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《壯骨顆粒對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化影響的實(shí)驗(yàn)研究》由會(huì)員上傳分享，免費(fèi)在線閱讀，更多相關(guān)內(nèi)容在學(xué)術(shù)論文-天天文庫。
1、萬方數(shù)據(jù)·410·CJTCMOct．2010V01．22No．5壯骨顆粒對(duì)骨髓問充質(zhì)干細(xì)胞分化影響的實(shí)驗(yàn)研究木陳德喜郎繼孝邢志軍于沛林趙景明李巍山東省青島市海慈醫(yī)療集團(tuán)骨傷科266033摘要目的：探索壯骨顆粒對(duì)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)增殖和分化的影響。方法：通過全骨髓貼壁法分離3—4月齡的正常新西蘭大白兔的骨髓，利用差速貼壁原理純化MSCs并通過形態(tài)學(xué)(光鏡)、流式細(xì)胞儀對(duì)大白兔MSCs表面抗原測(cè)定對(duì)其進(jìn)行鑒定，建立穩(wěn)定的MSCs培養(yǎng)體系，分別添加壯骨顆粒組和硫酸氨基葡萄糖組工作液，然后分別進(jìn)行增殖活性以及分化活性的測(cè)定。結(jié)果：
2、壯骨顆粒組和硫酸氨基葡萄糖組軟骨細(xì)胞的增殖和分化活性均高于空白組(P<0．01)；壯骨顆粒組的增殖活性高于硫酸氨基葡萄糖組，2組軟骨細(xì)胞分化相差不大。結(jié)論：壯骨顆粒可以明顯促進(jìn)MSCs增殖和分化。關(guān)鍵詞壯骨顆粒骨髓充質(zhì)干細(xì)胞增殖分化骨髓中除了造血干細(xì)胞(hematopoieticstemeeUs，HSC)以外，還存在著另外一類干細(xì)胞，即間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymalstemcells，MSC)oMSC是骨髓造血微環(huán)境中的一種重要細(xì)胞成分，具有較強(qiáng)的自我增殖能力和多向分化潛能，因其在體外可被誘導(dǎo)分化為軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞
3、、骨骼肌細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞、心肌細(xì)胞、肝細(xì)胞及胰島素分泌細(xì)胞等，而被譽(yù)為組織工程理想的“種子細(xì)胞”和體內(nèi)外基因轉(zhuǎn)移的靶細(xì)胞。骨髓MSC適合自體移植且無免疫排斥反應(yīng)，不存在倫理、道德和法律爭議，克服了胚胎干細(xì)胞的弊端，具有一獨(dú)特的優(yōu)勢(shì)，近年來成為除胚胎干細(xì)胞外的又一重要研究領(lǐng)域。老年性骨關(guān)節(jié)炎與骨髓MSCs關(guān)系是MSCs的數(shù)量不足和質(zhì)量的下降。隨年齡的增長和機(jī)體的衰老，MSCs的數(shù)量以及與成骨有關(guān)的激素和生長因子如雌激素、胰島素樣生長因子、鈣調(diào)節(jié)激素和轉(zhuǎn)換生長因子、成纖維細(xì)胞生長因子等在骨組織中的含量均出現(xiàn)減少?，這些
4、改變是造成老年性骨關(guān)節(jié)形成功能減退退化的重要原因。本試驗(yàn)通‘2007年山東省中醫(yī)藥發(fā)展計(jì)劃(編號(hào)：2007—182)過壯骨顆粒，采用體外培養(yǎng)MSCs技術(shù)，建立誘導(dǎo)MSCs軟骨向分化的細(xì)胞模型，從細(xì)胞形態(tài)學(xué)方面，觀察藥物對(duì)MSCs軟骨分化的作用。深入探討中藥防治骨性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)理。材料和方法通過全骨髓貼壁法分離3—4月齡的正常新西蘭大白兔的骨髓，利用差速貼壁原理純化MSCs并通過形態(tài)學(xué)(光鏡)、流式細(xì)胞儀對(duì)大白兔MSCs表面抗原測(cè)定對(duì)其進(jìn)行鑒定，建立穩(wěn)定的MSCs培養(yǎng)體系。根據(jù)人兔模型系數(shù)，電子天平稱取壯骨顆粒(杜仲、牛膝、淫羊藿等
5、提取液)90mg和硫酸氨基葡萄糖30rag，加入少量的二甲基亞楓(DMSO)充分溶解后，分別用培養(yǎng)基配成濃度為l×103mg／L的工作溶液，0．221xm針孔濾器過濾除菌分裝，一20。C避光保存。l壯骨顆粒對(duì)MSCs增殖活性的測(cè)定取生長狀態(tài)良好的第三代MSCs，胰酶消化后，制成單細(xì)胞懸液，以1×104何IIll接種于96孔板，每孔中的體積分別為200斗1，24小時(shí)待所有細(xì)胞貼壁后，吸討論晚期癌癥患者多有明顯軀體不適合、情志異常。中醫(yī)認(rèn)為情志異常可導(dǎo)致臟腑．．精、氣、血、神等多方面的異常，《靈樞·本草》日：“怵惕思慮者則傷神，神傷則恐
6、懼流淫而不止，因悲哀動(dòng)中者，竭絕而失生?！边@充分說明了心理護(hù)理與疾病康復(fù)的重要性。癌痛和其他軀體癥狀常嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量口】。晚期癌癥患者的治療以對(duì)癥支持治療，減輕臨床癥狀，提高患者生活質(zhì)量，延長生存期為預(yù)期目標(biāo)。積極采取中醫(yī)護(hù)理措施，可以發(fā)揮操作簡便、療效穩(wěn)定、經(jīng)濟(jì)實(shí)惠的優(yōu)勢(shì)。加強(qiáng)與患者交流，可以減輕患者心理負(fù)擔(dān)，提高接受治療的依從性，同時(shí)在實(shí)踐中發(fā)揮中醫(yī)護(hù)理技術(shù)的參與率，提高了護(hù)理人員的工作積極性。參考文獻(xiàn)1張惠蘭，陳榮秀．癌癥護(hù)理學(xué)．天津：天津科學(xué)技術(shù)出社。1999．392袁秋影．吳雪蘭．護(hù)理干預(yù)對(duì)乳腺癌患者心理健康的影響．
7、現(xiàn)代醫(yī)院，2006，6(11)：663鄭寧，初文霞．健康教育在臨床護(hù)理中的應(yīng)用．職業(yè)與健康，2005。21(10)：1656收稿日期：2010—04—06責(zé)任編校：胡順金萬方數(shù)據(jù)出每孔培養(yǎng)液，添加壯骨顆粒和硫酸氨基葡萄糖溶液。另設(shè)空白對(duì)照組和調(diào)零組各5個(gè)復(fù)孔。培養(yǎng)8d后，M'I'T測(cè)定吸光值，測(cè)定時(shí)棄去培養(yǎng)液，PBS液沖洗3次。更換無血清的DMEM培養(yǎng)基90肛l，加入20fnlMlT(59n)，在37℃，5％CO：中孵育4小時(shí)后吸取培養(yǎng)液，加入DMS0150¨I／孔，微孔板振蕩器振蕩10分鐘，于酶標(biāo)儀上測(cè)OD值，測(cè)量波長為570nm
8、，參比波長655nm，以未接種細(xì)胞的孔作為調(diào)零孔。了解不同濃度的蛇床子素對(duì)MSCs增殖的影響。2壯骨顆粒對(duì)MSCs軟骨向分化測(cè)定取生長狀態(tài)良好的第三代MSCs0．25％的胰蛋白酶消化后，制備成單細(xì)胞懸液，以2x104似IIll按種于2
