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《津田蕪菁花青素合成非依光型t-dna突變體的構(gòu)建及分析》由會員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、學(xué)位論文萬方數(shù)據(jù)學(xué)校代碼：10225學(xué)號：S13157津田蕪菁花青素合成非依光型T-DNA突變體的構(gòu)建及分析指導(dǎo)教師姓名：申請學(xué)位級別：論文提交日期：授予學(xué)位單位：劉明雪李玉花教授東北林業(yè)大學(xué)碩士學(xué)科專業(yè)：發(fā)育生物學(xué)2013年4月論文答辯日期：2013年6月東北林業(yè)大學(xué)授予學(xué)位日期：答辯委員會主席：李景富論文評閱人：郭長虹王晶英春童厶符素大學(xué)萬方數(shù)據(jù)UniversityCode：10225RegisterCode：S13157DissertationfortheDegreeofMasterConstructionandAnalysisofthelightindependentan
2、thocyaninaccumulationT--DNAmutantin‘Tsuda’turnipCandidate：Supervisor：AcademicDegreeAppliedfor：Speciality：DateofOralExamination：University：LiuMingxueLiy西huaMasterDevelopmentbiologyJune，2013NortheastForestryUniversity萬方數(shù)據(jù)摘要基因組學(xué)研究的一個重要手段是構(gòu)建大規(guī)模突變體庫，通過分析突變體的表型從而鑒定突變基因的功能是功能基因組學(xué)研究最直接有效的方法。T-DNA是目前使
3、用最廣泛的插入元件，已在許多植物中利用其進(jìn)行突變體庫的構(gòu)建和篩選，從而研究基因的功能。本研究組在前期的研究中發(fā)現(xiàn)，UV-A特異誘導(dǎo)津田蕪菁膨大肉質(zhì)根表皮的花青素合成，推測在植物中可能存在不同于UV_～藍(lán)光受體的UV-A特異的受體。津田蕪菁花青素合成非依光型T-DNA插入突變體的構(gòu)建將為研究UV-A特異誘導(dǎo)花青素合成途徑中相關(guān)基因及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子建立平臺。本研究制作了津田蕪菁花青素合成非依光型T-DNA突變?nèi)后w并對突變?nèi)后w進(jìn)行了初步鑒定分析。得到了以下結(jié)果：成功從pBll21質(zhì)粒中克隆了GUS基因，測序分析顯示GUS基因序列全長1812bp，Blast序列比對顯示序列正確。采用Gat
4、eway技術(shù)，成功構(gòu)建了表達(dá)載體pH7WG2D，1．GUS,該植物表達(dá)載體含覦P選擇性標(biāo)記基因、GUS選擇性標(biāo)記基因、潮霉素植物選擇標(biāo)記以及CaMV35s啟動子。以津田蕪菁花序軸為外植體進(jìn)行農(nóng)桿菌介導(dǎo)的組培遺傳轉(zhuǎn)化探索，并根據(jù)蕪菁難于再分化的特性設(shè)置了35種不同6-BA和NAA組合的分化培養(yǎng)基，結(jié)果表明此種方法不能使蕪菁分化出再生芽。采用農(nóng)桿菌真空滲透萌發(fā)種子的方法進(jìn)行蕪菁非組培遺傳轉(zhuǎn)化的探索，并設(shè)置了干種子未超聲、干種子超聲、浸泡種子未超聲、浸泡種子超聲四種實(shí)驗(yàn)條件。綠色熒光蛋白篩選及GUS組織化學(xué)染色初步鑒定表明浸泡種子超聲的轉(zhuǎn)化率最高，陽性結(jié)果達(dá)到60％。對T-DNA插入突
5、變體庫進(jìn)行篩選，獲得花青素合成不受光誘導(dǎo)的全紅突變體以及花青素不合成的全白突變體。通過篩選約10000株Tl代津田蕪菁，獲得200株系目標(biāo)突變體。種植篩選出的T2代突變體，共獲得17個全紅株系，60個全白株系。對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了gfp、gus、hyg和35sprmoter四個標(biāo)記基因的PCR鑒定。其中全紅表型突變體3、4號，全白表型突變體7、9號四個標(biāo)記基因PCR結(jié)果均有條帶。經(jīng)眥L—PCR分析，T-DNA插入位點(diǎn)在07號染色體的20002828位置和20003156位置之間，可能在兩個基因之間或下游基因的啟動子區(qū)。對插入位點(diǎn)上下游基因進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)其上游基因?yàn)槿菭钗咫闹貜?fù)區(qū)(
6、pentatricopeptide，PPR)，下游基因編碼的蛋白屬多藥和有毒化合物排出家族(MultidrugandToxicCompoundExtrusion，MATE)。關(guān)鍵詞蕪菁；花青素；T-DNA插入突變體萬方數(shù)據(jù)AbstractTheconstructionoflarge-scalemutantlibraryisanimportantcontentoffunctionalgenomicsresearch．Analysisofthemutantphenotypeandidentificationofthegenefunctionarethemostdirectandeff
7、ectivemethodoffunctionalgenomicsresearch．Inrecentyears，usingT-DNAasaninsertelementtobuildmutantlibrary,screenmutantandresearchgenefunctionhasbeenfoundinmanyplants．Intheearlystudies，theresultsshowedthatanthocyaninsynthesisof‘Tsuda’turnipwasspe
