n6對(duì)脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡影響

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1、N6對(duì)脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響研究生：孫振彬?qū)I(yè)：外科學(xué)導(dǎo)師：趙廷寶教授中文摘要第一部分N6對(duì)脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究目的：研究N6(促神經(jīng)再生因子復(fù)合劑)對(duì)脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞凋亡的影響。方法采用Allen’S法經(jīng)NYU脊髓損傷撞擊器制作大鼠急性SCI模型，實(shí)驗(yàn)共分4組：假手術(shù)組(A組，只摘除椎板未損傷脊髓)，單純脊髓損傷組(B組)，脊髓損傷+生理鹽水治療組(C組)，脊髓損傷斗N6治療組(D組)。損傷后72h取材，采用HE染色對(duì)脊髓組織進(jìn)行標(biāo)記：免疫組化方法檢測(cè)CaSpaSe3蛋白的表達(dá)；逆轉(zhuǎn)錄．聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(R

2、T-PCR)檢測(cè)凋亡相關(guān)基因CaSpaLse3、Fas、Bax、Bcl2、P53mRNA在脊髓組織中的表達(dá)變化，Western．Blot檢測(cè)各組脊髓組織中凋亡相關(guān)蛋白Bcl2的表達(dá)變化。結(jié)果：免疫組化結(jié)果顯示A組Caspase3陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)很少；B組及C組CaspaSe3陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞數(shù)較A組明顯增加(P

3、Western-Blot結(jié)果示：A組Bcl2大量表達(dá)，B、C組明顯降低，D組較B、C組明顯升高，結(jié)果具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論：N6(促神經(jīng)再生因子復(fù)合劑)能明顯抑制脊髓損傷后神經(jīng)細(xì)胞的凋亡。關(guān)鍵詞：脊髓損傷，凋亡，N6(促神經(jīng)再生因子復(fù)合劑)，凋亡基因。第二部分N6抑制谷氨酸介導(dǎo)培養(yǎng)脊髓神經(jīng)元凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究目的：探討N6(促神經(jīng)再生因子復(fù)合劑)在谷氨酸介導(dǎo)的脊髓神經(jīng)元凋亡過(guò)程中所起的保護(hù)作用。方法：取妊娠13dWistar大鼠的胎鼠，分離出脊髓神經(jīng)細(xì)胞并進(jìn)行體外原代神經(jīng)元的純化培養(yǎng)，建立谷氨酸對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的損傷模型，觀察加用N6保護(hù)

4、后細(xì)胞形態(tài)的變化，用吖啶橙(A0)、溴化已啶(EB)、Hochest熒光染色法、Tunel法觀測(cè)凋亡細(xì)胞數(shù)量的變化，CCK8檢測(cè)細(xì)胞活性的變化；實(shí)驗(yàn)分為3組：對(duì)照組(C組)，谷氨酸損傷組(Glu組)，谷氨酸損傷+N6處理組(N6組)；每組4個(gè)平行皿，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。結(jié)果：C組凋亡細(xì)胞少見(jiàn)；Glu組凋亡細(xì)胞明顯增加，細(xì)胞活性明顯降低；N6組凋亡細(xì)胞數(shù)明顯減少，細(xì)胞活性明顯增加，結(jié)果均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0．05)。結(jié)論：促神經(jīng)再生因子復(fù)合劑N6可明顯抑制谷氨酸介導(dǎo)體外培養(yǎng)脊髓神經(jīng)元的凋亡。關(guān)鍵詞：脊髓損傷，細(xì)胞培養(yǎng)，凋亡，谷氨酸，促神經(jīng)

5、再生因子復(fù)合劑N6。2THEEFFECTOFN6oNCELLAPOPTOSISAFTERPartISPINALCORDINJURYPost-graduate：SunzhenbinSpecialty：Tutor：Surgerypro．ZhaotingbaoABSTRACTEFFECTOFN6oNCELLAPoPToSISAFTERSPINALCORDINJURYobjective：TostudytheeffectofN6(promotenerveregenerationfactors)onapoptosisofnervecellsa

6、fteracutespinalcordinjury．Methods：WeperformedtheacutespinalcordinjurywiththeNYUimpactorundertheAllen，Smethod．Theexperimentalanimalsweredivededintofourgroups，namelysham(A，onlyunderwentlaminectomywithoutweight-dropinjury)；SCIgrou(B)；SClwithNStreatedgroup(C)；SClwithN6一tr

7、eatedgroup(D)．Thespinalcordtissuesofthelesionepicenterweredissected72hoursafterinjury．Hematoxylinandeosin(HE)stainingwasusedtoshowthehistopathologicalchanges，andCaspase3waslabeledthroughimmuneohistochemistymethod；Theexpressionofapoptosis—relatedgeneCaspase3，F(xiàn)as，Bax，Bc

8、l2，P53WasmeasuredbyRT-PCR(reversetranscriptionpolymerasechainreaction)andtheexpressionofapoptosis—relatedBcl2withWestern—Blo