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《?？寺∨甙l(fā)育相關(guān)基因啟動子區(qū)dna甲基化模式比較研究》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、華中農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文?？寺∨甙l(fā)育相關(guān)基因啟動子區(qū)DNA甲基化模式比較研究姓名：申艷麗申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：動物遺傳育種與繁殖指導(dǎo)教師：陳世林；楊利國201206牛克隆胚發(fā)育相關(guān)基因啟動子DNA甲基化模式比較研究摘要胚胎發(fā)育是精卵結(jié)合表觀重編程的過程，DNA甲基化是表觀重編程修飾的一種主要形式，參與細胞的多種生理活動。DNA甲基化可使參與胚胎發(fā)育的基因有序表達，維持胚胎的正常發(fā)育。牛是單胎動物，為提高牛的繁殖力，更多地采用體外培養(yǎng)的方式獲得牛早期胚胎，然后進行移植。但由于各種原因，體外胚易發(fā)生早期死亡，其成活率遠低于體內(nèi)胚，對畜牧業(yè)生產(chǎn)造成
2、一定的損失。目前已證實異常的DNA甲基化導(dǎo)致胚胎發(fā)育失敗，因此本文從早期胚胎死亡角度出發(fā)，采用亞硫酸氫鹽測序法，研究與牛早期胚胎發(fā)育相關(guān)基因OCT4、Nanog啟動子區(qū)的甲基化，以揭示與胚胎發(fā)育相關(guān)基因的甲基化模式，推測克隆胚發(fā)育失敗的原因，進而預(yù)測早期胚胎死亡的可能信號，提高體外胚的成活率，指導(dǎo)實驗室生產(chǎn)。研究結(jié)果如下：1．本試驗以牛的孤雌胚胎為材料，探討獲得高濃度胚胎基因組DNA的方法。結(jié)果表明：首先使用蛋白酶K除去透明帶，然后用本試驗方法可以獲得濃度相對高的基因組DNA。2．檢測了OCT4基因在不同時期死亡胚胎的甲基化模式。結(jié)果表明OCT
3、4基因在2一細胞、4一細胞、8．16細胞和桑葚胚階段死亡的克隆胚的甲基化水平分別為90．50％、90．00％、92．30％、77．70％，在體外受精胚的2．細胞、4．細胞、8．16細胞、桑葚胚階段死亡的甲基化水平分別為87．80％、81．10％、88．50％、70．60％。表明OCT4基因啟動子在早期死亡胚的甲基化水平較高，且在克隆胚的甲基化水平高于體外受精胚的甲基化水平，但克隆胚和體外受精胚各階段甲基化差異不顯著(P>0．05)；同時克隆胚和體外受精胚OCT4的甲基化水平從8．16細胞到桑葚胚呈下降趨勢。3．檢測了Nanog基因在不同時期死亡
4、胚胎的甲基化模式。研究表明Nanog在克隆胚的2．細胞、4．細胞、8．16細胞和桑葚胚階段死亡的甲基化水平分別為46．15％、42．31％、48．46％、53．85％，在體外受精胚的2．細胞、4．細胞、8．16細胞、桑葚胚階段死亡的甲基化水平分別為63．85％、56．92％、69．23％、53．07％。表明Nanog基因啟動子在早期死亡的體外受精胚的甲基化水平較克隆胚的高；在早期死亡的克隆胚中，Nanog甲基化水平從8．16細胞到桑葚胚時上升，而在體外受精胚則下降。同時Nanog啟動子在體外受精胚的甲基化水平高于克隆胚。華中農(nóng)業(yè)大學(xué)2012屆碩
5、士學(xué)位論文4．總的來說，早期死亡胚中，OCT4基因啟動子的甲基化高于Nanog的，推測可能由于OCT4異常的甲基化使Nanog發(fā)生異常甲基化，二者異常的甲基化可能導(dǎo)致早期胚胎的死亡。5．對甲基化水平存在差異的階段進行定量分析。結(jié)果表明：不論何種方式獲得的早期死亡的胚胎，其OCT4的表達量高于Nanog，且只在桑葚胚時期檢測到少量Nanog的表達。推測可能由于OCT4的過度表達限制了Nanog的表達。6．結(jié)合以上推測2．細胞階段可能是早期胚胎死亡的信號，因此可考慮體外培養(yǎng)時加入一定濃度的抑制劑以提高體外成活率。關(guān)鍵-N：孤雌胚；體外受精胚；克隆胚
6、；OCT4；Nanog；定量分析IIABSTRACTTheprocessofembryonicdevelopmentistheprocessofreprogrammingofspe姍。eggcombination·DNAmethylation．oneofthemajorepigeneticreprogrammingmodifications，participatesinavarietyofphysiologicalactivitivesofcells．DNAmethylationallowstheorderlyexpressionofgenes
7、involvedinembryonicdevelopment．maintainingthenormaldevelopmentofembryos．Cattlearesingletonanimals，inordertoincreasethebreedofcattle，SOweobtainmoreembryosbyinvitrDculture、vavandtransplantation，butduetovariousreasons，thesurvivalrateofembryo／nvitrDislo、verthan切vivo，causingtheea
8、rlydeathofembryosandcertainlossforthelivestockproduction．Now,wehaveconfirme
