自噬在熊果酸抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖中的作用

《自噬在熊果酸抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖中的作用》由會員上傳分享，免費在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。

1、重慶醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文自噬在熊果酸抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖中的作用姓名：畢娟娟申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：葉秀峰201205重慶醫(yī)科大學(xué)頊?zhǔn)垦芯可鷮W(xué)位論文自噬在熊果酸抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞增殖中的作用1摘要目的：研究自噬在熊果酸(Urs01icacid，UA)抑制人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞(humanumbilicalveillendothelialcells，HUVECs)增殖中的作用。方法：體外培養(yǎng)HUVECs，采用不同濃度的熊果酸和自噬特異性抑制劑3．甲基腺嘌呤(3_methyladenille，3一MA，)與熊果酸聯(lián)合處理。運

2、用MTT法檢測熊果酸對HUVECs增殖的抑制作用及其聯(lián)合3一MA處理細(xì)胞后細(xì)胞存活狀態(tài)的變化；在透射電鏡下觀察熊果酸作用前后HUVECs結(jié)構(gòu)的改變；微管相關(guān)蛋白1輕鏈3(曲crotubule—associatedprotein1lightchain3，LC3)免疫熒光和流式細(xì)胞術(shù)檢測熊果酸對HuVECs自噬水平的影響；單丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverine，MDC)熒光染色法觀察熊果酸對HUVECs自噬泡的影響；Westemblotting檢測LC3及自噬相關(guān)蛋白Beclin一1蛋白的表達情況；RT-PCR檢測LC3及Becl

3、in．1轉(zhuǎn)錄水平的變化；流式細(xì)胞術(shù)檢測HUVECs經(jīng)熊果酸和3一MA與熊果酸聯(lián)合處理后凋亡率的變化。結(jié)果：隨著熊果酸作用于HUVECs劑量的增加細(xì)胞的生長抑制程度及死亡程度也逐漸的增強；熊果酸抑制HUVECs生長增值36h的半數(shù)作用劑量為20岬01／L；HUVECs經(jīng)熊果酸處理后透射電鏡及MDC基金項目：重慶市科技攻關(guān)計劃項目(cscT’2008AB5118)、重慶市教委科技研究項目基金(KJ08032)重慶醫(yī)科大學(xué)頊?zhǔn)垦芯可鷮W(xué)位論文染色均顯示：細(xì)胞漿中自噬相關(guān)形態(tài)的數(shù)量具有明顯上升的趨勢；細(xì)胞免疫熒光法檢測顯示熊果酸處理HUVECs組LC3陽

4、性細(xì)胞數(shù)較對照組明顯增強且流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示熊果酸處理HUVECs后細(xì)胞的熒光強度與正常細(xì)胞培養(yǎng)組相比明顯增強：HUVECs經(jīng)熊果酸處理后可上調(diào)LC3及Beclin．1的蛋白水平及mRNA的轉(zhuǎn)錄水平；3一MA與熊果酸聯(lián)合作用后，HUVECs受到的增殖抑制明顯高于熊果酸單獨作用，且其凋亡率上升明顯。結(jié)論：熊果酸抑制人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞生長增殖，在這個過程中自噬現(xiàn)象被激活，自噬在此過程中對HUVECs起保護作用。自噬抑制劑3一MA能夠增強熊果酸抑制HUVECs生長增殖的作用并且促進熊果酸誘導(dǎo)HUVECs發(fā)生凋亡。關(guān)鍵詞：熊果酸；人臍靜脈血管內(nèi)皮細(xì)胞

5、；白噬；凋亡RoleofautophagyonUrsolicacid—mediatedsuppressionofDroliferationinvascularendOthelialcells0tDr0ⅡteratlonlnVaSCUIarencIOInenaICelISABSTRACTPu印ose：Urs01icacid(UA)extracted療omChiIleseherbshasbeenshowenainllibitingr01einpr01iferationofHumanUmbilicalVeinEndothelialCells(HUVE

6、Cs)，butthespeci丘cmechanismsunderlyingthisprocessremainunclear．Int11isstudy，weiIlVestigatedtheroleofautophagyinthesuppressivee虢ctofUAonthepr01iferationofhumanumbilicalVeinendothelialcells(HUVECs)Methods：HUVECswereculturedinvitroandtreatedwithVariousconcentrationsofUAand3一memy

7、ladeIline(Autophagyi11ll曲“or，3．MA)+UArespectively．Theef．fectsofUAonproli佗rationaswellas3．MA+UAonsuⅣivalofHUVECsweredeter面nedbyMTTmethod．ThechangeofultrastmctureinHUVECswasdetectedusingTtansmissionElec仃onMicroscope(TEM)．Theexpressionsofautophagy—associatedproteinsinHUVECstrea

8、tedwithUAweredeteHllinedbyⅡuorescntstaillingof面crotubule—associatedproteinc