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《綿馬素pb體外抗hepg2肝癌細(xì)胞的作用機(jī)制研究》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)UniversityCode：10225RegisterCode：S14677DissertationfortheDegreeofMaster／nvitroStudyonantitumormechanismofaspidinPBtowardshumanhepatocarcinomaHepG2cellsCandidate：Supervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：Dateof0ralExamination：University：SunYaoProf．FuYuiieMasterPharmacognosyJune，2014Nort
2、heastForestry萬方數(shù)據(jù)摘要腫瘤的發(fā)生和發(fā)展與許多信號通路息息相關(guān)，因此靶向作用于特定的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子，從而預(yù)防和治療腫瘤的研究策略日益受到越來越多的關(guān)注。在下游生存信號中，P13K／Akt通路具有十分重要的作用，因此更深入的研究這一通路將會促進(jìn)開發(fā)新穎的腫瘤治療藥物。綿馬素PB(aspidinPB)是從香鱗毛蕨Dryopterisfragrans(L．)Schott中分離的一種間苯三酚類化合物，文獻(xiàn)報(bào)道具有一定的抗腫瘤活性，然而其誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的機(jī)制至今未有深入報(bào)道。本文以綿馬素PB為研究對象，對其體外抗腫瘤活性和誘導(dǎo)凋亡的機(jī)制進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)綿馬素PB通過調(diào)節(jié)P13K／A
3、kVGSK-313信號通路從而引起HepG2肝癌細(xì)胞凋亡。研究結(jié)果如下：1．綿馬素PB對多種腫瘤細(xì)胞株具有良好的增殖抑制作用。其中對HepG2細(xì)胞的抑制作用最強(qiáng)，IC50值是10．59+0．67IIM，進(jìn)一步檢測結(jié)果表明，綿馬素PB對HepG2細(xì)胞的增殖抑制作用是呈時(shí)間和濃度依賴的。然而，正常的小鼠單核巨噬細(xì)胞Raw264．7和小鼠胚胎成骨細(xì)胞MC3T3．E1的IC50值分別是42．50-士0．54¨M和38．19+0．92uM，遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于HepG2細(xì)胞，說明綿馬素PB對正常細(xì)胞株的毒性較小。另外，使用激光共聚焦顯微鏡從形態(tài)學(xué)角度觀察綿馬素PB作用于人肝癌HepG2細(xì)胞后的變化，可以看
4、出其細(xì)胞染色質(zhì)凝集并固縮，細(xì)胞核膜核仁碎裂成小片段形成凋亡小體。2．綿馬素PB能夠誘導(dǎo)HepG2細(xì)胞發(fā)生凋亡。首先，使用羅丹明123染色法檢測綿馬素PB作用于人肝癌HepG2細(xì)胞后線粒體跨膜電位的變化，結(jié)果呈現(xiàn)明顯地下降趨勢。其次，采用瓊脂糖凝膠電泳檢測梯狀條帶(DNALadder)的產(chǎn)生，可以看出加入綿馬素PB后的HepG2細(xì)胞的泳道內(nèi)均有明顯的DNALadder出現(xiàn)。最后，利用A蛐exinv-FITC／PI雙染試劑盒檢測細(xì)胞凋亡百分率，結(jié)果顯示綿馬素PB作用于HepG2細(xì)胞48h后，細(xì)胞的凋亡百分率顯著升高，并且呈濃度依賴的方式。3．綿馬素PB通過調(diào)節(jié)P13K／Akt／GSK．3
5、p信號通路從而引起HepG2肝癌細(xì)胞凋亡。(1)綿馬素PB可以抑制P13K的表達(dá)，抑制Ser473Akt的磷酸化，抑制Ser9GSK-31B的表達(dá)，隨后上調(diào)NAG．1的表達(dá)。相似地，加入P13K抑制劑渥曼青霉素后，各蛋白的表達(dá)效果和綿馬素PB作用一致。該結(jié)果說明P13K／AkVGSK．3D信號通路可能是綿馬素PB作用于HepG2肝癌細(xì)胞的主要分子機(jī)制之一。(2)綿馬素PB誘發(fā)了caspase．3的激活和PARP的裂解。用廣譜caspase抑制劑Z．VAD．FMK預(yù)處理HepG2細(xì)胞2h后，可明顯地抑制二者的變化。這說明綿馬素PB誘導(dǎo)的HepG2細(xì)胞凋亡是通過caspase所依賴的途徑
6、。綜上所述，綿馬素PB在不影響正常細(xì)胞生長的狀況下，可以有效地抑制HepG2肝萬方數(shù)據(jù)摘要癌細(xì)胞的增殖，這種增殖抑制作用與其誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡密切相關(guān)。綿馬素PB通過caspase所依賴的途徑誘導(dǎo)HepG2肝癌細(xì)胞發(fā)生凋亡，其中P13K／Akt／GSK-3[3／NAG一1信號通路可能作為最主要的分子機(jī)制之一。上述研究結(jié)果將對綿馬素PB進(jìn)一步的研究并開發(fā)為新藥提供良好的理論基礎(chǔ)。關(guān)鍵詞綿馬素PB；HepG2細(xì)胞；凋亡；P13K／Akt／GSK一3p萬方數(shù)據(jù)AbstractManycancer-relatedsignalingpathwayshavebeenelucidatedandther
7、eareconsiderableeffortstodevelopnewtreatmentstrategies，whichtargetspecificsignaltransductionmolecules．Amongthedownstreamsurvivalsignals，P13K／Aktpathwayplaysacrucialrole．Thus，abetterunderstandingofthispathwaymayfacilitatetodevelopn
