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《人關(guān)節(jié)液對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化影響的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫(kù)。
1、目錄1人關(guān)節(jié)液對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化影響的實(shí)驗(yàn)研究?????????????????????l1．1中文摘要?????????????????????1]02英文摘要?????????????????????31．3前言???????????????????????61．4材料與方法????????????????????81．5結(jié)果???????????????????????171．6討論??···?????????·???··????·??··191．7結(jié)j淦·????·??-?·?????·???·?????．．·261。8參考文獻(xiàn)????????
2、?????????????271．9英漢縮略詞對(duì)照表?????????????????302附圖????????????????????·?·?·313致謝··????·?·?????·???····??·??·??·364骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨損傷的研究進(jìn)展(綜述)．．????????????????????????·375攻讀學(xué)位期問(wèn)發(fā)表的論文??????????????49人關(guān)節(jié)液對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向分化影響酶實(shí)驗(yàn)研究I愀鼎摘要目的體外獲得人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(humanbonemarrowmesenchymalstemcells，hBMSCs)，
3、并對(duì)獲取的hBMSCs進(jìn)行純化、擴(kuò)增及鑒定。通過(guò)人關(guān)節(jié)液與hBMSCs混合培養(yǎng)，研究共培養(yǎng)系統(tǒng)導(dǎo)致hBMSCs定向誘導(dǎo)分化的影響，探討關(guān)節(jié)液對(duì)hBMSCs的作用，為以關(guān)節(jié)液和BMSCs作為軟骨組織工程基質(zhì)的使用奠定一定的基礎(chǔ)。方法從因創(chuàng)傷導(dǎo)致不同部位的骨折需行骨折復(fù)位及髂骨植骨術(shù)的志愿者中，獲取骨髓，采用全骨髓、貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)和分離hBMSCs。在實(shí)驗(yàn)過(guò)程中，我們還對(duì)培養(yǎng)的hBMSCs進(jìn)行了凍存和復(fù)蘇。實(shí)驗(yàn)在倒置相差顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)形態(tài)；取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的P3代細(xì)胞進(jìn)行表面標(biāo)志物的表達(dá)和細(xì)胞表型的鑒定；取生長(zhǎng)狀態(tài)良好的P1、P2、P3代細(xì)胞，分別用胰蛋白酶消
4、化、培養(yǎng)，以培養(yǎng)時(shí)間為橫軸，細(xì)胞數(shù)為縱軸，繪制hBMSCs生長(zhǎng)曲線圖。在無(wú)菌操作下，患者取坐位，雙膝下垂，穿刺部位按常規(guī)進(jìn)行皮膚消毒，用2％禾1J多卡因作局部麻醉，于健康志愿者的膝關(guān)節(jié)的髕骨下緣、髕韌帶外側(cè)lcm處，定位后用一次性10號(hào)注射針頭與脛骨平臺(tái)平行，向內(nèi)呈45度角i穿刺進(jìn)入，針頭完全刺入即可，抽取膝關(guān)節(jié)內(nèi)的關(guān)節(jié)液，將其與生長(zhǎng)良好的P3細(xì)胞混合用于實(shí)驗(yàn)，將24孔板盲法隨機(jī)分為3組(A組、B組及C組)，每組8孔，每個(gè)孔板內(nèi)放置無(wú)菌并用多聚賴氨酸預(yù)處理過(guò)的爬片，其中：A組：?jiǎn)渭冴P(guān)節(jié)液組(關(guān)節(jié)液+含體積分?jǐn)?shù)IO％FBS+I％雙抗的HG—DMEM)；B組：關(guān)節(jié)
5、液+hBMSCs組(關(guān)節(jié)液+hBMSCs+含體積分?jǐn)?shù)IO％FBS+I％雙抗的HG-DMEM)；C組：?jiǎn)渭僪BMSCs組(hBMSCs+含體積分?jǐn)?shù)IO％FBS+I％雙抗的HG—DME6ff)。每天在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)變化和生長(zhǎng)情況，分別于誘導(dǎo)后第7，14，21天行甲苯胺藍(lán)染色檢測(cè)酸性糖胺多糖表達(dá)，免疫組化染色檢測(cè)細(xì)胞Ⅱ型t膠原表達(dá)。結(jié)果經(jīng)全骨髓、貼壁培養(yǎng)法培養(yǎng)分離獲得了純度較高h(yuǎn)BMSCs，細(xì)胞呈均一的長(zhǎng)梭形、短梭形及多角形，漩渦狀或輻射狀結(jié)構(gòu)，繪制的生長(zhǎng)曲線呈s形。所分離培養(yǎng)的細(xì)胞表達(dá)CD29、CD44、CD90、CDl05分別為：99．6％、100％、
6、99．4％、92．5％，呈均一、高表達(dá)性：而表達(dá)CD34、CD45分別為：0．5％、0．6％，呈低表達(dá)性。hBMSCs與關(guān)節(jié)液混合培養(yǎng)后，細(xì)胞增殖速度減慢，由長(zhǎng)梭形變?yōu)槎嘟切?、橢圓形，細(xì)胞外基質(zhì)呈甲苯胺藍(lán)異染性陽(yáng)性，II型膠原免疫組化陽(yáng)性，表現(xiàn)出向關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞分化的特點(diǎn)。結(jié)論全骨髓、貼壁培養(yǎng)法可成功分離hBMSCs，該方法具有操作簡(jiǎn)便、經(jīng)濟(jì)及污染少等優(yōu)點(diǎn)。該實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，關(guān)節(jié)液對(duì)hBMSCs向軟骨細(xì)胞分化有正性促進(jìn)作用，關(guān)節(jié)液中可能含有促hBMSCs向軟骨細(xì)胞方向分化的物質(zhì)，支持關(guān)節(jié)液作為軟骨組織工程基質(zhì)使用。關(guān)鍵詞：關(guān)節(jié)液骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞軟骨細(xì)胞‘軟骨組織工
7、程共培養(yǎng)ResearchoninfluencebonemarrowmesenchymalstemcellsdifferentiationbyjointfluidinvitroAbstract：ObjectionToobtainhumanbonemarrowmesenchymalstemcells，(humanbonemarrowmesenchymalstemcells、hBMSCs)invitro，makingpurification，amplificationandidentificationtheaccessofhBMSCs．Thestudyispropo
8、sedtoexploretheeffe
