自噬抑制氧化低密度脂蛋白在人血管內(nèi)皮細(xì)胞聚集的作用及機(jī)制探討

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1、蘇州大學(xué)學(xué)位論文獨(dú)創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：所提交的學(xué)位論文是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中已經(jīng)注明引用的內(nèi)容外，本論文不含其他個(gè)人或集體已經(jīng)發(fā)表或撰寫過的研究成果，也不含為獲得蘇州大學(xué)或其它教育機(jī)構(gòu)的學(xué)位證書而使用過的材料。對(duì)本文的研究作出重要貢獻(xiàn)的個(gè)人和集體，均已在文中以明確方式標(biāo)明。本人承擔(dān)本聲明的法律責(zé)任。論文作者簽名：鯉魚El期：翌!三二皇二蘭蘭蘇州大學(xué)學(xué)位論文使用授權(quán)聲明本人完全了解蘇州大學(xué)關(guān)于收集、保存和使用學(xué)位論文的規(guī)定，即：學(xué)位論文著作權(quán)歸屬蘇州大學(xué)。本學(xué)位論文電子文檔的內(nèi)容和紙質(zhì)論文的內(nèi)容相一致。蘇州大學(xué)有權(quán)向國家圖書館、

2、中國社科院文獻(xiàn)信息情報(bào)中心、中國科學(xué)技術(shù)信息研究所(含萬方數(shù)據(jù)電子出版社)、中國學(xué)術(shù)期刊(光盤版)電子雜志社送交本學(xué)位論文的復(fù)印件和電子文檔，允許論文被查閱和借閱，可以采用影印、縮印或其他復(fù)制手段保存和匯編學(xué)位論文，可以將學(xué)位論文的全部或部分內(nèi)容編入有關(guān)數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索。涉密論文口本學(xué)位論文屬在——年一月解密后適用本規(guī)定。非涉密論文口論文作者簽名：導(dǎo)師簽名：日自噬抑制氧化低密度脂蛋白在人血管內(nèi)皮細(xì)胞聚集的作用及機(jī)制探討中文摘要自噬抑制氧化低密度脂蛋白在人血管內(nèi)皮細(xì)胞聚集的作用及機(jī)制探討中文摘要目的：觀察自噬對(duì)氧化低密度脂蛋白(ox．LDL)在人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(HUv

3、ECs)中聚集的影響。方法：1．運(yùn)用不同時(shí)間點(diǎn)的Dil．OX．LDL處理HUVECs，采用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)HUVECs中Dil．OX．LDL的含量。2．在自噬誘導(dǎo)劑雷帕霉素和抑制劑3甲基腺嘌呤(3MA)干預(yù)下，觀察自噬對(duì)Dil．OX．LDL在HUVECs中聚集的影響。3．在雷帕霉素和3MA干預(yù)下，通過免疫熒光技術(shù)觀察HUVECs中Dil—OX．LDL與自噬標(biāo)記物L(fēng)C3以及溶酶體標(biāo)記物L(fēng)AMP1的共定位情況，以及HUVECs中LC3與LAMPl的共定位情況，初步探討自噬抑制HUVECs中OX．LDL聚集的可能機(jī)制；采用蛋白免疫印跡方法檢測(cè)自噬流相關(guān)蛋白LC3、bec

4、linl、LAMPl、P62的蛋白含量，進(jìn)一步證實(shí)自噬參與了OX．LDL在HUVECs中的降解。結(jié)果：1．流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示Dil．OX．LDL在HUVECs中的積聚量隨時(shí)間點(diǎn)的延長而增加，3h細(xì)胞內(nèi)Dil．OX．LDL是0小時(shí)的8．53倍，3h時(shí)間點(diǎn)下雷帕霉素可抑制HUVECs中OX．LDL的積聚(P=-0．003)而3MA能夠增加HUVECs中OX．LDL的積聚(P=-0．035)。2．免疫熒光技術(shù)顯示3h時(shí)間點(diǎn)下，Dil．OX．LDL與LC3及LAMPl發(fā)生大量共定位，此時(shí)LC3與LAMPl也大量共定位，同時(shí)Dil—OX—LDL與LC3及LAMPl、LC

5、3與LAMPl的共定位能夠被雷帕霉素增加，被3MA所抑制。中文摘要自噬抑制氧化低密度脂蛋白在人血管內(nèi)皮細(xì)胞聚集的作用及機(jī)制探討3．免疫印跡技術(shù)結(jié)果顯示，OX．LDL作用于HUVECs3h后，LC3．II／LC3．I(仁O．024)、beclinl(盧0．005)及LAMPl(P<0．001)蛋白表達(dá)明顯增加，P62蛋白水平降低(尸<0．001)；與OX．LDL組相比雷帕霉素能夠進(jìn)一步增加LC3．II／LC3．I(P=-0．045)和beclinl(P=-0．001)蛋白表達(dá)，降低P62(P=-0．030)蛋白表達(dá)；與OX．LDL組相比3MA能夠降低LC3．II／L

6、C3．I(P<0．001)和beclinl(P

7、及機(jī)制探討AbstractThemechanismofautophagyinhibitsOX--LDLaccumulationinHUVECsAbstractobjective：OxidizedLow-densitylipoprotein(OX-LDL)hasagreatimplicationintheinitiationofatherosclerosis．OurpreviousstudyreportedthatOX-LDLcanactivateautophagyinhumanumbilicalveinendothelialcells(HUVECs)．Theref

8、orest