低氧預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠急性腎損傷修復(fù)能力的影響

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1、復(fù)旦大學(xué)碩士研究生畢業(yè)論文低氧預(yù)處理骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)大鼠急性腎損傷修復(fù)能力的影響Theeffectofhypoxicpreconditioningofbonemarrowderivedmesenchymalstemcellsonratacutekidneyinjury院系中山醫(yī)院專業(yè)內(nèi)科學(xué)(腎臟病學(xué))姓名劉紅指導(dǎo)教師滕杰副主任醫(yī)師指導(dǎo)小組俞小芳主治醫(yī)師丁小強(qiáng)主任醫(yī)師完成日期?2012年4月20曰本研究受國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目資助(項(xiàng)目編號(hào):81000307)目錄巾英文縮略詞對(duì)照表?1申熱要?2英讀要?5前言?8第一部分:大鼠骨髄間

2、充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)及低氧預(yù)處理模型的建立材辟方法?11縣?14討論?19楊?22參考文獻(xiàn)?23第二部分:低氧預(yù)處理對(duì)大鼠骨髗間充質(zhì)干細(xì)胞體外遷移能力的影響及其機(jī)制研究材媽方法?24結(jié)果?32討論?37循?39參考文獻(xiàn)?40第三部分:低氧預(yù)處理骨髄間充質(zhì)干細(xì)胞頸動(dòng)脈注射移植治療大鼠急性缺血性腎損傷的實(shí)驗(yàn)研究材購(gòu)_?42結(jié)果?45討論?50摘?53參考文獻(xiàn)?54全文鮮?56文獻(xiàn)綜述?57祿和致謝?682012年復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文中英文縮略詞對(duì)照表英文縮寫英文全稱中文全稱AKIacutekidneyinjury急性腎損傷APammon

3、iumpersulfete過硫酸銨BSAbovineserumalbumin牛血清白蛋白BMSCsbonemarrowmesenchymalstemcells骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞BUNBloodureanitrogen血清尿素氮CoCfccobaltdichtoride二氯化鈷CXCR4chemokinereceptor4趨化因子受體4DMEMDulbecco'smodifiedEeagle'smedium改進(jìn)的培養(yǎng)基DMSOdimethylsulfoxide二甲基亞砜FBSfetalbovineserum胎牛血清FCMflowcyt

4、ometer流式細(xì)胞儀GFPgreenfluorescentprotein綠色熒光蛋白HEHematoxylinEosin蘇木素-伊紅fflFhypoxia-induciblefactor低氧誘導(dǎo)因子HIF-lahypoxia-induciblefactor-1a低氧誘導(dǎo)因子-letHPhypoxicpreconditioning低氧預(yù)處理MRIMagneticResonanceImaging磁共振成像RNAiRNAinterferenceRNA干擾siRNAsmallinterferenceRNA小分子干擾RNAPCRPolym

5、erasechainreaction多聚酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)PEPhycoerythrin藻紅蛋白FITCFluoresceinisothiocyanate異硫氰酸熒光素I/Rischemiarepeffusion缺血/再灌注SPIONsuperaramagneticironoxidnanoparticle超順磁氧化鐵納米顆粒PLLPoly-L-Lysine多聚賴氨酸PHDprolinehydroxylation脯氨酸羥化酶2012年復(fù)旦大學(xué)碩士學(xué)位論文中文摘要第一部分大鼠骨髄間充質(zhì)干細(xì)胞分離培養(yǎng)及低氧預(yù)處理模型的建立目的:全骨髓細(xì)胞貼壁法

6、分離培養(yǎng)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(Bonemarrowmesenchymalstemcells,BMSCs),采用氯化鈷(CoCfe)建立化學(xué)低氧預(yù)處理BMSCs實(shí)驗(yàn)?zāi)P?。方法:釆用全骨髓?xì)胞貼壁法分離培養(yǎng)BMSCs,倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)及生長(zhǎng)過程,取第3-4代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。體外標(biāo)準(zhǔn)誘導(dǎo)下檢測(cè)此類細(xì)胞成脂、成骨等多向分化能力,并以流式細(xì)胞儀檢測(cè)其表面標(biāo)志物CD29、CD90、CD45。分別采用四甲基偶氮唑鹽(MTT)法和流式細(xì)胞儀,檢測(cè)不同CoCfc濃度(0、50、100、150、200、300、400、6(%mol/L)和不同培

7、養(yǎng)時(shí)間(Oh、6h、12h、24h、48h、72h)培養(yǎng)條件下BMSCs的增殖和凋亡情況,確立CoCl2化學(xué)低氧預(yù)處理BMSCs實(shí)驗(yàn)?zāi)P汀=Y(jié)果:1.原代細(xì)胞呈梭形或不規(guī)則形,貼壁集落生長(zhǎng),貼壁細(xì)胞經(jīng)3次傳代后,細(xì)胞大小及形態(tài)趨于一致,呈長(zhǎng)梭形、放射狀生長(zhǎng)。2.在標(biāo)準(zhǔn)成脂誘導(dǎo)條件下,油紅染色證實(shí)其可向脂肪細(xì)胞分化;在標(biāo)準(zhǔn)成骨誘導(dǎo)條件下,茜素紅染色證實(shí)其可向成骨細(xì)胞分化;流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面抗原,結(jié)果顯示CD29和CD90高表達(dá),CD45低表達(dá),符合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞免疫表型。3.細(xì)胞培養(yǎng)液中CoCfe終濃度不超過200nmol/L、

8、培養(yǎng)時(shí)間不超過24h對(duì)BMSCs的增殖和凋亡無明顯影響。結(jié)論:1.全骨髓細(xì)胞貼壁培養(yǎng)法可獲得較高純度的大鼠BMSCs,滿足體外實(shí)驗(yàn)要求。2.本研究最佳低氧預(yù)處理BMSCs實(shí)驗(yàn)?zāi)P蜑榧?xì)胞培養(yǎng)液CoCk終濃度200nmol/L>培養(yǎng)時(shí)間24h。關(guān)鍵詞:

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