobacteriumNostocflagelliforme.TheORFofNfMTHis1,848bpinlengthandencodes615aminoacidresiduesconstitutinga70kDaprotein.Thededucedaminoacidsequenc...【關(guān)鍵詞】發(fā)菜海藻糖麥芽寡糖基海藻糖水解酶脅迫【英文關(guān)鍵詞】NostocFlagelliformeTrehaloseMaltooligosyltrehalosetrehalohydr

5、olaseStress【索購(gòu)全文】聯(lián)系Q1：138113721Q2：139938848同時(shí)提供論文寫(xiě)作一對(duì)一輔導(dǎo)和論文發(fā)表服務(wù).保過(guò)包發(fā)【目錄】發(fā)菜中麥芽寡糖基海藻糖水解酶基因的克隆及其在脅迫條件下的響應(yīng)摘要6-8Abstract81.綜述11-261.1發(fā)菜的概述11-161.2海藻糖概述16-241.3發(fā)菜中海藻糖的研究24-251.4本論文的研究目的和意義25-262.材料與方法26-422.1材料26-282.2方法28-422.3技術(shù)路線423.結(jié)果與分析42-623.1發(fā)菜總DNA的提取42-433.2TreZ目的基因的克

6、隆43-453.3生物信息學(xué)分析45-513.4pET22b-TreZ基因載體的構(gòu)建51-523.5pET22b-TreZ在大腸桿菌中的表達(dá)和純化52-533.6pET22b-TreZ基因產(chǎn)物的酶活性測(cè)定53-543.7TreZ-main基因的克隆、表達(dá)及純化54-583.8脅迫條件下發(fā)菜中NfMTH表達(dá)量及海藻糖、蔗糖的測(cè)定58-624.討論62-655.總結(jié)65-666.展望66-677.參考文獻(xiàn)67-728.致謝72-739.攻讀學(xué)位期間的研究成果73