骨髓基質干細胞復合小腸黏膜下層體內異位成骨的實驗分析

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1、原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明:本人所呈交的學位論文,是在導師的指導下獨立進行研究所取得的成果。學位論文中凡引用他人已經發(fā)表或未發(fā)表的成果、數(shù)據(jù)、觀點等,均已明確注明出處。除文中已經注明引用的內容外,不包含任何其他個人或集體已經發(fā)表或撰寫過的科研成果。對本文的研究成果做出重要貢獻的個人和集體,均已在文中以明確方式標明。本聲明的法律責任由本人承擔。論文作者簽名:二啤日期:業(yè)關于學位論文使用授權的聲明本人在導師指導下所完成的論文及相關的職務作品,知識產權歸屬蘭州大學。本人完全了解蘭州大學有關保存、使用學位論文的規(guī)定,同意學校保存或向國家有關部門或機構送

2、交論文的紙質版和電子版,允許論文被查閱和借閱;本人授權蘭州大學可以將本學位論文的全部或部分內容編入有關數(shù)據(jù)庫進行檢索,可以采用任何復制手段保存和匯編本學位論文。本人離校后發(fā)表、使用學位論文或與該論文直接相關的學術論文或成果時,第一署名單位仍然為蘭州大學。保密論文在解密后應遵守此規(guī)定。論文作者簽名:盞】蕉毒一導師簽名:喜越日蘭州大學碩士學位論文一、研究背景)£...1-.刖『雷隨著社會的發(fā)展和人口的增多,因外傷、腫瘤、先天性畸形等造成的骨缺損長期以來一直是困擾外科醫(yī)生的難題,常需植骨治療。全球每年約有220萬病人需要植骨治療。目前的植骨材料主

3、要有自體骨、同種異體骨、經特殊處理的異種骨和人工骨材料等n1.在美國,1996年需植骨的病人中約60%采用自體骨移植,34%采用異體骨移植,僅7%的病人采用其它植骨材料嘲.但是自體骨存在來源有限,術后取骨點疼痛的缺點,且自體骨術后并發(fā)癥可達8%:同種異體骨和人工骨也存在免疫原性和致病性等缺點啪。所以它們并不是最理想的骨修復材料。游離骨膜移植能修復骨缺損哪,但來源有限,對供區(qū)的損害在所難免。研制理想的骨移植替代材料至今仍是醫(yī)學領域的一個重要課題。1.組織工程與骨缺損“組織工程一的概念最早是由美國國家科學基金會在1987年正式提出,它是利用材料

4、工程學和生命科學的原理和方法,認識哺乳動物正常和病理組織結構及功能關系,并開發(fā)生物替代品,以恢復、維持或改善組織功能的一門學科。方法主要是體外分離和培養(yǎng)細胞,將一定數(shù)量的細胞種植到具有一定空間結構的三維支架上,然后將此細胞/支架復合物植入體內或在體外繼續(xù)培養(yǎng),通過細胞間的相互粘附、增殖和分化,分泌細胞外基質,從而形成具有一定結構和功能的組織或器官。組織工程全過程包括種子細胞的選擇和培養(yǎng)、種子細胞和生物材料復合后聯(lián)合培養(yǎng)、復合體植入體內3個步驟。1995年Crane等嘲系統(tǒng)提出了骨組織工程的基本概念,即利用組織工程學的原理和方法對缺損骨組織進

5、行修復和重建,引起了廣泛的關注。骨組織再生需要有四個條件:(1)骨生長調控因子;(2)調控因子作用的受體細胞:(3)能夠攜帶調控因子并且可以作為種子細胞載體的支架材料:(4)具有良好血供的植骨床嘲.因此,用骨組織工程的方法構建新的骨組織或修復病變骨組織,通常通過以下三個途徑:(1)在生物材料支架上種植細胞,體內或體外培養(yǎng),將它們植入病損部位,以修復病損的骨組織:(2)將骨生長調控因子與載體材料復合,植入體內誘導間充質干細胞蘭州大學碩士學位論文(mesenchymalstemcells,MSCs)向成骨細胞分化,進而再生新骨:(3)將骨組織細

6、胞及其它生物活性物質注入或移植至病變或缺損部位,以恢復病變組織功能或再生新的骨組織。所以,骨組織工程的研究主要包括三個方面的內容:(1)骨組織工程需要大量具有良好增殖能力、成骨活性強、能連續(xù)傳代、不衰老的種子細胞,目前主要的種子細胞是間充質干細胞和成骨細胞。(2)能引導組織再生的生物活性因子。骨組織工程研究的生物活性因子主要有骨形態(tài)發(fā)生蛋白(Bonemorphogeneticprotein,BMP)、胰島素樣生長因子I和II(IGF-I和IGF-II)、轉化生長因子一8(transforminggrowthfactor,TGF-p)、成纖維

7、細胞生長因子(fibroblastgrowthfactors,F(xiàn)6Fs)、血小板衍化生長因子((plateletderived.growthfactor,PDGF)和多種免疫造血系統(tǒng)的細胞因子等。(3)能夠支持細胞粘附、增殖和分化以及釋放生物活性因子的支架材料。目前常用的支架材料有天然珊瑚骨,羥基磷灰石,L-聚乳酸,聚羥基乙酸等。其中,種子細胞的獲取和培養(yǎng)及支架的選擇無疑是最為基礎和重要的環(huán)節(jié)。2.BMSCs骨組織工程種子細胞應具備下列特點:①取材容易,對機體的損傷小:②在體外培養(yǎng)過程中具有較強的傳代繁殖能力并易定向分化為成骨細胞:③植入機

8、體后能適應受區(qū)的環(huán)境并保持成骨活性。目前,作為種子細胞的成骨細胞有4種來源:骨、骨膜、骨髓和骨外組織。骨髓的來源廣泛,通過穿刺即可獲得,骨髓的成骨能力來源于BMSCs。它是一種具

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