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《慢病毒介導rna干擾技術制備骨橋蛋白基因沉默小鼠模型》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關內容在學術論文-天天文庫。
1、學校代碼：10246學號：09211220070復旦大學碩士（專業(yè)）學位論文慢病毒介導RNA干擾技術制備骨橋蛋白基因沉默小鼠模型Osteopontingenesilencingmousemodelmadebylentivirus-mediatedRNAinterferencetechnology【本課題受國家自然科學基金（No.30801105)資助】院系：華山醫(yī)院專業(yè)：臨床醫(yī)學（普外)姓名：享n滿導師：陳進宏副教授導師小組成員：向陽副教授馬保金教授蔡端教授完成日期:2012年3月12日復旦大學專業(yè)學位碩士論文目錄目錄中英文縮略詞對照表1巾文摘胃2英文摘要4弓IW7第一部分靶向骨
2、橋蛋白基因的shRNA慢病毒表達載體的構建與鑒定11mm11材料與方法11親24艦28誠29參考文獻30第二部分C57小鼠肝臟骨橋蛋白基因沉默動物模型的建立31前胃31材料與方法3137討論4042參考文獻42第三部分骨橋蛋白基因沉默C57小鼠肝臟膽固醇代謝相關基因表達的檢測..44"iys44材料與方法44會課47i寸i倉49辦5152總結54綜述55附件62致謝63?復旦大學專業(yè)學位碩L論文中英文縮略詞對照表中英文縮略詞對照表英文縮寫英文名稱中文名稱OPNOsteopontin骨橋蛋白LVLentiviralvector慢病毒載體shRN
3、AShorthairpinRNA短發(fā)夾RNAsiRNASmallinterferenceRNA小RNA干擾BCBlankcontrol空白對照組NCNegativecontrol陰性對照組EGExperimentalgroip實驗組TU/mlTranductionunitesperml每毫升轉染單位E.coliEscherichiacoli大腸桿菌AMPAnpicillin氨芐西林LBLuria-Bertani溶菌肉湯MOIMul^licityofinfection感染復數GSGenesilencing基因沉默PTGSPosttranscriptionalgenesilencing轉錄后基因
4、沉默TGSTransciptionalgenesilencing轉錄水平基因沉默3-Hydroxy-3-methylglutaryl-CoA3-羥基-3-甲基戊二酰輔HMG-CoARreductase酶A還原酶CYP7alCholesterol7a^)hal-hydroxylase膽固醇7od-羥化酶腺苷三磷酸結合盒轉運體ABCG5/8ATPbindingcassettetransportG5/G8G5和G8LXRLiverXreceptor肝臟X受體FXRFarnesoidXreceptor法尼醇X受體FoxOlForkheadtranscriptionfector叉頭框轉錄因子?復旦大學
5、專業(yè)學位碩士論文中文摘要慢病毒介導RMA干擾技術制備骨橋蛋白基因沉默小鼠模型中文摘要第一部分靶向骨橋蛋白基因的shRNA慢病毒表達載體的構建與鑒定【摘要】目的構建針對骨橋蛋白（Osteopontin，OPN)基因的短發(fā)夾RNA(shorthaiipinRNA,shRNA)序列，合成pSicoR-GFP-shRNA慢病毒重組體，篩選對OPN基因表達抑制效率最佳的shRNA序列。方法參照OPNGeneBank上的序列設計合成shRNA-A，及不針對C57小鼠任何基因的陰性對照序列s_A-NC，參考相關文獻合成針對骨橋蛋白基因的s_A-B。將合成的shRNA插入到線性化的pSicoR-GFP慢病毒
6、載體中；然后轉染EcoliJM109感受態(tài)細胞，對長出的菌落進行PCR鑒定，PCR鑒定陽性的克隆再進行測序。鑒定序列無誤后，將之與pCMV-VSV-G和pCMV-dR8.91輔助質粒包裝，然后共轉染293FT細胞，進行慢病毒的包裝及滴度測定，控制滴度在lxl09TU/m!以上。用構建好的慢病毒感染小鼠肝細胞，檢測不同s_A序列對OPN基因表達的抑制效果，篩選最佳s_A序列。結果經RT-PCR禾卩Western-Blot檢測發(fā)現:靶向OPN基因的shRNA慢病毒表達載體轉染小鼠肝細胞后，序列shRNA-A/B均可有效抑制小鼠肝細胞OPN基因的表達，其中s_A-A序列效果最佳（可達80°/。-9
7、0%)。結論成功構建靶向OPN基因的shRNA慢病毒表達載體，其轉染小鼠肝細胞后可顯著抑制OPN基因的表達，這為進一步體內抑制試驗奠定了基礎。第二部分C57小鼠肝臟骨橋蛋白基因沉默動物模型的建立【摘要】目的將包裝好的慢病毒經尾靜脈注射到C57小鼠體內，抑制其肝臟骨橋蛋白（Osteopontin，OPN)基因的表達，建立OPN基因沉默小鼠動物模型。方法取30只C57小鼠隨機平均分為：空白對照組（Blankcon
